Cromatina de Saccharomyces cerevisiae : estudios estructurales

UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

TESIS DOCTORAL

MEMORIA PARA OPTAR AL GRADO DE DOCTOR PRESENTADA POR

José Luis de Castro Rincón

DIRECTOR:

Julián Perera González

Madrid, 2015

© José Luis de Castro Rincón, 1987

Cromatina de Saccharomyces cerevisiae : estudios

estructurales

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UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA

CRONATINA DE Saccharomyces cerevisiae ESTÜDIOS ESTRUCTÜRALES

B IB LI O TE C A

u 2 ' f . s ' / f r ■ D i r e c t o r de l a T e s i s :

Dr . J u l i a n P e r e r a G o n z a l e z

T e s i s p r e s e n t a d a p a r a o p t a r a l g r a d o de DOCTOR EN CIENCIAS BI OLOGICAS

p o r J o s é L u i s de C a s t r o

M a d r i d , J u n i o de 1986

UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA

CROMATINÂ DE Saccharomyces cerevisiae ESTUDIOS ESTRÜCTURALES

D i r e c t o r de l a T e s i s :

Dr . J u l i a n P e r e r a G o n z a l e z

T e s i s p r e s e n t a d a p a r a o p t a r a l g r a d o de DOCTOR EN CI ENCI AS BI OLOGI CAS

p o r J o s é L u i s de C a s t r o

M a d r i d , J u n i o de 1986

ABREVIATÜRAS

DABA DNA DNH HMG

PCA PCNH PDA PMSF

pb RNA SDS T r i s UV

Ac i d o d i a m i n o b e n z o i c o Ac i d o d e s o x i r i b o n u c l e i c o D e s o x i r i b o n u c l e o h i s t o n a

P r o t e î n a de a l t a m o v i l i d a d e l e c - t r o f o r é t i c a

Ac i d o p e r c l ô r i c o

P r o t e î n a c r o mo s o ma l no h i s t o n a P o t a t o D e x t r o s e Agar

F l u o r u r o de p - m e t i l - f e n i l - s u l f o - n i l o

p a r e s de b a s e s Ac i d o r i b o n u c l e i c o D o d e c i l s u l f a t o s ô d i c o

T r i s ( h i d r o x i m e t i l ) a mi n o me t a n o u l t r a v i o l e t a

E s t a I n v e s t i g a c i o n s e h a d e s a r r o l l a d o e n e l D e p a r t a m e n t o de B i o q u i m i c a d e l a F a c u l t a d d e C i e n c i a s B i o l ô g i c a s d e l a U n i v e r s i d a d C o m p l u t e n s e , b a j o l a d i r e c c i o n d e l P r o f . D. J u l i a n . P e r e r a G o n z a l e z a q u i e n l e e s t o y a g r a d e c i d o p o r s u c o n s t a n t e a y u d a , a s î como a l P r o f . D. L u i s F r a n c o V e r a y a l P r o f . D. F r a n c i s c o Mo n t e r o C a r n e r e r o p o r s u a p o y o y v a l i o s o s c o n s e j o s .

A g r a d e z c o i g u a 1 m e n t e a l P r o f . D. A n g e 1 M a r t i n M u n i c i o p o r e l g r a n i n t e r e s d e m o s t r a d o p o r l a r e a l i z a - c i ô n de e s t e t r a b a j o .

De s e o t a m b i é n e x p r e s a r rai a g r a d e c i r a i e n t o a l P r o f . D.

J o s é G a v i l a n e s F r a n c o p o r s u s e n s e f î a n z a s y p o r s u t o t a l a p o y o q u e h a n c o n t r i b u î d o e n g r a n m e d i d a a l a r e a l i z a c i ô n de e s t e t r a b a j o . De s e o t a r a b i é n r a a n i f e s t a r l e rai a g r a d e c i r a i e n t o p o r h a b e r r a e h o n r a d o c o n s u a r a i s t a d d u r a n t e t o d o e s t e t i e m p o .

Tar abi én e x p r e s o rai a g r a d e c i r a i e n t o a m i s c o r a p a n e r o s de e q u i p o y a t o d o s a q u e l l o s q u e d e a l g u n a m a n e r a h a n c o n t r i b u î d o a l a r e a l i z a c i ô n d e l p r é s e n t e t r a b a j o , e s p e - c i a l r a e n t e a l D r . D. J u a n M a n u e l G a r c i a S e g u r a y a l D r . D. A l v a r o M a r t i n e z d e l Pozo.

INDICE

P a g i n a

1 . INTRODUCCION ... 1

1 .1 . C o m p o s i c i o n de l a c r o m a t i n a ... 1

1 . 1 . 1 . H i s t o n a s ... 3

1 . 1 . 1 . 1 . I n t e r a c c i o n e s de l a s h i s t o n a s ... 12

1 . 1 . 2 . P r o t e i n a s c r o m o s o m a l e s no h i s t o n a s ... 14

1 . 1 . 3 . P r o t e i n a s HMG ... 15

1 . 2 . E s t r u c t u r a de l a c r o m a t i n a ... 23

1 . 2 . 1 . O r g a n i z a c i o n d e l n u c l e o s o m a ... 26

1 . 2 . 1 . 1 . Cor e n u c l e o s o m a l ... 27

1 . 2 . 1 . 1 . 1 . C o n f o r m a c i o n d e l DNA ... 28

1 . 2 . 1 . 1 . 2 . E s t u d i o de l a s h i s t o n a s como com- p o n e n t e s d e l n u c l e o s o m a ... 35

1 . 2 . 1 . 1 . 3 . T r a n s i c i o n e s c o n f o r m a c i o n a l e s en e l n u c l e o s o m a l i m i t e ... 42

1 . 2 . 1 . 2 . Mononucl eos oma ... 46

1 . 2 . 1 . 2 . 1 . H1 ... 46

1 . 2 . 2 . E s t r u c t u r a s de o r d e n s u p e r i o r ... 51

1 . 3 . C r o m a t i n a a c t i v a ... 59

1 . 4 . C r o m a t i n a de l e v a d u r a ... 66

1 . 5 . T é c n i c a s f i s i c o q u l m i c a s u s a d a s e n e l p r é s e n t e e s t u d i o ... 74

1 . 5 . 1 . D i c r o i s m o c i r c u l a r ... 74

1 . 5 . 2 . D e s n a t u r a l i z a c i ô n t é r m i c a d e l DNA ... 76

1 . 6 . O b j e t i v o s de l a p r é s e n t e I n v e s t i g a c i o n . . . 77

Xi.

2 . PARTE EXPERIMENTAL ... 79

2 . 1 . M a t e r i a l b i o l ô g i c o ... 79

2 . 2 . C u l t i v o de l e v a d u r a ... 79

2 . 3 . P r e p a r a c i ô n de DNH ... 80

2 . 3 . 1 . P r e p a r a c i ô n de DNH c r u d a ... 80

2 . 3 . 2 . P u r i f i c a c i ô n de DNH ... 81

2 . 4 . P r e p a r a c i ô n de DNH s o l u b l e ... 82

2 . 4 . 1 . S o l u b i l i z a c i ô n de DNH p o r d i a l i s i s ... 82

2 . 4 . 2 . S o l u b i l i z a c i ô n p o r d i g e s t i o n con n u c l e a s a m i c r o c o c a l ... 82

2 . 5 . P r e p a r a c i ô n de n û c l e o s de S. c e r e v i s i a e . . . 83

2 . 5 . 1 . T r a n s f o r m a c i ô n de l a s c é l u l a s en e s f e r o p l a s t o s ... 83

2 . 5 . 2 . L i s i s de l e s e s f e r o p l a s t o s ... 85

2 . 6 . P r e p a r a c i ô n y f r a c c i o n a m i e n t o de c r o m a t i n a ... 87

2 . 6 . 1 . O b t e n c i ô n de f r a c c i o n e s s o l u b l e s ... 87

2 . 6 . 1 . 1 . D i g e s t i ô n de n û c l e o s con n u c l e a s a m i c r o c o c a l ... 87

2 . 6 . 1 . 2 . F r a c c i o n a m i e n t o de l a c r o m a t i n a ... 89

2 . 6 . 2 . A i s l a m i e n t o de mo n o n u c l e o s o ma s de l e v a d u r a ... 90

2 . 6 . 2 . 1 . C r o m a t o g r a f î a en Bi o Ge l A-5m ... 91

2 . 7 . T é c n i c a s e s p e c t r o s c ô p i c a s ... 91

2 . 7 . 1 . D i c r o î s m o c i r c u l a r ... 91

2 . 7 . 2 . E s p e c t r o s de a b s o r c i ô n ... 93

2 . 7 . 3 . D e s n a t u r a l i z a c i ô n t é r m i c a de DNA y n u c l e o p r o t e i n a s ... 93

2 . 8 . Mé t o d o s a n a l l t i c o s ... 95

2 . 8 . 1 . V a l o r a c i o n e s p e c t r o f o t o m é t r i c a de DNA . . . 95

2 . 8 . 2 . V a l o r a c i o n de DNA. Mé t odo f l u o r i m é t r i c o . 96 2 . 8 . 3 . E l e c t r o f o r e s i s de DNA en g e l e s de p o l i a c r i l a m i d a - a g a r o s a ... 98

2 . 8 . 4 . A i s l a m i e n t o de DNA ... 99

2 . 8 . 5 . E l e c t r o f o r e s i s de p r o t e i n a s en g e l de p o l i a c r i l a m i d a ... 100

2 . 9 . O t r o s m é t o d o s ... 101

2 . 9 . 1 . T r a t a m i e n t o de l a s b o i s a s de d i â l i s i s . . . 101

3 . RESULTADOS Y DISCUSION ... 102

I 3 . 1 . C u l t i v o de l e v a d u r a ... 102

3 . 2 . A i s l a m i e n t o y a n â l i s i s de n û c l e o s de l e v a d u r a ... 102

3 . 2 . 1 . C o m p o s i c i o n de l o s n û c l e o s de l e v a d u r a . . 106

3 . 3 . E s t u d i o de l a f r a c c i ô n de DNH s o l u b i l i z a d a p o r d i â l i s i s ... 108

3 . 3 . 1 . C a r a c t e r l s t i c a s e s t r u c t u r a l e s de l a f r a c c i ô n DNH-S^ ... 110

3 . 3 . 1 . 1 . E s p e c t r o de a b s o r c i ô n ... 110

3 . 3 . 1 . 2 . C o m p o s i c i ô n de l a f r a c c i ô n DNH-S^ ... 112

3 . 3 . 1 . 3 . E s p e c t r o de d i c r o î s m o c i r c u l a r ... 112

3 . 3 . 1 . 4 . Cur va de d e s n a t u r a l i z a c i ô n t é r m i c a . . . . 115

3 . 3 . 1 . 5 . A n â l i s i s de l a s p r o t e i n a s de l a DNH s o l u b l e ... 118

3 . 4 . E s t u d i o de l a f r a c c i ô n DNH-S^ s o l u b i l i ­ z a d a p o r d i g e s t i ô n c o n n u c l e a s a m i c r o c o c a l ... 123

3 . 4 . 1 . E s p e c t r o de a b s o r c i ô n ... 123

I V

3 . 4 . 2 . C o m p o s i c i ô n de l a c r o m a t i n a ... 125 3 . 4 . 3 . E s p e c t r o de d i c r o î s m o c i r c u l a r ... 125 3 . 4 . 4 . Cur va de d e s n a t u r a l i z a c i ô n t é r m i c a ... 126 3 . 4 . 5 . A n â l i s i s de l a s p r o t e i n a s de l a

c r o m a t i n a ... 130 3 . 5 . E s t u d i o de l a f r a c c i ô n a p a r t i r de

c u l t i v e s de l e v a d u r a ... 132 3 . 5 . 1 . E s p e c t r o de a b s o r c i ô n ... 133 3 . 5 . 2 . C o m p o s i c i ô n de l a DNH s o l u b l e ... 133 3 . 5 . 3 . E s t u d i o s de d i c r o s m o c i r c u l a r y

d e s n a t u r a l i z a c i ô n t é r m i c a ... 134 3 . 6 . E s t u d i o de f r a c c i o n e s s o l u b l e s de c r o m a t i n a

a p a r t i r de n û c l e o s ... 136 3 . 6 . 1 . D i g e s t i ô n de l o s n û c l e o s h a s t a un 5% de

DNA s o l u b l e en â c i d o ... 137 3 . 6 . 1 . 1 . C i n é t i c a de l a d i g e s t i ô n ... 138 3 . 6 . 1 . 2 . P r e p a r a c i ô n de l a s f r a c c i o n e s de l a

c r o m a t i n a ... 140 - E s t u d i o de l a f r a c c i ô n S2 ... 140 3 . 6 . 2 . D i g e s t i ô n de n û c l e o s en c o n d i c i o n e s

s u a v e s ... 145 3 . 6 . 2 . 1 . P r e p a r a c i ô n de f r a c c i o n e s de l a

c r o m a t i n a ... 145 - E s t u d i o de l a f r a c c i ô n S2 ... 146 - E s t u d i o de l a f r a c c i ô n S2* ... 150 3 . 7 . E s t u d i o s e s t r u c t u r a l e s c o n m o n o n u c l e o s o ma s

de l e v a d u r a ... 157 3 . 7 . 1 . A i s l a m i e n t o de mo n o n u c l e o s o ma s de

l e v a d u r a ... 157

3 . 7 . 1 . 1 . C r o m a t o g r a f l a e n B i o Ge l A-5m ... 160

3 . 7 . 2 . D i c r o î s m o c i r c u l a r de m o n o n u c l e o s o ma s . . . . 166

3 . 7 . 3 . D e s n a t u r a l i z a c i ô n t é r m i c a de mononu­ c l e o s o m a s ... 1 7 2 3 . 7 . 4 . E f e c t o de l a f u e r z a i ô n i c a ... 175

3 . 8 . E f e c t o de l a l o n g i t u d de l a c a d e n a n u c l e o s o m a l ... 177

3 . 8 . 1 . D e s n a t u r a l i z a c i ô n t é r m i c a ... 177

3 . 8 . 2 . D i c r o î s m o c i r c u l a r ... 182

CONCLUSIGNES ... 189

BIBLIOGRAFIA ... 191

1 . INTRODUCCION

La i n f o r m a c i o n g e n é t i c a de l a m a y o r p a r t e d e l o s o r g a n i s m e s s e e n c u e n t r a c o n t e n i d a e n s u DNA. P a r a e l c a s o de l o s e u c a r i o n t e s e s t a a f i r m a c i ô n e s a b s o l u t e . En l a s c é l u l a s d e e s t o s o r g a n i s m e s l a m a y o r p a r t e d e l DNA s e e n c u e n t r a e n e l n û c l e o y n o e n f o r m a l i b r e , s i n o q u e p r é s e n t a o t r a s e s p e c i e s - m o l e c u l a r e s a s o c i a d a s , f o r m a n d o un c o m p l e j o q u e s e d e n o m i n a c r o m a t i n a . Se t r a t a d e u n e d e l a s a r q u i t e c t u r a s m o l e c u l a r e s ma s a p a s i o n a n t e s , d e b i d o a s u e x t r a o r d i n a r i a c o m p l e j i d a d . En e f e c t o , e l DNA e u c a r i ô t i c o t i e n e u n e l o n g i ­ t u d s u p e r i o r e n v a r i e s ô r d e n e s de m a g n i t u d a l a s d i m e n s i o n e s d e l n û c l e o , p o r l o q u e s u e m p a q u e t a m i e n t o d e n t r o d e é l h a d e s e r c o n s i d e r a b l e y c o m p l e j o . Ademâs, e s t e e m p a q u e t a m i e n t o ha d e p e r m i t i r q u e o c u r r a n t o d o s l o s p r o c e s o s a so c i ad os a l a t r a n s m i s i o n de i n f o r m a c i o n g e n é t i c a . Es é v i d e n t e , p o r t a n ­ t e , q u e p a r a c o n o c e r l a f u n c i o n d e l a c r o m a t i n a , l o q u e c o n l l e v a r i a l a e x p l i c a c i o n de t o d o s l o s p r o c e s o s y m é c a n i s ­ mes de c o n t r o l de l a e x p r e s i ô n g e n é t i c a , e s n e c e s a r i o c o n o ­ c e r s u e s t r u c t u r a y c o m p o s i c i o n , y a q u e l l a n o d e s d e un p u n t b de v i s t a e s t â t i c o , s i n o d e s d e l a s p e r s p e c t i v a s de s u s r e l a - c i o n e s e s t r u c t u r a - f u n c i o n .

1 . 1 . COMPOSICION DE LA CROMATINA

La c r o m a t i n a e s t a c o m p u e s t a f u n d a m e n t a l m e n t e p o r DNA, RNA y p r o t e i n a s ( T a b l a I ) . No o b s t a n t e , a u n q u e un a f r a c c i ô n d e l RNA p u e d e s e r c o n s i d e r a d o como c o r a p o n e n t e i n -

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t r î n s e c o l a mayor p a r t e s e a t r i b u y e a l a t r a n s c r i p c i o n d e l DNA, ya q u e s u c o n t e n i d o v a r i a s e g ü n l a a ç t i v i d a d t r a n s c r l p - c i o n a l de l a c é l u l a .

Con r e s p e c t e a l a s p r o t e i n a s de l a c r o m a t i n a , e s t a s s e d i v i d e n e n d o s g r u p e s . Une f e r m a d o p e r u n e s p e l i - p é p t i d o s b â s i c e s , q u e s u p o n e n a l g e m a s de l a m i t a d d e l a s p r o t e i n a s c r o m o s o m a l e s , y q u e s e d e n o m i n a n h i s t o n a s . E l o t r o , c o m p u e s t o p o r e l r e s t e de l a s p r o t e i n a s c r o m o s o m a l e s , a c i d a s p n e u t r a s , y q u e s e d e n o m i n a n , p o r e x c l u s i o n , p r o t e i n a s c r o m o s o m a l e s n o h i s t o n a s (PCNH).

Se ha c o mp r o b a d o que l a c o m p o s i c i ô n de l a c r o m a t i ­ n a , e n c u a n t o a l a p r o p o r c i ô n d e l a s d i f e r e n t e s e s p e c i e s

m o l e c u l a r e s p r é s e n t e s , v a r i a s e g û n l a f a s e d e l c i c l o c e l u - l a r , de un modo p o s i b l e m e n t e r e l a c i o n a d o c o n s u a ç t i v i d a d . S i n e m b a r g o , l a r e l a c i ô n D N A / h i s t o n a s p e r m a n e c e p r â c t i c a m e n - t e c o n s t a n t e ( J o h n s , 1 9 7 1 ) y p r ô x i m a a l a un i d a d , d e mo d o q u e e s t e h e c h o s u e l e e m p l e a r s e como un c r i t e r i o a u x i l i a r de p u r e z a e i n t e g r i d a d q u i m i c a de l a c r o m a t i n a .

1 . 1 . 1 . HISTONAS

L a s h i s t o n a s s o n e l p r i n c i p a l g r ü p o d e p r o t e i n a s c r o m o s o m a l e s , p o r l o q u e h a s i d o a m p l i a m e n t e e s t u d i a d o ( I s e n b e r g , 1 9 7 9 ) . L a s h i s t o n a s s o n p r o t e i n a s b â s i c a s , d e p e q u e h o t a m a h o m o l e c u l a r , q u e s e e n c u e n t r a n a s o c i a d a s a l DNA. I n i c i a l m e n t e s e d e s c u b r i e r o n en t i m o de t e r n e r a , d o n d e e x i s t e n c i n c o f r a c c i o n e s p r i n c i p a l e s q u e s e han c l a s i f i c a d o a t e n d i e n d o a s u c o n t e n i d o e n a m i n o â c i d os b â s i c o s ( J o h n s ,

1 9 7 1 ) : l a H1 , muy r i c a e n l i s i n a ; l a s H2A y H2B, m o d e r a d a -

m e n t e r i c e s e n l i s i n a ; y l a s H3 y H4, r i c a s e n a r g i n i n a ( T a b l a I I ) .

L a s h i s t o n a s s e h a n e n c o n t r a d o en t o d o s l o s o r g a - n i s m o s e u c a r i o t i c o s i n v e s t i g a d o s ( I s e n b e r g , 1979) con e x c e p - c i o n d e a l g u n o s e u c a r i o n t e s i n f e r i o r e s , e n l o s q u e e s t a a u s e n t e l a h i s t o n a H1 c o mo e s e l c a s o d e S a c c h a r o m y c e s c e r e v i s i a e ( F r a n c o y c o l . , 1 9 7 4 ; F r a n c o y L ô p e z - B r a h a , 1 9 7 8 ) . Ademâs de l a s c i n c o f r a c c i o n e s p r i n c i p a l e s de h i s t o ­ n a s , s e h a n e n c o n t r a d o o t r a s e s p e c i f i c a s de a l g û n o r g a n i s m e o t e j i d o . A s i , s e h a d e s c r i t o e n e r i t r o c i t o s d e a v e o t r a h i s t o n a q u e s e h a d e n o m i n a d o H5, l a c u a l p a r e c e s u s t i t u i r p a r o i a l m e n t e a l a H1 ( N e e l i n y c o l . , 1 9 6 4 ; E d w a r d s y H n i l i - c a , 1 9 6 8 ) ; i g u a l m e n t e , e n e l e s p e r m à de c i e r t o s i n v e r t e b r a - d 08 m a r i n o s s e h a e n c o n t r a d o l a h i s t o n a 01 q u e t a m b i é n s u s t i t u y e a l a h i s t o n a H1 e n e s t o s o r g a n i s m e s ( P u i g d o m é n e c h y c o l . , 1 9 7 5 ) .

E l e s t u d i o de l a e s t r u c t u r a p r i m a r i a de l a s h i s t o ­ n a s h a c o n d u c i d o a l a d e t e r m i n a c i ô n de l a s e c u e n c i a de a l g u n a d e e l l a s . L a s p r i m e r a s e n s e c u e n c i a r s e t o t a l m e n t e f u e r o n l a s h i s t o n a s H4 de t i m o d e t e r n e r a ( D e L a n g e y c o l . , 1 9 6 9 a ; Ogawa y c o l . , 1 9 6 9 ) y d e g u i s a n t e ( De L a n g e y c o l . , 1 9 6 9 b ) , o b s e r v a n d o s e q u e s o l o m o s t r a b a n d o s d i f e r e n c i a s y a d e m â s c o n s e r v a t i v e s . P o r s u p a r t e , l a s e c u e n c i a d e l a h i s t o n a H3 de t i m o de t e r n e r a (DeLange y c o l . , 1972; O i s o n y c o l . , 1 9 7 2 ) y l a d e g u i s a n t e ( P a t t h y y c o l . , 1 9 7 3 ) d i f i e r e n e n s o l o c u a t r o p o s i c i o n e s ( P a t t h y y c o l . , 1 9 7 3 ) . E s t o s r e s u 1 t a d o s i n d i c a n u n a g r a n c o n s e r v a t i v i d a d e n e s t a s p r o t e i n a s , l o q u e v i e n e a p o y a d o p o r o t r o s e s t u d i o s de s e ­ c u e n c i a ( Von H o l t y c o l . , 1 9 7 9 ; I s e n b e r g , 1 9 7 9 ; U r b a n y

TABLA I I . - C o m p o s i c i ô n de a m i n o â c i d o s de l a s h i s t o n a s H2A, H2B, H3 y H4 d e t i m o d e t e r n e r a y de l a h i s t o n a H1 d e t e s t i c u l 0 d e t r u c h a . La c o m p o s i c i ô n s e da e n m o l e s po r c i e n t o . L o s d a t o s s e h a n c a l c u l a d o a p a r t i r d e l a s s e c u e n c i a s d e a m i n o â c i d o s d e H1 ( Mc Le o d y c o l . , 1 9 7 7 ) , H2A ( Ye oma n y c o l 1 9 7 2 ) , H2B ( I w a i y c o l . . 1 9 7 0 ) , H3 ( D e L a n g e y c o l . , 197 2 ) y H4 (Ogawa y c o l . . 1 9 6 9 ) .

A m i n o â c i d o Ml H2A H2B M3 Mi

Asp 0. 5 1.5 2. 4 2. 9 2. 9

Asn 1.5 4. 7 2. 4 0. 8 2. 0

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S e r 6 . 8 3 . 1 1 1 . 2 3 . 7 2 . 0

Gl u 3 . 1 5 . 4 . 5 . 6 5 . 2 3 . 9

Gi n - 3 . 9 2 . 4 5 . 9 2 . 0

P r o 9 . 4 3 . 9 4 . 8 4 . 4 1 . 0

Gl y 5 . 1 1 0 . 9 5 . 6 5 . 2 1 6 . 7

Al a 2 6 . 8 1 3 . 2 1 0 . 4 1 3 . 3 6 . 9

Cys - - - 1 . 5 -

Val 7 . 2 6 . 2 7 . 2 4 . 4 8 . 8

Met - - 1 . 6 1 . 5 1 . 0

I l e 1 . 0 4 . 7 4 . 8 5 . 2 5 . 9

Leu 3 . 6 1 2 . 4 4 . 8 8 . 9 7 . 8

T y r 0 . 5 2 . 3 4 . 0 2 . 2 3 . 9

Phe 0 . 5 0 . 8 1 . 6 3 . 0 2 . 0

Trp - - - - -

H i s - 3 . 1 2 . 4 1 . 5 2 . 0

Lys 2 9 . 9 1 0 . 9 1 6 . 0 9 . 6 1 0 . 8

Arg 1 . 0 9 . 3 6 . 4 1 3 . 3 1 3 . 7

^ b â s i c o s 3 0 . 9 2 3 . 3 2 4 . 8 2 4 . 4 2 6 . 5

L y s / A r g 2 9 . 9 1. 1 2 . 5 0 . 7 0 . 8

c o l . , 1979) . S i n e m b a r g o , p o s i b l e s e x c e p c i o n e s a e s t a s i t u a - c i ô n s e h a n o b s e r v a d o e n H3 d e l e v a d u r a ( B r a n d t y Von H o l t , 1 9 7 6 ; M a r d i a n e I s e n b e r g , 1978b) y T e t r a h y m e n a ( J o h m a n y G o r o v s k y , 1 9 7 6 ) , c u y a s m o v i l i d a d e s e l e c t r o f o r é t i c a s d i f i e r e n d e l a p r o t e î n a de t i m o d e t e r n e r a . P o r o t r o l a d o , l a H4 d e T e t r a h y m e n a d i f i e r e d e l a de t i m o de t e r n e r a e n un m a y o r n u m é r o de r e s t e s como m u e s t r a n d a t o s a c e r c a de s u s e c u e n c i a ( G l o v e r y G o r o v s k y , 1 9 7 8 ) . L a s h i s t o n a s m o d e r a d a m e n t e r i c a s e n l i s i n a , H2A y H2B, s o n mas v a r i a b l e s q u e H3 y H4, p e r o de t o d a s , e s l a H1 l a mas v a r i a b l e ( I s e n b e r g , 1 9 7 9 ) ( F i g u r a 1) .

El a n â l i s i s de l a s e c u e n c i a de l a s h i s t o n a s r é v é l a u n a d i s t r i b u c i ô n p e c u l i a r d e l o s a m i n o â c i d o s e n l a c a d e n a po l i p e p t î d i c a ( F i g u r a 2 ) . En l a s h i s t o n a s H2A, H2B, H3 y H4 l a m a y o r î a de l o s r e s i d u o s b â s i c o s y o t r o s d e s e s t a b i l i z a n t e s d e l a < * - h â l i c e s e e n c u e n t r a n e n e l t e r c i o a m i n e - t e r m i n a i ( J o h n s o n y c o l . , 1 9 7 4 ; D e L a n g e y S m i t h , 1 9 7 1 ) , m i e n t r a s q u e l a r e g i o n c a r b o x i l o - t e r m i n a i c o n t i e n e l a m a y o r î a d e l o s r e s i d u o s h i d r o f ô b i c o s . En c o n s e c u e n c i a , l a s h i s t o n a s p r é s e n ­ t a n una e s t r u c t u r a g l o b u l a r c o n un e x t r e m o , e l a m i n o - t e r m i - n a l , e n c o n f o r m a c i o n a p e r i ô d i c a ( E d w a r d s y S h o o t e r , 1 9 7 0 ; C h a p m a n y c o l . , 1 9 7 6 ; S a u t i e r e y c o l . , 1 9 7 3 ) . La h i s t o n a H1, p o r o t r a p a r t e , p r é s e n t a u n a e s t r u c t u r a a l g o d i f e r e n t e , ya q u e e x i s t e n d o s r e g i o n e s b â s i c a s , c a d a u n a de e l l a s e n un e x t r e m o de l a m o l e c u l a , con r e s t o s d e s e s t a b i l i z a n t e s de l a o ( - h e l i c e ( C o l e , 1 9 7 7 ) , y p r e s e n t a n d o una e s t r u c t u r a g l o b u l a r c e n t r a l ( H a r t m a n y c o l . , 1 9 7 7 ) . De e s t a f o r m a , l o s d o s e x t r e m o s f l e x i b l e s e s t â n e n c o n f o r m a c i o n a p e r i ô d i c a ( J o h n s o n y c o l . , 1 9 7 4 ). Como c a s o p a r t i c u l a r , l a h i s t o n a H5 m u e s t r a e s t o s r e s i d u o s d e s e s t a b i l i z a n t e s de o<-he l i c e s ô l o e n e l e x -

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