Efecto del aceite esencial de Citrus reticulata blanco sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus y Escherichia coli

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Y PARASITOLOGÍA. IN FO. Efecto del aceite esencial de Citrus reticulata blanco. DE. sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus y. SI ST. EM. AS. Escherichia coli. TESIS. DE BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. DI. RE. CC. IO. N. DE. PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL. Autor: Br. Catherine Milagros León González Asesor: MsC. María Nelly Vásquez Valles TRUJILLO – PERU 2015. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC. AC IÓ. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. Dr. Orlando Gonzáles Nieves. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. RECTOR. IN FO. Dr. Rubén Vera Véliz. Dr. Weyder Portocarrero Cárdenas. VICERECTOR DE INVESTIGACION. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. VICERECTOR ACADÉMICO. Dr. Esteban Ilich Zerpa SECRETARIO GENERAL ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. UN IC. Dr. José Mostacero León. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. DECANO. IN FO. Dr. William Zelada Estraver. Dra. Bertha Soriano Bernilla. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. SECRETARIO. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. DI. RE. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC. AC IÓ. N. MIEMBROS DEL JURADO. M. Ms. C. Pedro Alvarado Salinas. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. PRESIDENTE. SECRETARIA. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. Ms. C. María Nelly Vásquez Valles. Ms. C. Aníbal Quintana Díaz VOCA. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. AC IÓ. N. La que suscribe, en calidad de profesora asesora de la presente tesis titulada: Efecto del aceite esencial de Citrus reticulata blanco sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus. UN IC. y Escherichia coli., declara que ésta ha sido ejecutada de acuerdo al reglamento establecido. M. por la Facultad de Ciencias Biológicas, estando en conformidad con su correspondiente. RM. ÁT. IC. A. Y. revisado acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.. CO. proyecto y con las orientaciones brindadas a la tesista. En cuanto al informe, este ha sido. IN FO. Por lo tanto, autorizo a la Bachiller CATHERINE MILAGROS LEON GONZALEZ,. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. continuar con el trámite del reglamento correspondiente.. DI. RE. Ms. C. María Nelly Vásquez Valles ASESORA. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN Los profesores que suscriben, miembros del jurado examinador, declaran que la presente informe de tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. aprobada por UNANIMIDAD.. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. PRESIDENTE. A. Y. Ms. C. Pedro Arnaldo Alvarado Salinas. SECRETARIA. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. Ms. C. María Nelly Vásquez Valles. Ms. C. Aníbal Quintana Díaz VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. A DÍOS y la VIRGEN por guiar e iluminar. N. cada paso que doy, por darme la fuerza y. AC IÓ. sabiduría para seguir adelante y permitirme. UN IC. concluir un objetivo más en mi vida.. por. demostrarme. CO. Zambrano. M. A mi amado esposo Marcos Antonio Miguel su. amor. y. A. Y. comprensión e incentivarme a superarme cada. RM. ÁT. IC. día.. enseñanzas,. dedicación,. IN FO. A mis queridos padres Marilú y Alberto por todas sus sacrificio,. confianza,. DE. comprensión, ejemplos de perseverancia y por el amor. EM. AS. que siempre me demuestran.. SI ST. A mis hermanos Segundo y Lourdes, por su. DE. apoyo y compañía en todas mis etapas, porque a. N. pesar de nuestras pequeñas diferencias siempre. DI. RE. CC. IO. están en los buenos y malos momentos.. A la bebé más hermosa del mundo, Adrianita, gracias por llegar a nuestras vidas y regalarnos tu sonrisa día a día.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. A la Ms. C. María Nelly Vásquez Valles, mi asesora, por brindarme su apoyo, dedicación, guía y. AC IÓ. N. orientación durante el desarrollo de la presente investigación.. Al Ing. Wilson Reyes por su apoyo en la extracción del aceite de Citrus reticulata blanco. UN IC. “mandarina”.. CO. M. A mi amiga Yelitza, por la ayuda brindada durante la ejecución y redacción de esta. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. investigación.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. AC IÓ. N. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO: En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados y títulos. UN IC. de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y Parasitología de la Facultad de. M. Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, presento a vuestra consideración. CO. y elevado criterio la presente tesis titulada: “Efecto del aceite esencial de Citrus reticulata. A. Y. blanco sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus y Escherichia coli, con el propósito de. ÁT. IC. obtener el Título Profesional de Biólogo - Microbiólogo. Esperando ser merecedor de vuestra. EM. AS. DE. IN FO. RM. aprobación.. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. Trujillo, Mayo del 2015.. DI. Br. Catherine Milagros León Gonzàlez. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN Se determinó el efecto inhibitorio del aceite esencial de Citrus reticulata blanco. N. sobre el cultivo de Staphylococcus aureus y Escherichia coli.. AC IÓ. El aceite se obtuvo por el método de destilación por arrastre con vapor de agua, a. UN IC. partir del flavedo de la mandarina. La inhibición del crecimiento de Staphylococcus aureus y Escherichia coli se determinó por el método de difusión de discos en agar en placas. CO. M. utilizándose concentraciones de 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 y 100% de aceite; utilizando a. Y. Eritromicina y Amikacina como controles para Staphylococcus aureus y Escherichia coli. ÁT. IC. A. respectivamente.. RM. S. aureus presentó mayor halo de inhibición de crecimiento a las concentraciones de. IN FO. 80, 90 y 100% de aceite que al control positivo (Eritromicina) ya que formó un halo de sensibilidad de mayor tamaño que al antibiótico. E. coli presentó inhibición de crecimiento a. EM. a las concentraciones del aceite.. AS. DE. la concentración de 100% pero resultó ser más sensible al control positivo (Amikacina) que. SI ST. Se concluye que S. aureus y E. coli presentan inhibición al aceite de Citrus reticulata. DE. blanco, pero es S. aureus el que presenta mayor inhibición del crecimiento.. IO. N. Palabras clave: Staphylococcus aureus, Escherichia coli, inhibición del crecimiento, aceite. DI. RE. CC. esencial, Citrus reticulata blanco, difusión de discos en agar. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT. The inhibitory effect of essential oil of Citrus reticulata white on the cultivation of. AC IÓ. N. Staphylococcus aureus and Escherichia coli was determined.. UN IC. The oil was obtained by the method of distillation by steam stripping of water from the flavedo of tangerine. The growth inhibition to Staphylococcus aureus and Escherichia coli. CO. M. were determined by the disk agar diffusion method used in concentrations of 20, 30, 40, 50,. A. ÁT. IC. Staphylococcus aureus and Escherichia coli, respectively.. Y. 60, 70, 80, 90 and 100% oil; Erythromycin and Amikacin using as controls for. RM. S. aureus showed increased halo growth inhibition to concentrations of oil 80, 90 and. IN FO. 100% positive control (erythromycin) as halo formed a larger growth inhibition to the antibiotic. E. coli showed growth inhibition to concentration of oil 100% but proved to be. AS. DE. more sensitive to the positive control (amikacin) that concentrations of oil.. EM. We concluded that S. aureus and E. coli exhibit inhibition to oil Citrus reticulata. SI ST. white, S. aureus but which has greater growth inhibition.. DE. Keywords: Staphylococcus aureus, Escherichia coli, growth inhibition, essential oil, Citrus. DI. RE. CC. IO. N. reticulat, agar disk diffusion.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÍNDICE AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO............................i. N. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ........................... iii. AC IÓ. MIEMBROS DEL JURADO MIEMBROS DEL JURADO ................................................iv. UN IC. DEL ASESOR ........................................................................................................................ v. M. APROBACIÓN .....................................................................................................................vi. CO. DEDICATORIA.................................................................................................................. vii. A. Y. AGRADECIMIENTO ........................................................................................................ viii. ÁT. IC. PRESENTACION .................................................................................................................ix. RM. RESUMEN ............................................................................................................................. x. IN FO. ABSTRACT ..........................................................................................................................xi. DE. INDICE ............................................................................................................................... xii. AS. INTRODUCCION ................................................................................................................. 1. SI ST. EM. MATERIALES Y METODOS .............................................................................................. 8. DE. Material biológico ........................................................................................................... 8. N. Procedimiento.................................................................................................................. 8. 1.1 Obtención de frutos de Citrus reticulata blanco.............................................. 8. DI. RE. CC. IO. 1. Obtención de los extractos de aceite esencial de Citrus reticulata blanco........... 8. 1.2 Obtención del aceite esencial........................................................................... 8 1.2.1. Selección ............................................................................................... 8. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Lavado y pelado .................................................................................... 9. 1.2.3. Cortado .................................................................................................. 9. 1.2.4. Extracción ............................................................................................. 9. 1.2.5. Envasado ............................................................................................. 10. 1.2.6. Almacenamiento ................................................................................. 10. M. UN IC. AC IÓ. N. 1.2.2. CO. 2. Preparación de los inóculos bacterianos ............................................................. 10. A. Y. 2.1. Obtención de los Cultivos bacterianos ........................................................ 10. ÁT. IC. 2.2. Preparación Estandarización de los inóculos bacterianos ........................... 10. RM. 3. Preparación de los discos................................................................................... 11. IN FO. 4. Preparación de las diferentes concentraciones de aceite esencial ...................... 11 5. Prueba de inhibición del crecimiento de S. aureus y E. coli ............................. 11. AS. DE. 6. Análisis Estadístico ............................................................................................ 12. EM. RESULTADOS .................................................................................................................... 13. SI ST. DISCUSIÓN......................................................................................................................... 16. N. DE. CONCLUSIÓN .................................................................................................................... 20. CC. IO. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ................................................................................. 21. DI. RE. ANEXOS .............................................................................................................................. 27 Anexo 1: Equipo de destilación por arrastre con vapor, utilizado para la extracción del aceite de Citrus reticulata blanco ....................................................................................... 28 Anexo 2: Diámetros de los halos de inhibición formado por el cultivo de Staphylococcus aureus y por el promedio de ellos, obtenidos frente a las concentraciones de 20, 30, 40, 50, xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 60, 70, 80, 90 y 100% del aceite esencial de Citrus reticulata blanco con los halos de inhibición obtenido frente Eritromicina y Etanol absoluto……………………….29 Anexo 3: Diámetros de los halos de inhibición formado por el cultivo de Escherichia coli y por. AC IÓ. N. el promedio de ellos, obtenidos frente a las concentraciones de 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 y 100% del aceite esencial de Citrus reticulata blanco con los halos de obtenido. frente. Amikacina. y. UN IC. inhibición. CO. M. absoluto…………………………………….30. Etanol. Y. Anexo 4: Halos de inhibición de crecimiento de Staphylococcus aureus frente a las. IC. A. concentraciones de 20 y 30% de aceite esencial de Citrus reticulata blanco y frente a. RM. ÁT. Eritromicina.……………………………………………………..………….………31. IN FO. Anexo 5: Halos de inhibición de crecimiento de Staphylococcus aureus frente a las concentraciones de 40 y 50% de aceite esencial de Citrus reticulata blanco y frente a. AS. DE. Eritromicina…………………………………………………………….…................32. EM. Anexo 6: Halos de inhibición de crecimiento de Staphylococcus aureus frente a las. SI ST. concentraciones de 60 y 70% de aceite esencial de Citrus reticulata blanco y frente a. DE. Eritromicina……………………………………………………………………….33 Anexo 7: Halos de inhibición de crecimiento de Staphylococcus aureus frente a las. IO. N. concentraciones de 80 y 90% de aceite esencial de Citrus reticulata blanco y a. CC. frente. RE. Eritromicina……………………………………………………………………...34. DI. Anexo 8: Halos de inhibición de crecimiento de Staphylococcus aureus frente a la concentración de 100% de aceite esencial de Citrus reticulata blanco y frente a Eritromicina………………………………………………………………………..3 5. xiv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 9: Halos de inhibición de crecimiento de Staphylococcus aureus frente a los controles Eritromicina. y. etanol…………………………………………………………..……36. AC IÓ. N. Anexo 10: Halos de inhibición de crecimiento de Escherichia coli frente a las concentraciones de 20, 30 y 40% de aceite esencial de Citrus reticulata blanco y frente a. UN IC. Amikacina…………………………………………………………………………3. CO. M. 7. A. aceite esencial de Citrus reticulata blanco y frente a. IC. 50, 60 y 70% de. Y. Anexo 11: Halos de inhibición de crecimiento de Escherichia coli frente a las concentraciones de. RM. ÁT. Amikacina…………………………………………………………………….…...38. IN FO. Anexo 12: Halos de inhibición de crecimiento de Escherichia coli frente a las concentraciones de. 80, 90 y 100% de aceite esencial de Citrus reticulata blanco y frente a. DE. Amikacina…………………………………………………………………………...3. EM. AS. 9. SI ST. Anexo 13: Halos de inhibición de crecimiento de Escherichia coli frente a los controles Amikacina. y. IO. N. DE. etanol………………………………………………………………40. CC. Anexo 14: Análisis estadístico realizados a los halos de sensibilidad de Staphylococcus aureus a. DI. RE. las diferentes concentraciones del aceite de Citrus reticulata blanco, frente a los controles Eritromicina y etanol……………………………………………………...41. Anexo 14A: Análisis de varianza (ANOVA) unidireccional: Halo de Staphylococcus aureus. (mm). comparados. con. tratamientos….……………………..……………….41. xv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 14B.1: Prueba DUNNET para comparar los tratamientos con el Testigo (etanol), en la evaluación. de la longitud de halo formado en Staphylococcus. aureus……………..........................................................................................42. AC IÓ. N. Anexo 14B.2: Prueba DUNNET para comparar los tratamientos con el Testigo (Eritromicina), en la evaluación de la longitud de halo formado en. UN IC. Staphylococcus aureus.……………………………………………….…….43. M. Anexo 14C: Comparaciones Múltiples de Duncan de la evaluación de la longitud de halo. CO. formado en Staphylococcus aureus………………………………………....44. A. Y. Anexo 15: Análisis estadístico realizados a los halos de sensibilidad de Escherichia coli a las. ÁT. IC. diferentes concentraciones del aceite de Citrus reticulata blanco, frente a los controles. IN FO. RM. Amikacina y etanol…………………………………………………………………..45 Anexo 15A: Análisis de varianza (ANOVA) unidireccional: Halo de Escherichia coli comparados. con. DE. (mm). AS. tratamientos…………………………………………….….45. evaluación. SI ST. la. EM. Anexo 15B.1: Prueba DUNNET para comparar los tratamientos con el Testigo (etanol), en de. la. longitud. de. halo. formado. en. Escherichia. DE. coli……………………………………………………………….…………...46. (Amikacina), en la evaluación de la longitud de halo formado en Escherichia coli…………………........................................................................................47. RE. CC. IO. N. Anexo 15B.2: Prueba DUNNET para comparar los tratamientos con el Testigo. DI. Anexo 15C: Comparaciones Múltiples de Duncan de la evaluación de la longitud de halo formado en Escherichia coli……………………………………………..….48. xvi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN En la actualidad ha surgido la necesidad de buscar alternativas de conservación de. N. los alimentos, esto debido a que se ha asociado el consumo de conservadores químicos. AC IÓ. con intoxicaciones1. Por ello, en los últimos años se han realizado muchas. UN IC. investigaciones, que han demostrado el poder antimicrobiano de los aceites esenciales,. M. especialmente los extraídos de frutas cítricas.. CO. En estos estudios se puede mencionar el de Dabbah et al.2 (1970), quienes. Y. encontraron que los aceites esenciales de mandarina, naranja y toronja mostraron tener. A. antibacteriana contra cepas bacterianas de: Staphylococcus aureus,. IC. actividad. RM. ÁT. Escherichia coli, Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa y Salmonella entre otras.. IN FO. Asimismo, el trabajo de Morales3 en 1996 demostró que el aceite esencial de lima posee una actividad antibacteriana contra Vibrio cholerae, Yersinia enterocolitica y. DE. Streptococcus lactis.. EM. AS. En la actualidad se habla de las virtudes de los aceites esenciales y según la. SI ST. farmacopea francesa, son productos generalmente muy complejos que contienen sustancias volátiles de origen vegetal, más o menos modificadas por los procesos de. DE. extracción y conservación4. Los aceites esenciales cubren un amplio espectro de. IO. N. actividades tales como efectos farmacológicos, antiinflamatorios, antioxidantes y. CC. anticancerígenos. Otros son biocidas contra una amplia gama de organismos como. DI. RE. bacterias, hongos, virus, protozoos, insectos y plantas1, 5. Según Guenther en 1948, los aceites esenciales pueden considerarse como. compuestos olorosos presentes en los vegetales, de los que se extraen; suelen ser líquidos e insolubles en agua. Son volátiles en corriente de vapor y se evaporan con. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. velocidades diferentes, a la temperatura ambiental y presión atmosférica ordinaria. Sostiene que de ahí la existencia de términos tales como aceites “volátiles o etéreos”6. También se ha estudiado la importancia de estos aceites debido a su. AC IÓ. N. disponibilidad, a los pocos efectos secundarios o a la toxicidad que pueden causar, así como la mejor biodegradabilidad comparado con antibióticos y preservativos. UN IC. disponibles12. Por todas estas propiedades, se ha evaluado el control que pueden. M. ejercer estos compuestos contra microorganismos patógenos en alimentos, y por tanto. Y. CO. la posibilidad de ser utilizados como un método de eliminación7.. IC. A. Según Maguna, Nuñez, Okulik y Castro en el 2005, han encontrado que la. ÁT. actividad antimicrobiana presentada por los aceites esenciales es debido a la presencia. RM. de un tipo de compuestos denominados “terpenoides”8. El mecanismo de acción. IN FO. propuesto para los terpenoides consiste en la disrupción de la membrana bacteriana,. DE. destacando los derivados terpénicos oxidados, representados en primer lugar por los. AS. derivados fenólicos, timol y carvacrol, los cuales se unen a los grupos amino e. EM. hidroxilamino de las proteínas de la membrana bacteriana, lo que conduce a la. SI ST. modificación de su permeabilidad y origina la muerte de la bacteria. Los derivados. DE. alcohólicos y cetónicos, tales como linalol, geraniol, citral, alcanfor, etc., poseen. N. igualmente propiedades antibacterianas, si bien menos marcadas que las de timol y. CC. IO. carvacro8, 9.. DI. RE. Conner en 1993 sugirió que la actividad antimicrobiana de los aceites esenciales,. se basa en el deterioro de varios sistemas enzimáticos, incluídos aquellos involucrados. en la producción de energía y en la síntesis de componentes estructurales. Una vez que el compuesto fenólico cruza la membrana celular, puede interactuar con las enzimas y. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. con las proteínas causando un flujo contrario de protones a través de ella, afectando así a la actividad celular10, 11. Estos resultados hacen relevante el estudio de los aceites esenciales especialmente. AC IÓ. N. de cítricos debido a la gran importancia que tienen para la industria farmacéutica y de alimentos. Se sabe que los aceites esenciales, utilizados como aditivos en los. UN IC. alimentos tienen efecto antimicrobiano y actúan al mismo tiempo como saborizantes3.. CO. M. Citrus reticulata blanco “mandarina” es el fruto del mandarino, árbol de la. Y. familia de las rutáceas muy similar al naranjo, aunque algo más pequeño y delicado.. IC. A. Los frutos, llamados hespérides, tienen la particularidad de que su pulpa está formada. ÁT. por numerosas vesículas llenas de jugo. Su pequeño tamaño, su sabor más aromático y. IN FO. RM. la facilidad de quitar su piel, hacen de esta fruta una de las más apreciadas12. Existen dudas respecto a su origen, aunque se sabe con certeza que se ha cultivado. DE. en China durante varios milenios, remontándose la primera referencia de este fruto al. AS. siglo XII a.C. Su nombre se atribuye al color de las togas que utilizaban los altos. SI ST. asiático12.. EM. gobernantes de la antigua China. Desde allí se extendió a gran parte del sureste. DE. Sus variedades se dividen en cuatro grandes grupos: Las clementinas, de color. IO. N. naranja intenso, de forma esférica aplanada y lo común es que carezcan de semillas.. CC. Se consideran un cruce entre la mandarina y una naranja silvestre de Argelia. Se pelan. DI. RE. con facilidad y tienen muy buen sabor; las clementillas, de tamaño más grande que las anteriores, de corteza naranja rojiza y con mucho zumo; los híbridos, frutos de buen tamaño y color naranja rojizo muy atractivo. La pulpa posee gran cantidad de zumo y es abundante en azúcares y ácidos orgánicos. La corteza está muy adherida a la pulpa; y la satsuma, originaria de Japón y presenta un exquisito aroma. Las frutas son de 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. color amarillo naranja o naranja asalmonado, de buen tamaño, forma achatada y con propensión a hincharse cuando la corteza inicia el cambio de color. La corteza es gruesa y rugosa, y la pulpa de menor calidad gustativa. Las principales zonas. AC IÓ. N. productoras son Lima (Huaral y Cañete) y Junin12. De la mandarina, no solamente se aprovechan los jugos alimenticios, sino que de. UN IC. la cáscara de la mandarina se puede obtener el aceite que se utiliza como aromatizante. M. en diferentes industrias. Su aceite esencial es uno de los ingredientes básicos en las. Y. CO. industrias de perfumería alimentaria y farmacéutica13.. IC. A. La industria de los cítricos en Perú se encuentra en constante crecimiento debido. ÁT. principalmente a la demanda de naranja, mandarina y recientemente limón13. Lozano. RM. en el 2005 afirma que en el Perú se cultivan algunas variedades de mandarina, entre. IN FO. las cuales destacan las variedades, Satsumas (Okitsu, Owari y Clausellina),. DE. Clementinas (Clementina Fina, Oroval, Clemenules, Marisol, Oronules, Clemenpons,. AS. Esbal, Loretina, Hernandina), Tangerinas y Tangelos. Teniendo en cuenta que en. EM. general el flavedo de la mandarina se desecha, existe la posibilidad de viabilizar de. SI ST. manera comercial la extracción del aceite esencial del mismo mediante arrastre con. DE. vapor de agua14.. IO. N. Cáceres en 1996 y Bergonzelli en el 2003 extrajeron aceite esencial del flavedo de. CC. la mandarina Citrus reticulata Blanco o Citrus tangerina (Mandarina Dancy) para. DI. RE. efectuar pruebas fitofarmacéuticas, comprobando que este aceite esencial presentaba capacidad inhibitoria hacia el crecimiento de bacterias tales como: Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Helicobacter. pilori y Salmonella sp. que resultan ser patógenas para el hombre15, 16.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Staphylococcus es un representante de la familia Staphylococcaceae, incluyendo a 35 especies y 17 subespecies, muchas de las cuales se encuentran en los humanos, y solamente 18 especies han sido reportadas de importancia en alimentos, siendo. AC IÓ. N. Staphylococcus aureus la más relevante17, 18. Morfológicamente los Staphylococcus son cocos Gram positivos, facultativos, que. UN IC. pueden crecer tanto en condiciones con oxígeno como carente de éste. Su máxima. M. velocidad de crecimiento está entre 5 a 25 °C; pero también se puede ver en activa. CO. fisión binaria entre 30 y 27 °C. Además, producen catalasa, lo que los diferencia de. IC. A. Y. los estreptococos17, 19.. una bacteria anaerobia. facultativa, Gram. RM. es. ÁT. S. aureus conocido como estafilococo áureo, o comúnmente estafilococo dorado, positiva,. productora. IN FO. de coagulasa, catalasa, inmóvil y no esporulada que se encuentra ampliamente. DE. distribuida por todo el mundo17, 20.. AS. Las enterobacteriaceas son una familia de bacterias Gram negativas que contienen. EM. más de 30 géneros y más de 100 especies. Escherichia coli forma parte de la familia. SI ST. Enterobacteriaceae. Ella está integrada por bacilos Gram negativos no esporulados,. DE. móviles con flagelos peritricos o inmóviles, aerobios-anaerobios facultativos21, 22.. IO. N. E. coli es una bacteria que se encuentra normalmente en el intestino del ser. CC. humano y de los animales de sangre caliente. La mayoría de las cepas de E. coli son. DI. RE. inofensivas. Sin embargo algunas de ellas, como E. coli enterohemorrágica (EHEC), pueden causar graves enfermedades a través de los alimentos. La bacteria se transmite al hombre principalmente por el consumo de alimentos contaminados, como productos de carne picada cruda o poco cocida, leche cruda, y hortalizas y semillas germinadas crudas contaminadas21, 23. 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. EHEC puede crecer a temperaturas que oscilan entre 7 °C y 50 °C, con una temperatura óptima de 37 ºC. Algunas EHEC pueden proliferar en alimentos ácidos, hasta a un pH de 4,4, y en alimentos con una actividad de agua mínima de 0,95. Se. N. destruye cociendo los alimentos hasta que todas las partes alcancen una temperatura. AC IÓ. de 70 °C o más21, 23.. UN IC. En la actualidad uno de los principales problemas de las grandes compañías. M. procesadores de alimentos es la conservación y preservación de sus productos. CO. alimenticios; ya que estos, pueden ser un vehículo de transmisión de microrganismos. A. Y. patógenos y por tanto tienen gran trascendencia en la salud de los consumidores, por. RM. reemplazo de los conservadores sintéticos.. ÁT. IC. tal motivo se ven en la necesidad de recurrir a la búsqueda de productos naturales en. IN FO. Actualmente se conocen muchas técnicas para el control e inhibición de. DE. microorganismos con el fin de preservar los alimentos, una de éstas es la adición de. AS. sustancias de origen natural que le provean al alimento calidad microbiológica y al porque relacionan los. EM. mismo tiempo permitan sustituir los aditivos químicos,. SI ST. compuestos químicos con alergias y enfermedades diversas.. DE. Teniendo en cuenta que la industria de los cítricos en el Perú se encuentra en. IO. N. constante crecimiento debido principalmente a la demanda de limón, naranja, toronja y. CC. recientemente de mandarina, y que el flavedo tiene una buena proporción de aceite, así. DI. RE. mismo, por lo anterior y debido a que el aceite esencial de Citrus reticulata blanca es utilizada en Perú como en muchos países como saborizantes o en combinación con otros aceites esenciales, en extractos o jugos de fruta, para dar sabor a diversos alimentos como son refrescos, productos horneados, dulces, quesos, jarabes, etc.10, y que S. aureus y E. coli pueden estar en alimentos y ser agentes causales de. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. intoxicación o infección es que se realizó el presente estudio con la finalidad de determinar el Efecto Inhibitorio del aceite esencial de Citrus reticulata blanco sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus y Escherichia coli .. AC IÓ. N. El presente trabajo tiene como objetivos:. Determinar el efecto inhibitorio del aceite esencial de Citrus reticulata. M. -. UN IC. Objetivo general:. Y. CO. blanco sobre el cultivo de Staphylococcus aureus y Escherichia coli.. ÁT. Obtener el aceite esencial de Citrus reticulata blanco mediante el. RM. -. IC. A. Objetivos específicos:. -. IN FO. método de arrastre por vapor de agua. Determinar los halos de inhibición del cultivo de Staphylococcus y Escherichia coli a diferentes concentraciones del aceite. DE. aureus. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. esencial de Citrus reticulata blanco.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODOS MATERIAL BIOLÓGICO -. N. Cultivos de Staphylococcus aureus y Escherichia coli, proporcionados por el. AC IÓ. Laboratorio de Microbiología y Tecnología de Alimentos de la Universidad. UN IC. Nacional de Trujillo.. Flavedo de Citrus reticulata blanco variedad Satsuma “mandarina”, obtenidos en el. -. A. Y. CO. M. mercado “La Hermelinda” de Trujillo.. ÁT. Obtención del extracto de aceite esencial de Citrus reticulata blanco. RM. 1.. IC. PROCEDIMIENTO. IN FO. 1.1. Obtención de frutos de Citrus reticulata blanco.. DE. Se adquirió 30 kg de frutos de mandarina variedad Satsuma en el mercado. AS. “La Hermelinda” de Trujillo, en estado de madurez fisiológica y se trasladó al. SI ST. EM. laboratorio de Investigación de Química Física de la Facultad de Ingeniería .. DE. Química de la Universidad Nacional de Trujillo. IO. N. 1.2. Obtención del aceite esencial. DI. RE. CC. 1.2.1. Selección Se utilizaron mandarinas que no presentaron magulladuras, cortes o demás lesiones en su flavedo.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 1.2.2. Lavado y pelado Se utilizó agua de caño con el propósito de eliminar restos de. AC IÓ. adheridos a la materia prima, posteriormente se pelaron los frutos.. N. partículas extrañas, suciedad y restos de tierra y pesticidas que puedan estar. UN IC. 1.2.3. Cortado. pequeños. M. Se extrajo la parte blanca de la cáscara y se cortó en. CO. pedazos solo el flavedo de las mandarinas, para aumentar el área de contacto. IC. A. Y. con el vapor de agua.. RM. ÁT. 1.2.4. Extracción. IN FO. Se realizó con un equipo de extracción por arrastre con vapor (Anexo 1) en donde se colocaron 500 g del flavedo en un balón de 2000 mL el cual. DE. estuvo conectado con otro balón con una cantidad adecuada de agua. AS. (adicionando algunas piedras de ebullición) mediante un tubo conector, que. SI ST. EM. llegó hasta el fondo del balón con la cáscara, el extremo superior de este. DE. balón estuvo conectado a un condensador. El balón fue calentado en una cocina hasta alcanzar la temperatura de. DI. RE. CC. IO. N. ebullición del agua, de tal forma que el vapor pasó a través de la muestra y del condensador, y así se obtuvo el aceite esencial, este fue recolectado en un embudo de decantación para posteriormente decantar el aceite esencial. Para separar la fase acuosa de la oleosa, se utilizó una aguja con una. jeringa.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El tiempo de extracción estuvo en el rango de 60 a 150 min, contándose desde el instante en el que cayó la primera gota en la pera de decantación25.. AC IÓ. N. 1.2.5. Envasado. UN IC. El aceite fue envasado en frascos ámbar, debido a que son inestables. M. fotoquímicamente.. Y. CO. 1.2.6. Almacenamiento. IC. A. Se conservó en refrigeración a una temperatura de 4 ºC para su uso. RM. ÁT. posterior.. IN FO. 2.- Preparación de los inóculos bacterianos. DE. 2.1. Obtención de los Cultivos de S. aureus y E. coli. AS. Los cultivos bacterianos que se utilizaron para comprobar la actividad. EM. antibacteriana del aceite esencial fueron: S. aureus y E. coli, proporcionados por el. SI ST. Laboratorio de Microbiología y Tecnología de Alimentos de la Universidad. DE. Nacional de Trujillo.. IO. N. Cada cultivo bacteriano fue reactivado en agar común por 10-12 horas a 37. RE. CC. °C para S. aureus y por 8-10 horas a 37 °C para E. coli.. DI. 2.2. Preparación y estandarización de los inóculos bacterianos A partir de cada uno de los cultivos bacterianos se realizó una suspensión en agua destilada estéril hasta alcanzar la turbidez equivalente al tubo N°0.5 del Nefelómetro de Mac Farland (1.5 x 108 UFC/mL). 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 3.- Preparación de los discos Se prepararon discos de papel filtro Watman N°2 de 0.6 mm. de diámetro, se los esterilizó en autoclave a 121ºC por 15 minutos en un vial y luego se dejaron. AC IÓ. N. secar en la estufa durante 12 horas.. UN IC. 4.-Preparación de las diferentes concentraciones de aceite esencial. M. El aceite obtenido fue considerado como el tratamiento al 100%, a partir del cual se. CO. realizaron las diluciones necesarias hasta obtener las concentraciones de 20, 30, 40, 50,. A. Y. 60, 70, 80 y 90% de aceite de Citrus reticulata blanco; se utilizó como solvente etanol. ÁT. IC. absoluto. Se tuvo en cuenta que las concentraciones preparadas no estuvieran en contacto. RM. con la luz, debido a que es fotosensible.. IN FO. 5.- Prueba de inhibición del crecimiento de S. aureus y E. coli. DE. La actividad antibacteriana del aceite de Citrus reticulata blanco se determinó. EM. SI ST. placas26, por triplicado.. AS. utilizando los cultivos bacterianos, siguiendo la técnica de discos de difusión en agar en. DE. Se tomó 0.5mL de inóculo con una pipeta estéril y se vertió en la superficie de cada placa que contenía agar Muller Hinton. La siembra se realizó en toda la superficie de. IO. N. forma homogénea con el asa de Digralsky. Posteriormente se secó la superficie de cada. DI. RE. CC. placa en la estufa a 37ºC por 15 minutos. A cada placa se le colocaron los discos estériles embebidos con las distintas. concentraciones del aceite esencial, luego las placas se llevaron a incubar a 37°C por 24 horas.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. También se realizaron placas control utilizando discos de los antibióticos Eritromicina y Amikacina como controles para Staphylococcus aureus y Escherichia coli respectivamente y discos embebidos con etanol absoluto para ambas bacterias.. AC IÓ. N. El efecto del aceite esencial se determinó midiendo el halo de inhibición del crecimiento, el tamaño de esta zona de inhibición indicó si las bacterias objeto de análisis. UN IC. tienen una sensibilidad alta, intermedia o baja frente a las concentraciones del aceite1, 27,. CO. M. 28,29.. A. Y. 6.- Análisis Estadístico. ÁT. IC. Los resultados están presentados en cuadros, mostrando los diámetros de los halos. RM. de inhibición de crecimiento.. IN FO. Además, los halos de inhibición de crecimiento (mm) de Staphylococcus aureus y. DE. Escherichia coli fueron analizados a través del ANOVA, pruebas de comparación. AS. múltiple de Dunnet y Duncan con un intervalo de confianza del 95% si presentaban. SI ST. EM. diferencia significativa (p<0.05).. DI. RE. CC. IO. N. DE. .. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. N. En la Fig. 1 se observa las medidas de los halos de inhibición del crecimiento (mm). AC IÓ. de Staphylococcus aureus por la acción del aceite esencial de Citrus reticulata blanco a las. UN IC. concentraciones de 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 y 100% y los grupos controles representados por etanol y el antibiótico Eritromicina. La figura muestra que a concentraciones bajas (20 al. CO. M. 70%) del aceite el halo de sensibilidad es menor que el grupo control representado por. Y. Eritromicina (p<0.05), por el contrario a concentraciones altas (80, 90 y 100%) del aceite se. IC. A. incrementa el diámetro del halo de sensibilidad (p<0.05). El control representado por etanol,. RM. ÁT. no presenta halo de sensibilidad.. IN FO. En la Fig. 02 se observa la medida de los halos de inhibición del crecimiento (mm) de Escherichia coli por la acción de las diferentes concentraciones de aceite esencial de Citrus. DE. reticulata blanco y los grupos controles representados por etanol y el antibiótico Amikacina.. AS. La figura muestra que a todas las concentraciones analizadas, Escherichia coli,. forma. EM. pequeños halos de sensibilidad (p<0.05). El control representado por etanol, no presenta halo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. de sensibilidad.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) M UN IC AC IÓ. Halos de de inhibición del crecimiento (mm) de Staphylococcus aureus. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 35.0. CO. 30.0. Eritromicina. Y. Etanol. RM ÁT. IC. A. 25.0 20.0. IN FO. 15.0. AS. DE. 10.0. EM. 5.0. SI. ST. 0.0. 30% 40%. 50% 60%. 70%. 80%. 90% 100% Eritromicina. Aceite de Citrus reticulata blanco. CC I. O. N. DE. Etanol 20%. RE. Fig. 1 Diámetro promedio en mm de los halos de inhibición del crecimiento de Staphylococcus aureus frente a la acción antibacteriana. DI. del 20%, 30%,40%,50%,60%,70%, 80%, 90% y 100% del aceite esencial de Citrus reticulata blanco.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) M UN IC AC IÓ. 30.0. CO. 25.0. Eritromicina Etanol. IC. A. Y. 20.0. RM ÁT. 15.0. IN FO. 10.0. AS. DE. 5.0. 0.0. 30% 40%. 50%. 60%. 70%. 80%. 90% 100% Amikacina. Aceite de Citrus reticulata blanco. DE. SI. ST. Etanol 20%. EM. Halos de inhibición del crecimiento (mm) de Escherichia coli. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CC I. O. N. Fig. 2 Diámetro promedio en mm de los halos de inhibición del crecimiento de Escherichia coli frente a la acción antibacteriana del 20%,. DI. RE. 30%,40%,50%,60%,70%, 80%, 90% y 100% del aceite esencial de Citrus reticulata blanco.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN El control microbiano mediante el uso de aceites esenciales se ha convertido en una de las áreas de investigación más importantes con la finalidad de sustituir conservadores. AC IÓ. N. sintéticos por naturales30,31,32. Actualmente los consumidores demandan productos naturales, esto ha aumentado el interés en buscar nuevas formas para la conservación de los alimentos. UN IC. en base a productos naturales, es por ello, que han surgido investigaciones que utilizan los. M. aceites esenciales como conservantes naturales9,33, por eso se desarrolló este trabajo con la. Y. CO. finalidad de conocer el poder antimicrobiano del aceite esencial obtenido de la mandarina2,34.. IC. A. Los resultados obtenidos en los ensayos sobre el efecto del aceite esencial de Citrus. ÁT. reticulata blanco sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus y Escherichia coli indicarían. IN FO. RM. que dicho aceite presenta propiedades antimicrobianas.. En la figura 1, se muestran los diámetros de los halos de inhibición de crecimiento del. cultivo. de. Staphylococcus. DE. (mm). aureus. a. las. concentraciones. del. 20%,. EM. AS. 30%,40%,50%,60%,70%, 80%, 90% y 100% del aceite esencial de Citrus reticulata blanco. SI ST. comparada con los controles Etanol y Eritromicina. Se observa que los halos de inhibición de crecimiento formados a las concentración de 80 y 90% del aceite respecto al halo de. DE. inhibición de crecimiento formado por Eritromicina presentan p>0.05, lo que significa que no. IO. N. existe diferencia significativa entre la eficacia de estos tratamientos, indicando que tienen el. CC. mismo efecto sobre Staphylococcus aureus (Anexo 14: B.2); mientras que el halo formado a. RE. la concentración del 100% de aceite supera al halo formado por el antibiótico Eritromicina,. DI. presentando un p<0.05, lo cual indica que el halo de inhibición de crecimiento formado por el aceite al 100% es significativamente mayor al formado por el control positivo (Eritromicina). Según la bibliografía, a las concentraciones de 50, 60, 70 y 80% se observa formación de. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. halos de inhibición de crecimiento, en tanto que a concentraciones menores, no se observa formación de halo35, 36. La inhibición de crecimiento podría atribuirse a dos. mecanismos de acción: el. AC IÓ. N. primero es relacionado la inhibición de las enzimas y receptores bacterianos a través de. permite al aceite esencial insertarse en la bicapa fosfolipídica 9,37.. UN IC. uniones con sitios específicos, y el segundo es relacionado a su hidrofobicidad el cual le. CO. M. A través de su estructura hidrofóbica, los aceites esenciales son capaces de afectar la. Y. membrana bacteriana y cambiar su permeabilidad; esto causa un flujo de salida desde el. IC. A. interior de la célula hacia el exterior. La salida de iones es usualmente acompañado con otros. ÁT. constituyentes citoplasmáticos, y hasta una cierta cantidad de pérdida puede ser tolerada por. IN FO. RM. la célula bacteriana sin perder la viabilidad, pero si el flujo de salida es más prolongado, eso causaría el colapso de la célula. La importancia del grupo hidroxilo en determinar el poder. DE. antimicrobiano ha sido confirmado, desde que se han encontrado compuestos fenólicos, como. AS. el timol y carvacrol, que tienen una alta actividad antimicrobiana9,37.. SI ST. EM. Bergonzelli et. al. en 2003, en su estudio sobre la caracterización de los componentes del aceite de algunos cítricos como la mandarina, la naranja, la lima y la Toronja han. DE. demostrado que poseen los siguientes compuestos como componentes mayoritarios:. IO. N. limoneno, α-pineno, β-pineno, mirceno, p-cimeno, γ-terpineno, linalol, acetato de linalilo, α-. CC. terpineol, citronelol, acetato de geranilo, N-metil antranilato de metilo, entre otros16. La. RE. identificación del componente principal de estos cítricos lo llevó a cabo mediante. DI. cromatografía de gases, su estudio determinó que el más del 90% del aceite de Citrus reticulata blanco lo compone el limoneno el cual presenta una gran capacidad inhibitoria de. crecimiento bacteriano en los alimentos, principalmente sobre las bacterias Gram positivas38.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Por otra parte, en la figura 2, se muestran los diámetros de los Halos de inhibición de crecimiento (mm). de Escherichia coli. frente a la acción antibacteriana del 20%,. 30%,40%,50%,60%,70%, 80%, 90% y 100% del aceite esencial de Citrus reticulata blanco. AC IÓ. N. comparada con los controles Etanol y Amikacina, presentando un p<0.05, lo cual indica que Escherichia coli es menos sensible al aceite de Citrus reticulata blanco que al antibiótico. UN IC. Amikacina (Anexo 15: B.2).. CO. M. Durante el ensayo se observó que Escherichia coli presentó menor inhibición al aceite esencial de Citrus reticulata blanco que Staphylococcus aureus, estos resultados son. A. Y. similares a trabajos encontrados anteriormente 39,40, ésta diferencia se debería a la estructura. ÁT. IC. de sus membranas ya que las bacterias Gram negativas, poseen una pared celular más. RM. compleja compuesta por dos capas situadas por fuera de la membrana citoplasmática, la. IN FO. primera y más cercana a la membrana es similar a la de las bacterias Gram positivas,. DE. constituida por péptidoglicanos, la segunda denominada membrana externa está constituida. AS. por fosfolípidos con ácidos grasos saturados y entre las dos capas se halla un espacio. EM. periplásmico rico en enzimas, esta estructura les confiere un mayor grado de resistencia a los. SI ST. agentes antimicrobianos41,42.. DE. Basándose en trabajos anteriores39,40 y de acuerdo a los resultados obtenidos, se. N. puede afirmar que Staphylococcus aureus presentó mayor inhibición al aceite de Citrus. CC. IO. reticulata blanco que Escherichia coli y que este efecto inhibitorio contra las cepas Gram. RE. positivas es debido a los componentes propios del aceite así como también a la estructura y. DI. constitución de las membranas de las bacterías43,44. En los Anexos 9 y 13, se evidencia que Staphylococcus aureus y Escherichia coli no son sensibles al control etanol absoluto, ya que no se observó la formación de halos, mostrando la resistencia de estos microorganismos al disolvente. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Los resultados obtenidos en el presente trabajo constituyen una alternativa a seguir siendo evaluados, dado que Citrus reticulata blanco es un recurso natural asequible para las industrias, sería importante su incorporación como conservante natural. Por lo que el aceite. AC IÓ. N. esencial de Citrus reticulata blanco se presenta como una promisoria posibilidad que debe continuar estudiándose, debido a que puede evitar la invasión de organismos alteradores o. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. patógenos45,46.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES . Staphylococcus aureus y Eschericia coli son sensibles a las diferentes concentraciones del aceite esencial de Citrus reticulata blanco.. N. Las concentraciones de 80, 90 y 100% de aceite esencial de Citrus reticulata. AC IÓ. . UN IC. blanco son más eficaz contra Staphylococcus aureus que el antibiótico Eritromicina.. M. El aceite de Citrus reticulata blanco es más eficaz contra Staphylococcus aureus. CO. . DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. que contra Escherichia coli.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Hersom, A.C y E.D. Hulland. Conservas Alimenticias. Editorial Acribia S.A.. N. Zaragoza. España. 1974; pp. 61-62.. AC IÓ. 2. Dabbah, R., V.M. Edwards y W.A. Motas. Antimicrobial Activity of Some Citrus. UN IC. Fruits Oils on Selected Food-Borne Bacteria. Appl. Microbiology. 1970; 19 (1): pp.. M. 27-31.. CO. 3. Morales V. Extracción y caracterización del aceite esencial de Lima Thaití Citrus. A. Y. aurantiifolia. (Chritms) Swingle. Trabajo especial de grado. LUZ. Facultad. ÁT. IC. Experimental de Ciencias, Maracaibo, Venezuela. 1996; pp. 18-19.. RM. 4. Bruneton, J. Farmacognosia. Fitoquímica. Plantas Medicinales. 2ª ed. Editorial. IN FO. Acribia S.A. Zaragoza. España. 2001; pp. 1099.. DE. 5. Smith P., Stewart J. y Fyfe L. Antimicrobial properties of plant essential oils and. AS. essences against five important food-borne pathogens. Letters in Applied.. EM. Microbiology. 1998. 26 (2): pp. 118-122.. SI ST. 6. Guenther, E. The Essential Oils. Volume I-VI. 3ª ed. Editorial Van Nostrand. DE. Company. New York. US. 1948.. IO. N. 7. Conner D, Beuchat L. Effects of essential oils form plants on growth of food spoilage. CC. yeasts. J. food Sci. 1984. 49: pp.429-434.. DI. RE. 8. Maguna F, Nuñez M, Okulik N, Castro E. Relación entre la estructura molecular de terpenoides y su actividad antimicótica sobre Candida albicans. Facultad de. Agroindustrias UNNE, Chaco Argentina 2005.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 9. Helander I, Alakomi H, Latva-Kala K, Irene T, Leon E, Gorris et al. Characterization of the action of selected essential oil components on gram-negative bacteria. J. Agric Food Chem. 1998; 46: pp.3590-3595.. AC IÓ. N. 10. Conner D. Naturally occurring compounds, Antimicrobials in foods. New York. 1993.. UN IC. pp. 441-468.. 11. Stashenko E. “Comparación de la composición y de la actividad antioxidante in vitro. CO. M. de los metabolitos secundarios volátiles de plantas de la familia Verbenaceae” revista. Y. de la academia Colombiana de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales. 27 (105): pp.. IC. A. 579-596.. ÁT. 12. Barret, D.M., Somogui, Laszio, S., Ramaswamy, H. Lemons and orange fruits.. RM. Processing Fruits, Science and Technology, 2ª ed. Editorial CRC Press. 2005; pp.25-. IN FO. 26.. DE. 13. Díaz J. Análisis del mercado internacional de aceites esenciales y aceites vegetales.. EM. AS. Instituto Alexander Von Humboldt-Biomercio Sostenible. Bogotá, Colombia. 2002.. SI ST. 14. Lozano A, Loarca G, Lecona S, Mejía E. El orégano: Propiedades, Composición Y Actividad Biológica De Sus Componentes. Archivos Latinoamericanos de Nutrición.. DE. 2005. pp.4.. IO. N. 15. Cáceres, A. Plantas de Uso Medicinal en Guatemala. Primera Edición. Editorial. CC. Universitario. Universidad de San Carlos de Guatemala. 1996. pp.150-155, 228-230,. DI. RE. 283-286.. 16. Bergonzelle E, Donnicola D, Porta N, Cortéis E. Essential oils as components of a diet-based approach to management of Helicobacter infection. J. Antimicrob Agents Chemother 2003; 47(10): 3240-6.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 17. Brezzo C, Cecchini D, Biscione F, y col. Enfermedad invasora por Staphylococcus aureus meticilino resistente adquirida en la comunidad. Buenos Aires. 2006; 66: 4436.. AC IÓ. N. 18. Insituto Nacional de Salud. Ministerio de la Protección Social. Evaluación de riesgos de Staphylococcus aureus enterotoxigénico en alimentos preparados no industriales en. UN IC. Colombia. 2010.. M. 19. Benenson A. Manual para el control de las enfermedades transmisibles. Rev. Esp. de. CO. Salud Pública. 1997; 71: pp.499-500. Y. 20. Perdomo I, Melendez P. Determinación y aislamiento de Staphylococcus aureus y. IC. A. Clostridium perfringens enterotoxigenicos apartir de alimentos. Rev. Col. Cienc.. RM. ÁT. Quim. Farm. 2004; 33(1): pp.59-69.. IN FO. 21. Chinen I, Tanaro JD, Miliwebsky E, Lound LH, Chillemi G, Ledri S, Baschkier A, Scarpin M, Manfredi E, Rivas M. Isolation and characterization of Escherichia coli. DE. O157:H7 from retail meats in Argentina. J. Food Prot. 2001; 64: pp.1346-1351.. AS. 22. Faleiro P. Formación de biopelículas por “Escherichia Coli” y su correlación con. EM. factores de virulencia: prevención y actividad de antimicrobianos frente a organismos. SI ST. planctónicos y asociados a biopelículas. Madrid: Universidad complutense de Madrid.. DE. Facultad de Farmacia.2010.. N. 23. Eslava C, Mateo J, Cravioto A. Cepas de Escherichia coli relacionadas con la diarrea.. CC. IO. En: diagnóstico de laboratorio de infecciones gastrointestinales. Giono S, Escobar A,. RE. Valdespino JL. Secretaria de Salud. México. 1994: pp.251.. DI. 24. Merck E. Manual de medios de cultivo Merck. 12° ed. Alemania: Merck. 2005; pp. 363 25. Webber, Barchelor. Citrus Industry. Univ. Calif. Press. 1983. 1: pp. 999.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 26. Kalemba D., Kunicka A. Antibacterial and Antifungical Properties of Essential Oils. Current Medicinal Cheministry. Poland. 2003. 10: pp. 813-829. AC IÓ. enumeración. Ed. 2. Editorial. Acribia S.A. Zaragoza. España. 2000. pp.48.. N. 27. García R. Microorganismos de los alimentos. Su significado, métodos de. UN IC. 28. Müller G. Microbiología de los Alimentos Vegetales. Editorial Acribia S.A. Zaragoza.. M. España. 1981. pp.152, 153.. CO. 29. Carrillo I. Efecto de la actividad de agua, pH y temperatura de incubación en la. IC. A. Y. capacidad antimicótica de mezclas de benzoato de sodio-vainilla. UDLAP. 1999. ÁT. 30. Inouye, S., Takisawa, T. y Yamaguchi, H. Antibacterial activity of essential oils and. RM. their major orcontituents against respiratorytract pathogens by gaseous contact;. IN FO. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 2001. 12(4): pp.210- 216. DE. 31. Dao, T., Bensoussan, M., Gervais, P. y Dantigny, P. Inactivation of conidia of. AS. Penicillium chrysogenum. P. digitatum and P. italicum by ethanol solutions and. EM. vapours. International Journal ofFood Microbiology. 2008. 122(1-2): pp.68-73. SI ST. 32. Goñi, P., López P., Sánchez, C., Gómez- Lus, R., Becerril, R. y Nerin C.. DE. Antimicrobial activity in the vapour phase of a combination of cinnamon and clove. N. essencial oils. Food Microbiology. 2009. 22(4): pp.273-292.. CC. IO. 33. Afriditi S, Eleni P, Constantita N, Stella K, Thomas L, Minas A. Antimicrobial and. RE. Cytotoxic activities of Origanum essential oils. J. Agric. Food Chem. 1996.. DI. 44:pp.1202-1205.. 34. Juárez J, Castro A, Jaúregui J, Lizano V, Carhuapoma M, Fritz F et al. Composición química, actividad antibacteriana del aceite esencial de Citrus sinensis L.. y. formulación de una forma farmacéutica. Ciencia e investigación. 2010; 13(1): pp.9-13. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 35. Mann C, Markham. A new method for determining the minimum inhibitory concentration of essential oils. Journal of Applied Microbiology. 1999; 84: pp.538544.. UN IC. aceite esencial de mandarina. Rev. Fac. Agron. 2003; 20: pp.502-512.. AC IÓ. N. 36. Martínez J, Sulbarán B, Ojeda G, Ferrer A, Nava R. Actividad antibacteriana del. 37. Grilli E. Development of non pharmaceutical strategies to imporve intestinal health in. CO. M. weaning piglets. Tesis doctorado. Facultad de Medicina Veterinaria. Universidad de. A. Y. Bologna. Italia 2007.. ÁT. IC. 38. Kimball D. Procesado de cítricos. Editorial Acribia S.A. Zaragoza. España. 2002;. RM. pp.234.. IN FO. 39. Demo M., Olivia D., López L., Zunino P., Zygadla J. Antimicrobial activity of. AS. 2005; 43 (2): pp.129-134.. DE. essential oils obtained from aromatic plants of Argentina. Pharmaceut Biol. Argentina.. EM. 40. Sartoratto A., Machado A., Delarmelino C., Figueroa G., Duarte M., Rehder L.,. SI ST. composition and antimicrobial activity of essential oils from aromatic plants used in Brazil. Braz I Microbiol. Brasil. 2004; 35 (4): pp.275-280.. DE. 41. Martínez M. Morfología y estructura bacteriana. Bogotá. 2009.. IO. N. 42. Leal A. Mecanismos de resistencia en Pseudomona aeruginosa: entendiendo a un. CC. peligroso enemigo. Departamento de Microbiología, Facultad de Medicina. DI. RE. Universidad Nacional de Colombia. Bogotá. 1997.. 43. Cronquist A. An integrated system of classification of flowering plants. Columbia University Press. N.Y. USA. 1981. pp.602-603.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..