Efecto del aceite esencial de Lantana camara L sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus y Escherichia coli

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. N. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA. RM. ÁT. IC A. Y. CO. M. UN IC AC IÓ. Y PARASITOLOGÍA. IN FO. Efecto del aceite esencial de Lantana camara L.. DE. sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus y. SI ST. EM. AS. Escherichia coli TESIS. DE BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. DI R. EC CI. O. N. DE. PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL. Tesista: Br. Alan Mitchel Venegas del Castillo. Asesor: MsC. María Nelly Vásquez Valles TRUJILLO – PERU 2015 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. UN IC AC IÓ. N. TRUJILLO. Dr. Orlando Gonzáles Nieves. IN FO. RM. ÁT. IC A. Y. CO. M. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. DE. Dr. Rube Vera Veliz. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. AS. VICERECTOR ACADÈMICO. Dr. Steban Alejandro Ilich Zerpa. SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. UN IC AC IÓ. Dr. José Mostacero León. IC A. Dr. William Zelada Estraver. Y. CO. M. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. DE. IN FO. RM. ÁT. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. AS. Dra. Bertha Soriano Bonilla. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA.. Dr. Juan Guevara Gonzáles JEFE DE DEPARTAMENTO. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. UN IC AC IÓ. N. Señores Miembros del Jurado:. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados y Títulos de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y Parasitología. M. de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo,. IC A. Y. CO. pongo a vuestra consideración y criterio el presente trabajo de tesis titulado:. ÁT. “Efecto del aceite esencial de Lantana camara L. sobre el crecimiento de. RM. Staphylococcus aureus y Escherichia coli”, con el cual pretendo obtener el. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. Título Profesional de Biólogo Microbiólogo.. DI R. EC CI. O. N. DE. Trujillo, 21 de Julio del 2015. ___________________________ Br. Alan Mitchel Venegas del Castillo. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MIEMBROS DEL JURADO. Los suscritos, miembros del jurado, declaran que la presente tesis ha sido ejecutada en. UN IC AC IÓ. N. concordancia con las normas de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y. CO. M. Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo.. IC A. Y. _________________________________. DE. IN FO. RM. ÁT. Ms. C. Pedro Alvarado Salinas PRESIDENTE. Dra. Icela Rodríguez Haro SECRETARIA. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. AS. _________________________________. _________________________________ Ms. C. Nelly Vásquez Valles VOCAL. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. N. Los profesores que suscriben, miembros del Jurado Examinador, declaran que el. UN IC AC IÓ. presente Informe de Tesis titulado: “Efecto del aceite esencial de Lantana camara L. sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus y Escherichia coli”, ha cumplido con. ÁT. IC A. Y. CO. M. los requisitos formales y fundamentales, siendo APROBADO por UNANIMIDAD.. RM. _________________________________. EM. AS. DE. IN FO. Ms. C. Pedro Alvarado Salinas PRESIDENTE. Dra. Icela Rodríguez Haro SECRETARIA. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. _________________________________. _________________________________ Ms. C. Nelly Vásquez Valles VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. UN IC AC IÓ. N. El que suscribe, profesor asesor de la tesis titulada: “Efecto del aceite esencial. de Lantana camara L. sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus y Escherichia. M. coli”. CO. CERTIFICA:. IC A. Y. Que ha sido desarrollada, de acuerdo al reglamento establecido por la Facultad. ÁT. de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en conformidad. RM. con su correspondiente proyecto, y que el informe ha sido redactado acogiendo las. IN FO. observaciones y sugerencias alcanzadas.. DE. Por lo tanto, autorizo a Alan Mitchel Venegas del Castillo, continuar con el. SI ST. EM. AS. trámite del reglamento correspondiente.. EC CI. O. N. DE. Trujillo, Julio del 2015. DI R. _________________________________ Ms. C. Nelly Vásquez Valles ASESOR. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. N. Esta tesis se la dedico a mi DIOS quién. UN IC AC IÓ. supo guiarme por el buen camino, darme fuerzas para seguir adelante y no desmayar en los problemas que se. M. presentaban, enseñándome a encarar. IC A. Y. CO. las adversidades. ÁT. A mis padres SEBASTIAN y MERI, por. RM. su apoyo, consejos, comprensión, amor,. IN FO. ayuda en los momentos difíciles, por ser el. DE. pilar fundamental en todo lo que soy, en toda mi educación, tanto académica, como. EM. AS. de la vida, por su incondicional apoyo. SI ST. perfectamente mantenido a través del. EC CI. O. N. DE. tiempo. A mis hermanos JOSÉ LUIS, VANESSA y. DI R. MANUEL. EDUARDO,. gracias. por. enseñarme a creer en mí y motivarme a hacer las cosas de la mejor manera.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. A. LUISA. MENDOZA. Y.,. por. su. paciencia, comprensión, dedicación, por. N. su amor, por llenarme de fuerzas para. UN IC AC IÓ. conseguir el equilibrio que me permite dar siempre el máximo y por ser mi. Y. CO. M. compañera inseparable de cada día.. IC A. A mi sobrino SEBASTIAN que aunque ya. ÁT. no se encuentre con nosotros físicamente,. DE. IN FO. RM. siempre estará presente en mi corazón.. AS. A nuestros profesores, por su constante. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. maestros y amigos. EM. empeño en darnos lo mejor de ellos como. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTO. N. Mi sincero y profundo agradecimiento a:. UN IC AC IÓ. A mis padres Sebastián y Meri, porque creyeron en mí y porque darme ejemplos dignos. de superación y entrega, porque en gran parte gracias a ustedes, hoy veo alcanzada mi meta, ya que siempre estuvieron impulsándome en los momentos más difíciles de mi. CO. M. carrera, y porque el orgullo que sienten por mí, fue lo que me hizo ir hasta el final. Va. Y. por ustedes, por lo que valen, porque admiro su fortaleza y por lo que han hecho de mí.. IC A. A mi asesor de tesis Nelly Vásquez Valles, Profesor del Departamento de Microbiología. RM. ÁT. y Parasitología de la Facultad de Ciencias Biológicas, quien con su esfuerzo, sus. IN FO. consejos, experiencia y dedicación motivaron para culminar este proyecto con éxito.. AS. realización de la presente tesis.. DE. A Dr. Juan Casanova, por su amistad, apoyo y consejos importantísimos para la. EM. A Dr. Edmundo Venegas por su invaluable apoyo y consejos durante la obtención del. SI ST. aceite esencial.. O. N. tesis.. DE. A mi hermana Vanessa Venegas por su contribución para la ejecución de la presente. EC CI. A Hipólito Uceda y Carmen De la Cruz, por su apoyo incondicional, por facilitarme los. DI R. equipos necesarios para culminar la parte experimental en la ejecución de la presente tesis.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. N. El objetivo de la presente investigación fue demostrar el efecto del aceite esencial de. UN IC AC IÓ. Lantana camara L. sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus y Escherichia coli. El aceite se obtuvo por el método hidrodestilación, a partir del de hojas de L. camara, se utilizó concentraciones de 25, 50, 75 y 100% de aceite usando etanol absoluto como. CO. M. diluyente. Para determinar la inhibición de crecimiento antibacteriano se empleó el. Y. método de difusión en pozo; añadiendo 25 µl de cada concentración en pozos de 6 mm. IC A. de diámetro sobre placas petri con Agar Mueller Hinton los cuales fueron sembrados. ÁT. con S. aureus y E. coli por superficie, con concentraciones similares al tubo N° 0.5 del. RM. Nefelómetro de Mac Farland (1.5 x 108 UFC/ml); utilizando Vancomicina y. IN FO. Cloranfenicol como controles para S. aureus y E. coli respectivamente. La lectura se. DE. realizó a las 24 horas de incubación a 37°C midiendo el halo de inhibición en cada. AS. ensayo. Para los análisis de datos se realizó ANOVA y Post-Anova mediante la prueba. EM. de Tukey, obteniéndose diferencias significativas (p<0.05) entre las concentraciones. SI ST. que inhiben mejor el crecimiento. Los resultados mostraron que hay mayor inhibición a mayor concentración del aceite esencial, siendo la concentración de 100%, la que logró. DE. inhibición máxima con 33 mm para S. aureus. Se concluye que el aceite esencial de L.. DI R. EC CI. O. N. camara muestra efecto inhibitorio sobre el crecimiento del S. aureus y E. coli.. Palabras clave: Aceite esencial, Lantana camara L, crecimiento, Staphylococcus aureus, Escherichia coli. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT. N. The objective of this research was to demonstrate the effect of essential oil of Lantana. UN IC AC IÓ. camera L. on growth of Staphylococcus aureus and Escherichia coli. The oil is obtained. by distillation method, from the leaves of L camara L, concentrations of 25, 50, 75 and 100% of oil using absolute ethanol as solvent was used. Diffusion method was used to. CO. M. determine the antibacterial growth inhibition in well; Add 25 µl of each concentration in. Y. Wells of 6 mm diameter over Petri dishes with Agar Mueller Hinton which were. IC A. stocked with S. aureus and E. coli by surface, with concentrations similar to the tube N. RM. ÁT. ° 0.5 of the Nephelometer of Mac Farland (1.5 x 108 cfu/ml); using Vancomycin and. IN FO. chloramphenicol as controls for S aureus and E coli respectively. The reading was at 24 hours of incubation at 37° C by measuring the zone of inhibition in each trial. Data. DE. analysis was ANOVA and Post-Anova with Tukey test, resulting in significant. AS. differences (p < 0.05) between the concentrations that inhibit growth better. The. EM. results showed that there is greater inhibition at higher concentration of essential oil,. SI ST. being the concentration of 100%, to achieve maximum inhibition with 33 mm for S.. DE. aureus. Concluding that the essential oil of L. camara shows inhibitory effect on the. DI R. EC CI. O. N. growth of S. aureus and E. coli.. Key Words: Essential oil, L. camara L, S. aureus, E. coli and growth. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÍNDICE GENERAL. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO……...........ii. UN IC AC IÓ. N. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS…………....iii. PRESENTACIÓN……………………...………………………..………..……...…...iv MIEMBROS DEL JURADO………………………………..………..…….................v. M. APROBACIÓN…………………………………………...……………..……………vi. CO. DEL ASESOR…………………………………………………………………..........vii. IC A. Y. DEDICATORIA………………………………………………………...…..…........viii. ÁT. AGRADECIMIENTO…...………………………………………………....………....x. RM. RESÚMEN…...……………………………………………………………….............xi. IN FO. ABSTRACT…...……………………………………………………………………..xii INDICE GENERAL..…………………………………………………………..........xiii. DE. INTRODUCCIÓN…………………………………………………………...…....…...1. EM. AS. MATERIAL Y MÉTODO………………………………………………………....…12. SI ST. 1. Material Biológico………………………...…………………………….……12 2. Procedimientos. DE. 2.1.Procedimiento para obtención de aceite esencial de Lantana camara L. 12. O. N. 2.1.1. Recolección y transporte de Lantana camara L………………….12. EC CI. 2.1.2. Identificación Taxonómica ……………………………...……….13. DI R. 2.1.3. Extracción de aceite esencial………………………………….….13. 2.2. Reactivación de los cultivos... …………………………………………..15 2.3. Preparación del Inóculo …………………………………………………15 2.4.Preparación de las concentraciones del aceite esencial ...………………..16 2.5.Prueba de inhibición de crecimiento …………………………………… 16 xiii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.6. Lectura de los resultados ………………………………………………..17 2.7. Análisis Estadístico …………………………………………………......17 RESULTADOS………………………………………………...……………..……...19. UN IC AC IÓ. N. DISCUSIÓN…………………………………………………………………...…..…24 CONCLUSIONES…………………………………………………...………...…..…32 RECOMENDACIONES……………………………………………………………..33. M. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………………………………...…..34. CO. ANEXOS…………………………………………………………..………..….….....46. Y. ANEXO 01. Foto 1. Equipo de destilación………….……………….………............47. IC A. ANEXO 02. Constancia de Identificación taxonómica………………………............48. RM. ÁT. ANEXO 03. Preparación de concentraciones del aceite esencial..............……….....49. IN FO. ANEXO 04. Promedio de halos de inhibición del crecimiento de Staphylococcus aureus frente a diferentes concentraciones de aceite esencial de Lantana camara L.. DE. (25, 50, 75 y 100 %) y frente a Vancomicina……………………………………… 50. AS. ANEXO 05. Promedio de halos de inhibición del crecimiento de Escherichia coli. EM. frente a diferentes concentraciones de aceite esencial de Lantana camara L (25, 50,. SI ST. 75 y 100 %) y frente a Cloranfenicol ....……………………………….……………51. DE. ANEXO 06. Foto 2. Halos de inhibición del crecimiento de Staphylococcus aureus. N. frente a diferentes concentraciones de aceite esencial de Lantana camara L. (25, 50,. EC CI. O. 75 y 100 %) y frente a Vancomicina. .………………………………...…..…………52. DI R. ANEXO 07 Foto 3. Halos de inhibición del crecimiento de Escherichia coli frente a diferentes concentraciones de aceite esencial de Lantana camara L. (25, 50, 75 y 100 %) y frente a Cloranfenicol. .…………………..……………………….....................53. xiv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 08. Análisis estadístico realizados a los halos de inhibición del crecimiento Staphylococcus aureus a las concentraciones de 25, 50, 75 y 100 % del aceite de Lantana camara L. y comparada con los controles Etanol Vancomicina................... 54. UN IC AC IÓ. N. ANEXO 09. Análisis estadístico realizados a los halos de inhibición del crecimiento Escherichia coli a las concentraciones de 25, 50, 75 y 100 % del aceite de Lantana. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC A. Y. CO. M. camara L y comparada con los controles Etanol y Cloranfenicol...............................57. xv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. I. INTRODUCCIÓN. AC I. Ó. Dadas las cualidades antisépticas de plantas aromáticas y medicinales; sus (1). ,. IC. extractos y aceites esenciales han sido reconocidos desde la antigüedad. M UN. desempeñando un papel fundamental en la vida del hombre, siendo durante. CO. siglos la principal fuente de agentes terapéuticos, constituyendo su uso una costumbre profundamente arraigada en las culturas de los pueblos. (2). ,. A. Y. significando una valiosa fuente de sustancias activas, al producir más de 100. ÁT. IC. 000 metabolitos secundarios, muchos de los cuales son antibacterianos,. RM. mostrando actividad antimicrobiana contra patógenos, además de ser. DE. IN. FO. antioxidantes, ofrecen sabores y olores característicos (3, 4).. EM AS. Los aceites esenciales o esencias se definen como mezclas de compuestos provenientes, en su gran mayoría, del metabolismo de organismos. SI. ST. vegetales(5), son líquidos aceitosos aromáticos, obtenidos de diferentes. DE. partes de la planta, como flores, brotes, semillas, hojas, ramas, cortezas, (6, 7). . Son utilizados ampliamente en las. N. hierbas, madera, frutas y raíces. CC. IO. industrias farmacéuticas, alimentarias, cosméticas y tabacaleras, como en. DI. RE. perfumes y esencias. Son aislados por métodos de destilación, generalmente por arrastre de vapor e hidrodestilacion. Estos son principalmente mezclas de terpenos, sesquiterpenos y específicamente monoterpenos [C10] [C15]. También pueden ser diterpenos [C20], ácidos, alcoholes, aldehídos, ésteres. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. acíclicos o lactonas y excepcionalmente compuestos que contienen nitrógeno y azufre, cumarinas y homólogos de fenilpropanoides. La mayoría. Ó. N. de terpenos derivan de la condensación de unidades de isopreno de cinco. AC I. carbonos y están clasificados según el número de estas unidades presentes. CO. M UN. IC. en el esqueleto de carbono (1).. Y. Recientemente, ha aumentado la investigación sobre aceites esenciales a. IC. A. nivel industrial y círculos académicos debido a un creciente interés en el. ÁT. consumismo verde, buscando nuevas técnicas alternativas para asegurar la. RM. calidad e inocuidad de los alimentos perecederos, donde se indica que los. IN. FO. aceites esenciales de plantas aromáticas y plantas medicinales son. DE. potencialmente útiles como agentes antimicrobianos siendo reconocido su. ST. EM AS. uso como medicamentos(6).. SI. En recientes estudios se ha demostrado la actividad antibacteriana de. DE. diversos componentes de aceites esenciales como el de Citrus reticulata. IO. N. Blanco “Mandarina” frente a Listeria monocytogenes, Pseudomonas. CC. aeruginosa ATCC 27853, y Escherichia coli ATCC 25922(8); el aceite. DI. RE. esencial de Rosmarinus officinalis “Romero” frente a Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium(9); Bidens pilosa “Amor seco” frente a Staphylococcus aureus, Escherichia coli y Pseudomona aeruginosa. ; aceite esencial de Origanum vulgare “Orégano” frente a. (3). 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Staphylococcus aureus,. Escherichia coli. (10). ; Piper lanceaefolium. AC I. Ó. N. “Desinchadora” frente a Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis (11).. IC. Las plantas de la familia Verbenaceae se encuentran ampliamente. M UN. distribuidas por casi todo el planeta, siendo más abundantes en las regiones. CO. tropicales y subtropicales, son arbustos o sub-arbustos, raramente hierbas. Y. anuales, muy ramificados o con ramas delgadas y extendidas (12). La especie. IC. A. Lantana camara L. pertenece a esta familia en la que se incluyen cerca de. ÁT. 98 géneros con aproximadamente 2 500 taxones específicos. Crece en. RM. tierras cultivadas, caminos, pastos, lugares yermos, en regiones húmedas y. DE. IN. FO. secas, además crece en valles de pendientes y zonas costeras (13).. EM AS. En el Perú se conoce a L. camara L. popularmente como “Hierba de la. ST. maestranza”. Esta distribuidas entre 0 - 2 550 msnm(14); en estudios. SI. realizados en la especie, han demostrado la presencia de varios terpenoides,. DE. esteres y alcaloides. L. camara L., muestra una intensa actividad antipirética. IO. N. y antiespasmódica en el tratamiento de enfermedades como el tétano, el. CC. reumatismo y la malaria(15), posee propiedades farmacológicas, incluyendo. DI. RE. la bactericida, nematicida, antimutagénica y mostrando además actividad insecticida como repelente contra insectos vectores de la malaria. El rendimiento máximo obtenido, al utilizar como método de extracción la hidrodestilación en hojas alcanza un 0,2%, y en flores 0,66%. Su aceite es 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. amarillo con olor característico. Dentro de sus componentes se encuentran el limoneno, timol, geraniol,. a-fenlandreno, germacreno-D, sabileno, β-. IC. AC I. Ó. N. cariofileno, E-nerolidol, a-humuleno, linalool, α-terpineol, entre otros (16, 17).. M UN. En el año 2005 se estimó que 1,5 millones de personas murieron a causa de. CO. Enfermedades Diarreicas Agudas (EDAs) a nivel mundial y el 70% de ellas. Y. fueron atribuidas a las ETA(18), siendo el consumo de alimentos. IC. A. contaminados con microorganismos patógenos una amenaza para la salud.. ÁT. Se estima que la mortalidad anual es de 3 millones de niños menores de 5. RM. años, además que el 70% de las diarreas se originan por la ingestión de. IN. FO. alimentos contaminados con microorganismos, como es el caso de (19). , rotavirus,. DE. Salmonella spp., Shigella spp., Campylobacter spp, E. coli. EM AS. mientras que en las intoxicaciones alimentarias como las producidas por Bacillus cereus y S. aureus, se producen cuando las toxinas se encuentran. DE. SI. ST. presentes en el alimento ingerido (20, 21).. IO. N. Staphylococcus aureus son células esféricas, Gram positivas, que suelen. CC. estar distribuidas en grupos irregulares a manera de racimos de uva; su. DI. RE. diámetro es de cerca un micrón, son microorganismos no móviles y no esporulados. Crecen fácilmente en la mayor parte de los medios bacteriológicos en condiciones aerobias, baja actividad de agua, producen catalasa,. fermentan. el. manitol,. son. positivos. para. la. prueba. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. desoxirribonucleasa, producen ácido láctico pero no producen gas. Crecen con mayor rapidez a 37 °C pero pigmentan mejor a temperatura ambiental,. Ó. N. de 20 a 25 °C; sus colonias son de color gris a amarillo dorado intenso. Se. AC I. han identificado varios tipos serológicos que se denominan A, B, C, D, E, F,. CO. M UN. IC. G y H (22, 23).. Y. La capacidad de causar enfermedad depende, en parte, de la producción de. IC. A. una variedad de proteínas extracelulares, incluyendo fibrinolisina,. (24). . Está bien documentado que las cepas de. RM. epidermolítica y enterotoxinas. ÁT. superóxido dismutasa, catalasa, hialuronidasa, hemolisinas (α, β y δ), toxina. IN. FO. S. aureus producen una variedad de toxinas de proteína extracelular,. DE. incluyendo las enterotoxinas, síndrome de shock tóxico toxina exfoliativa 1. ST. EM AS. (TSST-1), toxina (ET), hemolisinas y coagulasa (25, 26).. SI. Las enterotoxinas son un grupo serológico de proteínas diferentes (A, B,. DE. C1–3, D, E y F) causantes de intoxicación alimentaria estafilocócica, que es. IO. N. una intoxicación común que resulta del consumo de alimentos que. CC. contienen cantidades tan pequeñas como 100 ng de una o más enterotoxinas. DI. RE. preformadas(23). Los síntomas tienen un inicio rápido y comprenden náuseas, vómitos con o sin diarrea y dolores abdominales, a su vez se han reportado muertes por infecciones de S. aureus debido a los severos desórdenes gastrointestinales (26). 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El crecimiento de S. aureus y la producción de la toxina en el alimento, no alteran el sabor ni el olor del mismo. Estas toxinas son termoestables, son. Ó. N. poco afectadas por las radiaciones gamma, pueden permanecer aunque la. AC I. bacteria haya muerto durante el proceso de la preparación del alimento. Su. M UN. IC. presencia en alimentos se interpreta como indicador de contaminación por malas prácticas de higiene de los manipuladores de alimentos, convirtiendo. CO. a los manipuladores de alimentos en los mayores agentes transmisores,. Y. siendo la principal fuente de contaminación por cepas de S. aureus. RM. ÁT. IC. A. asociadas a Intoxicación Alimentaria Estafilocócica (IAE)(27, 28).. IN. FO. S aureus se aísla con frecuencia de la piel y de mucosas de personas y. DE. animales; está presente en fosas nasales, garganta, cabello y/o piel del 30 al. EM AS. 50% de las personas saludables y es abundante en pústulas y abscesos. Se estima que S. aureus puede encontrarse en la piel de individuos sanos, como. ST. microbiota saprofita habitual, en una concentración que oscila entre 10 a 103. SI. bacterias/cm2. Hay portadores permanentes y ocasionales, y hay quienes son. DE. especialmente susceptibles de ser colonizados por cepas coagulasa positiva.. IO. N. Las tasas de portadores aumentan cuando hay casos de sinusitis, faringitis y. pueden tener S. aureus en la mucosa nasal y un 17,2% en la piel (23,26).. DI. RE. CC. procesos gripales. Se ha reportado que un 34,4% de adultos de ambos sexos. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Entre el 2003-2004, aproximadamente el 29% (78,9 millones de personas) de la población de los EEUU estaba colonizada en su mucosa nasal por S. .. La diseminación de S. aureus enterotoxigénico desde el. N. (29). Ó. aureus. AC I. manipulador al alimento se puede producir por contacto directo e indirecto,. M UN. IC. por medio de la descamación normal de piel o por medio de aerosoles. procedentes del tracto respiratorio cuando se estornuda, tose o habla, así. IC. A. Y. CO. como falta de higiene en materiales y equipos (23, 26).. ÁT. Cristóbal y Maurtua informaron que en el Perú entre los años 1993 y 2001. RM. se registraron 12 brotes de enfermedades producidas por el consumo de. IN. FO. productos lácteos, los cuales comprendieron 11,5% del total de casos de. DE. enfermedades transmitidas por alimentos en esos años, estos brotes. EM AS. afectaron a 1 278 personas (de ellas, 24 fallecieron), Entre sus agentes. SI. ST. causales se encontró a S. aureus con 1,6% de incidencia (30).. DE. Escherichia coli es una de las bacterias causantes de EDAs(31), son bacterias. IO. N. Gram negativas cilíndricas no esporulados con 1,1 – 1,5 µm de diámetro por. CC. 2,0 – 6,0 µm de largo que se disponen aisladas o en parejas(32). Conforme a. DI. RE. la definición general de la familia Enterobacteriaceae a la que pertenecen, son móviles, aerobio-anaerobio facultativo, metabolismos fermentativo y oxidativo, asporógenas, oxidasa negativos, catalasa positivos, normalmente reducen nitratos a nitritos(33). Son inhibidos por KCN e incapaces de crecer 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. en medio con citrato como única fuente de carbono y energía, pero sí en caldo acetato. Son H2S, ureasa y fenilalanina negativos, descarboxilan la. Ó. N. lisina. Presentan rápido crecimiento y amplia distribución en el suelo, el. M UN. IC. AC I. agua, vegetales y gran variedad de animales (34, 35).. CO. E. coli es una especie bacteriana de considerable importancia científica,. Y. económica y médica, mayoría de las cepas viven en los intestinos de los. IC. A. humanos y animales de sangre caliente y se eliminan por las heces, varias. (32, 36). . E. coli es serotipificado por determinación de antígenos. RM. hombre. ÁT. cepas pueden producir potentes toxinas y causar una enfermedad grave en el. IN. FO. somáticos (O), capsular (K), y flagelar (H). Se clasifican en más de 170. DE. serogrupos O según las características antigénicas de su LPS, y en serotipos (37). . Se puede. EM AS. por la combinación de antígenos somáticos y flagelares. encontrar en el medio ambiente ya que es capaz de sobrevivir algunos días. ST. en el agua y los alimentos, de manera que su aislamiento es un indicador de. SI. contaminación fecal reciente y junto con otras bacterias similares están. DE. agrupados bajo la denominación de "bacterias coliformes”. (38). . E. coli. IO. N. presenta una alta incidencia de casos siendo los niños de 1 a 5 años y los. DI. RE. CC. ancianos susceptibles a la infección, utilizando múltiples mecanismos similares a otras bacterias que infectan mucosas, con las etapas de adhesión y colonización de la mucosa, evasión de los multiplicación y daño tisular. mecanismos de defensa,. (39). . El ganado de leche o carne sano puede. contaminarse durante el proceso de sacrificio y procesamiento (40). 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. E. coli O157:H7 fue reconocido como patógeno humano después del brote de colitis hemorrágica ocurrido en 1982 en Estados Unidos de. Ó. N. Norteamérica, y que tuvo como vehículo de transmisión a hamburguesas de (40). .. AC I. carne de bovino, el serotipo fue aislado de los pacientes y del alimento. M UN. IC. Desde entonces se han reportado numerosos brotes de colitis hemorrágica y sus complicaciones en Estados Unidos de Norteamérica, Canadá, Reino. CO. Unido, Dinamarca, Suecia, Alemania, España y Japón; países donde E. coli (41, 42). . Se encuentra. Y. enterohemorrágica O157:H7 ha sido la principal causa. IC. A. en carnes mal cocidas, especialmente hamburguesas, leche cruda y. .. DE. IN. FO. (22, 43). RM. ÁT. recientemente ha sido asociado con el consumo de vegetales de hojas verdes. EM AS. En el Perú, el primer hallazgo de E. coli O157:H7 se hizo en las heces de una lactante que provenía de Tacna, la cepa presentó los 3 factores de. ST. virulencia y en un estudio de 102 muestras de carne molida de bovino en. SI. Lima metropolitana encontraron un 22.55% positivo para E. coli O157; del. DE. total de positivos se analizaron 10 (43.48%) cepas, comprobándose que. IO. N. todas eran E. coli O157:H7 (29). En el 2001 en Tacna se observó un aumento. DI. RE. CC. del número de diarreas disentéricas, con un incremento de 197 a 235 casos, siendo el grupo etario de 1 a 4 años el más afectado con 136 casos (57.8%); de éstos, la mayoría (78.7%) procedían del distrito de Tacna y sólo 10.7% del distrito Alto de la Alianza (44).. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En el año 2005 se estimó que 1,5 millones de personas murieron a causa de Enfermedades Diarreicas Agudas (EDAs) a nivel mundial y el 70% de ellas. Ó. N. fueron atribuidas a las ETA(18), siendo el consumo de alimentos. AC I. contaminados con microorganismos patógenos una amenaza para la salud.. M UN. IC. Se estima que la mortalidad anual es de 3 millones de niños menores de 5. años, además que el 70% de las diarreas se originan por la ingestión de. CO. alimentos contaminados con microorganismos, como es el caso de (19). , rotavirus,. Y. Salmonella spp., Shigella spp., Campylobacter spp, E. coli. IC. A. mientras que en las intoxicaciones alimentarias como las producidas por S.. IN. FO. RM. ÁT. aureus y Bacillus cereus (20, 21).. DE. Por lo expuesto anteriormente la presente tesis tuvo por finalidad investigar. EM AS. el efecto de diferentes concentraciones del aceite esencial de Lantana camara L. sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus y Escherichia coli. ST. y sus posibles usos potenciales tanto en la medicina como en el campo. SI. farmacéutico y microbiológico. Considerando que L. camara L. presenta. DE. compuestos volátiles, muchos de los cuales tienen actividad antimicrobiana,. IO. N. representando una alternativa para el control de estos patógenos que están. problema para la salud.. DI. RE. CC. implicados en brotes de infecciones e intoxicaciones alimentarias, siendo un. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. OBJETIVOS:. Ó. Demostrar el efecto de las diferentes concentraciones del. AC I. -. N. Objetivo general:. A. Y. Objetivos específicos:. IC. Determinar el efecto de las concentraciones de 25, 50, 75 y 100%. ÁT. -. M UN. CO. Staphylococcus aureus y Escherichia coli. IC. aceite esencial de Lantana camara L. sobre el crecimiento de. RM. (289.7; 579.4; 869.1 y 1158.8 mg/ml) del aceite esencial de. FO. Lantana camara L. sobre el crecimiento de Staphylococcus. IN. aureus y Escherichia coli.. Determinar cuál de las bacterias (Staphylococcus aureus y. DE. -. EM AS. Escherichia coli) presenta mayor inhibición del crecimiento. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. frente al aceite esencial de Lantana camara L.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II.. MATERIAL Y METODOS. Ó. N. MATERIAL BIOLOGICO Aceite esencial de Lantana camara L. “Hierba de la maestranza”. . Cultivos de Staphylococcus aureus procedente del Laboratorio de. M UN. IC. AC I. . CO. Microbiología y Tecnología de Alimentos de la Universidad Nacional de Trujillo en 2014. Cultivo de Escherichia coli procedente del Laboratorio. A. Y. de Análisis de Alimentos y Aguas de la Municipalidad Provincial de. RM. ÁT. IC. Trujillo en 2014.. Obtención del aceite esencial de Lantana camara L.. 1.. EM AS. DE. A.. IN. FO. PROCEDIMIENTO. Recolección y transporte de Lantana camara L.. ST. Las plantas de L. camara L. fueron recolectadas en el Centro poblado El. SI. Trópico, Distrito de Huanchaco, Provincia de Trujillo, Departamento La. DE. Libertad (a 50 m.s.n.m.). Las plantas fueron transportadas al laboratorio. Universidad Nacional de Trujillo para la extracción del aceite esencial.. DI. RE. CC. IO. N. de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.. Identificación taxonómica de Lantana camara L. Una muestra de la planta fue llevada al Herbario de la Facultad de. Ó. N. Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo para su. IC. Extracción del aceite esencial de Lantana camara L.. M UN. 3.. AC I. identificación taxonómica (Anexo 2).. 3.1. Selección. CO. Se seleccionaron las hojas que no presentaron lesiones, separándolas de. Y. los tallos e inflorescencias (64).. IC. A. 3.2. Lavado. RM. ÁT. Se realizó con agua corriente para eliminar partículas extrañas, suciedad. IN. FO. y restos de tierra, posteriormente fueron puestas a orear por 24 horas.. DE. 3.3. Extracción del aceite por Hidrodestilación (57,64).. EM AS. Se empleó el método de Hidrodestilación, para lo cual se utilizó 12 000 g de hojas de Lantana camara L. colocándose 150g de hojas de L. camara. ST. L en un matraz esférico esmerilado de 2 000 ml de capacidad (Anexo 1). DE. SI. Se procedió a llenar con agua destilada el balón destilador, previa. N. instalación del conducto refrigerante, y se hizo circular el agua a través. DI. RE. CC. IO. del mismo. Luego se llevó a calentamiento hasta desprendimiento de un líquido inmiscible conteniendo vapor de agua condensada y el aceite esencial, que fueron recolectados en un embudo de decantación. El tiempo fue de 60 min aproximadamente contándose desde el instante en que cayó la primera gota en la pera de decantación. 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Se eliminó el agua y se separó el aceite en un frasco de color ámbar.. AC I. Ó. N. 3.4. Almacenamiento. M UN. IC. El aceite colectado se guardó en frascos de color ámbar debidamente. rotulados, debido a que son inestables fotoquimicamente y se deshidrató. CO. con Na2SO4 anhidro (47,58). IC. A. Y. Se conservó en refrigeración a 4°C hasta el momento de su utilización.. RM. ÁT. B. Estudio Físico del aceite esencial. FO. Constantes físicas:. IN.  Densidad:. DE. Se utilizó un densímetro digital Densymeter DMA35- Aton, obteniendo. ST. EM AS. una densidad de 1.1588 g/ml (1 158.8 mg/ml). SI.  Índice de refracción:. DE. Mediante el refractómetro de círculo Carl Zeis se obtuvo el valor del. DI. RE. CC. IO. N. índice de refracción: 1.576. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. C. Preparación de los inóculos bacterianos.. Ó. N. 1. Reactivación de cultivos de Staphylococcus aureus y Escherichia coli. AC I. Se tomó una azada del cultivo conservado Staphylococcus aureus y E.. M UN. IC. coli, se sembraron en 4 ml de caldo Infusión Cerebro-Corazón (BHI) respectivamente, se llevó a incubar a 37°C por 24 horas.. CO. Luego se sembró la suspensión de Staphylococcus aureus y E. coli en. Y. Agar Baird Parker y MacConkey respectivamente; se llevaron a incubar. IC. A. a 37°C por 24 horas.. RM. ÁT. Se seleccionaron colonias que presentaron características culturales. FO. propias. De las colonias se tomó una azada, se realizó la coloración Gram. IN. y se observó a 100x. DE. Una vez comprobada la pureza, de la parte restante de la colonia se. EM AS. sembró en agar nutritivo semisólido inclinado.. ST. 2. Preparación de inóculo. DE. SI. Se realizó a partir del cultivo puro de cada bacteria sembrado en Agar. N. nutritivo con 18 horas de incubación.. equivalente al tubo N° 0.5 del nefelómetro de Mac Farland (1.5 x 108 UFC/ml)(56).. DI. RE. CC. IO. Se hizo una suspensión en 5 ml de agua destilada esteril, a una turbidez. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 3. Preparación de las diferentes concentraciones del aceite esencial de L.. Ó. N. camara L.. AC I. El aceite puro obtenido fue considerado como tratamiento al 100%. M UN. IC. (ρ=1158.8 mg/ml), a partir del cual se realizó diluciones para obtener las. concentraciones de 25, 50, 75 y 100% (289.7; 579.4; 869.1 y 1158.8. CO. mg/ml) de aceite de L. camara L.; utilizando como solvente etanol. ÁT. FO. Método de Difusión en Agar. RM. D. Prueba de Inhibición del Crecimiento. IC. A. Y. absoluto (control) (Anexo 3).. IN. - La actividad antibacteriana se determinó mediante el método de. DE. difusión en agar. Se sirvió 25 ml de Agar Müller-Hinton en placas. EM AS. Petri,. - Las placas se llevaron a secar en la estufa por 10 minutos para. ST. eliminar exceso de humedad.. DE. SI. - Pasados los 10 minutos, se agregó 0,1 ml de suspensión bacteriana y. DI. RE. CC. IO. N. con ayuda de asa de Drigalsky se sembró uniformemente, dejando reposar por 20 minutos.. - En condiciones de esterilidad se hizo un pozo con un sacabocado con un diámetro de 6 mm en cada placa. - Se inoculó 25 µl de muestra a concentraciones de 25, 50,75 y 100% (289.7; 579.4; 869.1 y 1158.8 mg/ml) de aceite esencial en cada uno de los pozos de las placas, en otra placa se colocó 25 µl de etanol 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. absoluto como control; y discos de Vancomicina y Cloranfenicol (30µg/disco) siendo el control positivo para S. aureus y E. coli. Ó. N. respectivamente.. AC I. - Se siguió el mismo procedimiento para el cultivo de E. coli con la. M UN. IC. diferencia que el tiempo de incubación para la preparación del inóculo fue de 7 horas.. CO. - Luego se dejó en reposo durante una hora, permitiendo una mejor. Y. difusión de la muestra en el agar.. FO. RM. ÁT. IC. A. - Después se llevó a incubación a 37°C de 18 a 24 horas(56). IN. E. Lectura. DE. - La lectura de los resultados se realizó en base a la presencia de los. EM AS. halos de inhibición del crecimiento (mm), formados alrededor de cada pocillo por efecto de la actividad antibacteriana del aceite esencial a. ST. concentraciones de 25, 50,75 y 100%, los cuales se midieron, luego se. DE. SI. restó los 6 mm del pozo para ser comparados posteriormente(59,62). Las. pruebas se realizaron por triplicado con 5 repeticiones.. RE. CC. IO. N. mediciones se realizaron en 4 direcciones y se sacó el promedio. Las. DI. F. Análisis de Datos Los datos obtenidos fueron sometidos al test de Kolmogorov–Smirnov para determinar si presentan distribución normal (Normal: p>0.05 y No Normal: p<0.05). Como los valores siguieron una distribución normal fueron 17. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. analizados con la prueba de Anova, para determinar diferencia significativa entre los tratamientos, luego se aplicó la prueba de comparaciones múltiples. Ó. N. paramétricas de Tukey con un intervalo de confianza del 95% para. AC I. determinar diferencia significativa entre concentraciones de aceite y entre el. M UN. IC. control (Vancomicina y Cloranfenicol); para lo cual se utilizaron los programas estadísticos SPSS Statistics 20.0 para Windows y Microsoft. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. Office Excel 2013.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. Ó. N. III.. AC I. En la Fig. 01 se presentan los resultados de los diámetros promedios de los. IC. halos de inhibición del crecimiento de Staphylococcus aureus a. M UN. concentraciones de 25, 50, 75 y 100%, (289.1, 579.4, 869m1 y 1158.8. CO. mg/ml) del aceite esencial de Lantana camara L.. Observándose que el. Y. mayor efecto inhibitorio lo tiene la concentración de 100% que presenta un. IC. A. halo de inhibición de 33 mm. También se observa que existe diferencia. ÁT. significativa entre las concentraciones estudiadas y que el efecto inhibitorio. DE. IN. FO. RM. aumenta a mayor concentración del aceite esencial de Lantana camara L.. EM AS. En el Anexo 4. Se presentan los diámetros promedios de las medidas de cinco ensayos de las concentraciones de 25, 50, 75 y 100%, (289.1; 579.4;. ST. 869.1 y 1158.8 mg/ml) del aceite esencial de Lantana camara L. a las 24. SI. horas frente a Staphylococcus aureus utilizando el método de difusión en. DE. pozo, se observa que la inhibición disminuye conforme disminuye la. IO. N. concentración del aceite esencial de Lantana camara L., siendo la. del crecimiento de Staphylococcus aureus.. DI. RE. CC. concentración de 100% (1158.8 mg/ml) la que presenta mayor inhibición. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En la Fig. 02 Se presentan los resultados de los diámetros promedios de los halos de inhibición del crecimiento de Escherichia coli a concentraciones de. Ó. N. 25, 50, 75 y 100% (289.1; 579.4; 869,1 y 1158.8 mg/ml) del aceite esencial. AC I. de Lantana camara L. Observándose que el mayor efecto inhibitorio lo. M UN. IC. tiene la concentración de 100% que presenta un halo de inhibición de 11.87 mm. También se observa que existe diferencia significativa entre las. CO. concentraciones estudiadas y que el efecto inhibitorio aumenta a mayor. ÁT. IC. A. Y. concentración del aceite esencial de Lantana camara L.. FO. RM. En el Anexo 05 se presenta los diámetros de los halos de inhibición durante. IN. las cinco repeticiones, para las concentraciones de 25%, 50%, 75% y 100%. DE. del aceite esencial de Lantana camara L frente a Escherichia coli. Se. EM AS. observa que el efecto inhibitorio aumenta conforme aumenta las concentraciones de aceite esencial de Lantana camara L, siendo la. ST. concentración 100% la que presenta mayor efecto inhibitorio sobre el. IO. N. DE. SI. crecimiento de Escherichia coli.. DI. RE. CC. En la fig. 03 se presentan los resultados de los diámetros promedios de los halos de inhibición del crecimiento de Staphylococcus aureus y Escherichia coli, a las concentraciones de 25%, 50%, 75% y 100% (289.1; 579.4; 869,1 y 1158.8 mg/ml) del aceite esencial de Lantana camara L. Se observa que es mayor la inhibición del crecimiento en S. aureus y menor en E. coli. 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) 30. CO. M. 35. Y. 24.73. ÁT IC A. 25. 17.8. c. b. a. d. 20.53. e. FO. 11.47. RM. 20 15. UN IC AC I. 33.00. IN. 10. AS. DE. 5 0 25%. 50%. EM. Halo de inhibición de crecimiento en mm de Staphylococcus aureus. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. f. 75%. 100%. Vancomicina. Etanol. DE. SI ST. Concentración del aceite esencial de Lantana camara L (%). CC I. O. N. Letras diferentes presentan diferencia significativa entre grupos (p< 0.05). DI RE. Fig. 01. Inhibición del crecimiento en mm de Staphylococcus aureus frente a las concentraciones de 25, 50, 75 y 100% del aceite esencial de Lantana camara L. y de los grupos control Vancomicina y etanol 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) UN IC AC I. 25. 20.67. Y. CO. M. 20. 15 9.47. 10. RM. 6.80. FO. 4.27. 5. c. e. d. f. DE. IN. b. a. ÁT IC A. 11.87. 0 50%. EM. 25%. AS. Halo de inhibición del crecimiento en mm de Escherichia coli. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 75%. 100%. Cloranfenicol. Etanol. DE. SI ST. Concentración del aceite esencial de Lantana camara L. (%). O. N. Letras diferentes presentan diferencia significativa entre grupos (p< 0.05). CC I. Fig.02. Inhibición del crecimiento en mm de Escherichia coli frente las concentraciones de 25, 50, 75 y 100% del aceite esencial. DI RE. de Lantana camara L.. y de los grupos control Cloranfenicol y etanol.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) UN IC AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 33.00. ÁT IC A. Y. 25. M. 24.73. CO. 30. 17.80. RM. 20 11.47. FO. 15. E. coli. 11.87. S. aureus. IN. 9.47. 6.8. DE. 10. AS. 4.27 5. EM. Halo de inhibición del crecimiento en mm. 35. 50% 75% 100% Concentración del Aceite esencial de Lantana camara L. (%). O. N. DE. 25%. SI ST. 0. CC I. Fig. 03. Comparación de diámetros promedios de los halos de inhibición del crecimiento de Staphylococcus aureus y Escherichia coli. DI RE. a las concentraciones de 25, 50, 75 y 100% frente al aceite esencial de Lantana camara L.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IV.. DISCUSION. Ó. N. Los efectos antimicrobianos de muchas hierbas y especias se han conocido. AC I. durante siglos, utilizándose para aumentar la vida útil de los alimentos,. IC. cuyas propiedades antimicrobianas se le atribuyen a sus principios activos. M UN. (45). , actuando como agentes inhibidores de una amplia gama de bacterias. (46,47). CO. . Tal es el caso del aceite esencial de Lantana camara L. que es una (48). ,. Y. planta ornamental popular, crece en regiones tropicales y subtropicales. IC. A. es fuente de fósforo y potasio al emplearse como abono(15), larvicida(49),. moscas del ganado(53).. curar gran. amplio. uso en la. variedades de enfermedades. IN. medicina tradicional,(54) para. un. FO. Tiene. RM. ÁT. pesticida en el control de plagas de insectos,(50,51) termiticida,(52) repelente de. DE. gastrointestinales, antipirético, diurético, antimalarico, antihelmíntico,. EM AS. antirreumática, cicatrizante, antioxidante, antibacteriana, antiinflamatoria, antiulcerogénica,. anticancerosa,. antitumoral,. antimutagénico,. (53,. (14). ST. enfermedades hepáticas, purificador de la sangre, bronquitis, tos, asma,. 60). IO. N. DE. SI. contra la lepra y sarna.(56). DI. RE. CC. De acuerdo a estudios relacionados por diferentes investigadores con respecto a la caracterización de su aceite esencial, y sus metabolitos con actividad antimicrobiana, tenemos a Kurade et al.,(45); Randrianalijaonaa et. al.,(57); Sousa et al.,(58); Kasali et al.,(59); Randrianalijaona et al., (60); Elansary et al.,(61); Rani, et al., 2013(62); Jyothi et al.,(63); quienes identificaron los 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. componentes mayoritarios de diferentes muestras de L. camara L. los cuales presentan actividad antimicrobiana son el β-cariofileno, zingibereno,. AC I. M UN. IC. ácido lantico, Sabineno, α-caryophyllene, davanone. (65, 66). Ó. N. germacreno-D, γ-curcumeno(64), linalol, y α-humuleno, limoneno, valecene,. CO. En la figura 01, se observa que S. aureus es sensible frente a las. Y. concentraciones de 25 y 50% del aceite esencial de L. camara, con. IC. A. formaciones de halos de inhibición del crecimiento de 11.47 y 17.80 mm. RM. ÁT. (Anexo 3) respectivamente; pero estos halos son menores si los. FO. comparamos con el halo de inhibición del crecimiento formado por el. IN. antibiótico Vancomicina (control) con 20.53 mm, indicando que estas. DE. concentraciones no son eficaces. Para poder determinar si existen. EM AS. diferencias significativa entre los promedios de las concentraciones se realizó la prueba de ANOVA (Ver Anexo 8), obteniendo como resultado. ST. que existe una diferencia significativa entre los promedios de las. DE. SI. concentraciones, realizándose posteriormente una Prueba Post ANOVA. N. para determinar la máxima concentración que inhibe el crecimiento de S.. CC. IO. aureus para lo cual se realizó la prueba de comparaciones múltiples de. DI. RE. Tukey obteniéndose 5 subgrupos de 25%, 50%, 75%, 100% y Vancomicina (Control), existiendo p<0.05, lo que demuestra que existe diferencia significativa entre. las diferentes concentraciones y la Vancomicina. (control).. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La concentración de 75% (869,1 mg/ml) presentó un halo de inhibición del crecimiento de 24.73 mm, con un valor de P< 0.05 (Ver Anexo 8) con. Ó. N. respecto al halo formado por Vancomicina que fue de 20.53 mm, esto indica. AC I. que la concentración de 75% es significativamente mayor al formado por el. M UN. IC. control. Un mejor resultado presentó la concentración de 100% (1158.8 mg/ml) con un diámetro de 33 mm, mayor en comparación con el control (p. CO. < 0.05) (Ver ANEXO 8), indicando que existe diferencia significativa con el. Y. formado por la Vancomicina, siendo esta concentración eficazmente. RM. ÁT. IC. A. sensible para S. aureus.. IN. FO. La inhibición con mayor significancia se observa a una concentración de. inhibitorio. es. reducido. con. respecto. al. crecimiento. de. EM AS. efecto. DE. aceite esencial más alta (100%). A bajas concentraciones se observó que el. microorganismo, en comparación con el control. Este resultado permite. ST. asegurar que S. aureus es significativamente más sensible a las. SI. concentraciones de 75 y 100% (869,1 y 1158.8 mg/ml) del aceite esencial. CC. IO. N. DE. de L. camara L. que el antibiótico Vancomicina.. DI. RE. Los resultados obtenidos coinciden con estudios realizados por Nayak et al(56) quien reportó actividad antimicrobiana de L. camara L. contra S.. aureus, K. Pneumoniae y E. coli, Kumar et al(67) en su investigación. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. encontró que el aceite esencial de L. camara L. es efectivo contra B. cereus,. AC I. Ó. N. B. pumilus, B. subtilis, S. aureus, E. coli, K. pneumoniae y P. aeruginosa.. IC. Benites et al.,(68) Indica que la actividad antibacteriana está relacionada con. M UN. la proporción químicas de los compuestos principales, así como de los. CO. componentes menores, donde la actividad antimicrobiana puede atribuirse a. Y. varios compuestos activos, así como a los efectos sinérgicos entre ellos, la. IC. A. variabilidad de quimiotipos, ciclo vegetativo, proceso de obtención del. (49, 61). (46, 69). la. solubilidad del aceite, el rango de. RM. ubicación geográfica, el clima. ÁT. aceite, las partes de la planta con sus estadios de desarrollo.. (70). FO. difusión en el agar, la evaporación.. concentración de los componentes. EM AS. DE. IN. activos y tipo de bacterias utilizadas. (63). ST. Según Sousa et al.,(65) los aceites esenciales interactúan afectando a la. SI. membrana plasmática, interfiriendo en la cadena respiratoria con la. DE. producción de energía (ATP); de modo que si la integridad de la membrana. IO. N. es destruida, entonces las propiedades de barrera, matriz para las enzimas y. DI. RE. CC. transductor de energía se ven comprometidos.. En la Fig. 02, E. coli presenta menor inhibición del crecimiento frente al aceite de L. camara L, para las concentraciones estudiadas de 25, 50, 75 y 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 100%, pues lo halos formados fueron de 4.37; 6.8; 9.47 y 11.87 mm respectivamente (Anexo 4); presentando un menor diámetro, en. Ó. N. comparación con el halo de inhibición del crecimiento formado por el. AC I. antibiótico Cloranfenicol (control) que fue 20.67 mm y aunque E. coli. M UN. IC. muestra cierto grado de inhibición, las concentraciones no son eficaces. Y. CO. comparándolas con el control (p < 0.05).. (71). obtuvo para E. coli halos de. ÁT. camara L. frente a E. coli; Deepak et al.,. IC. A. Nayak et al(56) y Kumar et al(67) reportaron actividad antimicrobiana de L.. IN. FO. RM. inhibición del crecimiento con un promedio de 10 mm.. DE. En la Fig. 03, se compara los halos de inhibición del crecimiento de S.. EM AS. aureus y E. coli frente a las concentraciones de 25, 50, 75 y 100% del aceite. ST. esencial de L. camara L, existiendo diferencia significativa (p < 0.05) entre. SI. ambas bacterias, es decir se observa que S. aureus presenta mayor grado de. DE. sensibilidad frente al aceite esencial en comparación a E. coli en todos los. DI. RE. CC. IO. N. tratamientos.. Estos resultados encontrados concuerdan con Kensa(72) que obtuvo zonas de inhibición en E. coli de 13 mm, P. aeruginosa 15 mm, S. aureus 22 mm. Seth et al(73) obtuvo inhibiciones de 24 y 20 mm para E. coli y S. aureus. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. respectivamente. Elansary et al(61) reporto actividad inhibitoria del aceite esencial de L. camara L. contra, B. subtilis, S. aureus, E. coli, a. Ó. N. concentraciones de 500, 500 y 250 mg/ml, respectivamente, Mani et al(74). AC I. trabajando con extracto de L. camara L reporto halos de inhibición en S.. IC. aureus de14 mm (200 mg/ml), Pseudomona sp 16 mm (190 mg/ml) y B.. M UN. cereus 16 mm (210 mg/ml), Naz & Bano(75) trabajaron con extractos de. CO. hojas de L. camara L. encontrando halos de inhibición de 21,7 mm contra S.. ÁT. IC. A. Y. aureus.. RM. A su vez investigaciones reportan que L. camara L. presenta actividad. FO. contra S. aureus, mas no contra E. coli, tal es el caso de Kurade et al(45) y. DE. IN. Benites et al.,(68); Dubey et al.,(76); Domingo y Lopez.,(77), de igual manera se. ST. EM AS. reportaron casos donde S. aureus no presenta inhibición del crecimiento(78).. SI. Según los resultados obtenidos con S. aureus y E. coli en comparación con. DE. los hallazgos de otras investigaciones, si bien coinciden con el mismo efecto. IO. N. inhibitorio, la eficacia del aceite esencial de L. camara L. resulto ser mayor. CC. en el caso de S. aureus, esto de debió posiblemente a la variación en su. DI. RE. composición. (59,. 60). . El mecanismo de acción de los terpenos y. sesquiterpenos no se entiende completamente, se especula que participan en la disrupción de la membrana por los compuestos lipofílicos, describiendo 3 posibles vías de acción: aumentando la permeabilidad de la membrana a 29. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..