Efecto del extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L "romero" sobre la viabilidad de Streptococcus B hemolítico "in vitro"

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(1)DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. A Dios.. AC IÓ. N. Por haberme permitido llegar hasta este punto y darme día a día la fortaleza para salir adelante. IC. A. Y. CO. M. UN IC. y no desmayar en el largo camino de mi vida.. ÁT. A mis padres Ausberto y Percila.. RM. Porque creyeron en mi y porque me sacaron adelante, dándome ejemplos. IN FO. dignos de superación y entrega, porque en gran parte gracias a ustedes, hoy. DE. puedo ver alcanzada mi meta, ya que siempre estuvieron impulsándome en. AS. los momentos más difíciles de mi carrera, y porque el orgullo que sienten por. EM. mi, fue lo que me hizo ir hasta el final. Va por ustedes, por lo que valen,. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. porque admiro su fortaleza y por lo que han hecho de mí.. A mis hermanos Luis Alberto y Luís enrique.. Por darme su apoyo siempre, por depositar en mí, la confianza y la paciencia, gracias a ustedes.. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. AGRADECIMIENTOS. A la Dra. Icela Rodríguez Haro y el Dr. Marco. UN IC. Salazar castillo docentes de la Universidad. CO. manera determinante tanto en la elaboración de. M. Nacional de Trujillo, por haber contribuido de. A. Y. esta investigación como en mi formación. A Nereyda, por apoyarnos mutuamente en nuestra formación profesional, gracias por compartir buenos y malos momentos, por ser confidentes, compañeras y amigas. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. académica.. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TITULO PROFESIONAL DE. AC IÓ. N. BIÓLOGO – MICROBIÓLOGO. UN IC. Dr. Orlando Velásquez Benítez. A. Dra. Vilma Julia Méndez Gil. Y. CO. M. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. RM. ÁT. IC. VICERRECTORA ACADÉMICA. IN FO. Dr. Pedro Lavalle Dios. DE. SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. EM. AS. Dr. Hermes Escalante Añorga. DE. SI ST. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Dr. César Augusto Jara Campos. DI. RE. CC. IO. N. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Ms. C. Pedro Arnaldo Alvarado Salinas. DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. AC IÓ. N. Señores miembros del jurado:. UN IC. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados. M. y Títulos de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y Parasitología de la. CO. Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a. IC. A. Y. vuestra consideración y criterio el presente trabajo de tesis titulado:. RM. ÁT. “Efecto del extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L.. IN FO. “romero” sobre la viabilidad de Streptococcus β-hemolítico in vitro”, con el cual. DE. pretendo obtener el Título Profesional de Biólogo Microbiólogo.. DE. SI ST. criterio establecido.. EM. AS. Esperando que los miembros del jurado se sirvan calificar este trabajo según su. DI. RE. CC. IO. N. Trujillo, Marzo del 2013. Br. Melissa Noemí Gutiérrez Moreno AUTOR. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MIEMBROS DEL JURADO Los suscritos, miembros del jurado, declaran que la presente tesis ha sido ejecutada en concordancia con las normas de la Escuela Académico Profesional de. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Microbiología y Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo.. A. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. PRESIDENTE. Y. Dr. Marco Salazar Castillo. SECRETARIA. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. Dra. Icela Rodríguez Haro. Ms. C. Anibal Quintana Díaz VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. Los profesores que suscriben, miembros del Jurado Examinador,. N. declaran que el presente Informe de Tesis titulado: “Efecto del extracto. AC IÓ. hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” sobre la. UN IC. viabilidad de Streptococcus β-hemolítico in vitro”, ha cumplido con los. ÁT. IC. A. Y. CO. M. requisitos formales y fundamentales, siendo APROBADO por UNANIMIDAD.. RM. Dr. Marco Salazar Castillo. Dra. Icela Rodríguez Haro SECRETARIA. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. PRESIDENTE. Ms. C. Anibal Quintana Díaz VOCAL. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR La que suscribe, profesora asesora de tesis titulada: “Efecto del extracto. N. hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” sobre la viabilidad. UN IC. AC IÓ. de Streptococcus β-hemolítico in vitro”.. Y. CO. M. CERTIFICA:. IC. A. Que ésta ha sido desarrollada, de acuerdo al reglamento establecido por la. ÁT. Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en. RM. conformidad con su correspondiente proyecto, y que el informe ha sido redactado. DE. IN FO. acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.. AS. Por lo tanto, autorizo a la Bachiller Melissa Noemí Gutiérrez Moreno, continuar. SI ST. EM. con el trámite del reglamento correspondiente.. DI. RE. CC. IO. N. DE. Trujillo, Marzo del 2013. Dra. Icela Rodríguez Haro ASESORA. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE. ii. AGRADECIMIENTOS. N. DEDICATORIA. AC IÓ. Pág.. iii iv. UN IC. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. v. M. PRESENTACIÓN. CO. MIEMBROS DEL JURADO. A. Y. APROBACIÓN. ÁT. IC. DEL ASESOR. RM. ÍNDICE. IN FO. RESUMEN. vii viii ix xi xii. DE. ABSTRACT. vi. 8. SI ST. OBJETIVOS. MATERIAL Y MÉTODOS. 9. 2.1. MATERIAL DE ESTUDIO. 9. DE. II.. 1. AS. INTRODUCCIÓN. EM. I.. 9. DI. RE. CC. IO. N. 2.2.1 MÉTODO 2.2.2 Preparación de la muestra de ensayo. 9. 2.2.3. 10. Ensayo microbiológico. 2.2.4 Análisis estadístico. 12. III.. RESULTADOS. 13. IV.. DISCUSIÓN. 17. CONCLUSIÓN. 21. V.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VI.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 22. ANEXOS. 29. Anexo 1. Rosmarinus officinalis L. “romero”. 30. de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero”. AC IÓ. 31. N. Anexo 2. Proceso de obtención de extracto hidroalcohólico. 32. A. 34. IC. en Caldo Infusión cerebro- Corazón (BHI). Y. Anexo 5. Crecimiento de Streptococcus β-hemolítico. 33. CO. Anexo 4. Coloración Gram de Streptococcus β-hemolítico. M. en Agar Sangre. UN IC. Anexo 3. Cultivo de Streptococcus beta-hemolítico. ÁT. Anexo 6. Halo de inhibición de crecimiento de Streptococcus β-hemolítico por. RM. Penicilina (control positivo de inhibición). 35. IN FO. Anexo 7. Promedio del halo de inhibición (mm) de diez cultivos de. DE. Streptococcus β-hemolítico frente a un grupo control positivo: 36. AS. penicilina. EM. Anexo 8. Análisis de Varianza unidireccional (ANOVA) del efecto del extracto. SI ST. hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” sobre 37. DI. RE. CC. IO. N. DE. la sensibilidad de Streptococcus β-hemolítico “in vitro”. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN Se determinó el efecto del extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” sobre la viabilidad de Streptococcus β-hemolítico “in vitro”. Se. AC IÓ. N. utilizaron hojas de Rosmarinus officinalis recolectados en el Caserío de Jesús María del distrito de Simbal, Departamento de La Libertad y cultivos aislados de secreciones. UN IC. faríngeas de los estudiantes del VII ciclo de Microbiología y Parasitología de la. M. Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo.. CO. Se trabajó con cuatro concentraciones (250; 500; 750 y 1000 mg/mL) de. A. Y. extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis y como control de. ÁT. IC. inhibición: penicilina. Para evaluar el efecto del extracto sobre el microorganismo se. RM. utilizó el método de Kirby Bauer modificado, sembrando un inóculo estandarizado con. IN FO. el patrón de turbiedad 0,5 del Nefelómetro de McFarland en placas con Agar Mueller Hinton por la técnica de siembra en superficie.. DE. Se encontró que el promedio de los halos de inhibición de los cultivos de. EM. AS. Streptococcus β-hemolítico obtenidos con las diferentes concentraciones ensayadas. SI ST. varía de 22,3 a 37,3 mm. A medida que aumenta la concentración del extracto hidroalcohólico de Rosmarinus officinalis L. “romero” en el rango de 250 a 1000. IO. N. hemolítico.. DE. mg/mL, se obtiene un mayor diámetro de halo de inhibición de Streptococcus β-. CC. Palabras clave: Streptococcus β-hemolítico, Rosmarinus officinalis, Actividad. DI. RE. antimicrobiana.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT The effect of hydroalcoholic extract of leaves of Rosmarinus officinalis L. "romero" about the viability of Streptococcus β-hemolítico "in vitro". Were used Rosmarinus. AC IÓ. N. officinalis leaves collected in the village of Jesus Maria district Simbal, Department of La Libertad and pharyngeal cultures of students of VII cycle of Microbiology and. UN IC. Parasitology, Faculty of Biological Sciences, National University of Trujillo.. M. We worked with four concentrations (250, 500, 750 and 1000 mg / mL) of. CO. hydroalcoholic extract of leaves of Rosmarinus officinalis and as inhibition control:. A. Y. penicillin. To evaluate the effect of the extract on the microorganism used the modified. ÁT. IC. Kirby Bauer method, planting a standardized inoculum pattern Nephelometer turbidity. RM. of 0.5 McFarland on Mueller Hinton agar plates by surface plating technique.. IN FO. It was found that the average inhibition halos crops β-hemolytic Streptococcus obtained with the different concentrations tested varies from 22.3 to 37.3 mm. With. DE. increasing concentration of the hydroalcoholic extract of Rosmarinus officinalis L.. EM. AS. "romero" in the range of 250 to 1000 mg / mL, yields a higher inhibition zone diameter. SI ST. of Streptococcus β-hemolítico.. DI. RE. CC. IO. N. activity.. DE. Keywords: Streptococcus β-hemolítico, Rosmarinus officinalis, antimicrobial. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I.. INTRODUCCION. Las Infecciones Respiratorias Agudas (IRA) es el conjunto de infecciones del aparato respiratorio causados por microorganismos virales, bacterianos y otros; con un. AC IÓ. N. periodo inferior a 15 días, se encuentra entre las enfermedades más comunes del ser humano, representan la principal causa de morbilidad en el mundo y la causa más. UN IC. frecuente de utilización de servicios de salud que cualquier otro tipo de enfermedad. M. infecciosa en todos los países. Afecta fundamentalmente a niños en edad escolar, y es. A. Y. CO. más prevalente en climas fríos o templados y en los periodos de invierno 1, 2.. ÁT. IC. Las IRA se clasifican en infecciones del tracto respiratorio inferior (neumonía,. RM. bronquiolitis aguda, y bronquitis) y en infecciones de las vías aéreas superiores. IN FO. (resfriado, sinusitis aguda, epiglotitis, laringitis aguda, otitis media aguda, laringotraqueobronquitis, y faringitis estreptococócica y no estreptococócica). Dentro de. DE. los organismos con mayor frecuencia responsables de las IRA, cuyo hábitat es el tracto. EM. SI ST. Gram Negativos 3,4.. AS. respiratorio superior están los estafilococos, estreptococos, bacilos diftéricos y cocos. DE. Una de las IRA más frecuentes que afectan a las vías aéreas superiores es la. IO. N. Faringitis, que es una inflamación y/o infección de la faringe y/o el área periamigdalar.. CC. Las bacterias responsables de este cuadro clínico son principalmente: Estreptococos (A,. RE. C y G), Mycobacterium pneumoniae, Staphylococcus aureus, Corynebacterium. DI. diphteriae, Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae tipo b. Los signos y síntomas de una Faringitis Aguda infecciosa y no infecciosa se confunden, por eso es necesario diferenciar entre una causa viral y bacteriana. Si tenemos en cuenta la cantidad de microorganismos que pueden producir Faringitis, llegamos a la conclusión. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de que el papel del Laboratorio de Microbiología en una Faringitis Aguda es detectar la Faringitis Estreptocócica cuyo microorganismo patógeno es del género Streptococcus.. AC IÓ. N. Los miembros del género Streptococcus son cocos grampositivos de aproximadamente 0,5 a 1,0 mm de diámetro que por lo general crecen en pares o. UN IC. cadenas de longitud variable y son ampliamente distribuidos en la naturaleza. Los. M. Streptococcus son inmóviles y negativos para las pruebas de catalasa y oxidasa, y. A. Y. CO. además son aerobios facultativos, existiendo algunas especies anaerobios obligados 5,6.. ÁT. IC. Tienen variables y complejos requerimientos nutricionales. La mayor parte de. RM. los Streptococcus requieren para su aislamiento medios sólidos enriquecidos con sangre. IN FO. o suero. La diferenciación de las especies que componen este género se utilizan tres patrones hemolíticos: hemólisis completa (β), hemólisis. incompleta. (α). y. DE. ausencia de hemólisis (γ). De considerable importancia es la hemólisis tipo beta, que. EM. AS. exhibe Streptococcus pyogenes y muchos otros Streptococcus patógenos humanos.. SI ST. Además se clasifican en cinco grupos antigénicos; actualmente se pueden reconocer. DE. varios serogrupos clasificados de la A hasta la H y de K a V 7.. IO. N. El género Streptococcus son causa de las enfermedades más difundidas y de. CC. mayor morbilidad en los seres humanos; pueden desencadenar tres tipos de. RE. complicaciones: supurativas, no supurativas y mediadas por toxinas; este ubicuo. DI. organismo es la causa bacteriana más frecuente de Faringitis Aguda y también da lugar a una gran variedad de infecciones cutáneas y sistémicas. 1,7. . La puerta de ingreso. determina el cuadro clínico principal como: infecciones localizadas (faringitis aguda, escarlatina, erisipela, celulitis) o infecciones sistémicas primarias, las cuáles son 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. propensas a desencadenar en complicaciones más serias como Fascitis Necrosante (gangrena estreptococócica), Fiebre Reumática (FR) y Glomerulonefritis Difusa Aguda. AC IÓ. N. Postestreptocócica (GNDA) 8,9.. El hombre es el reservorio natural de los estreptococos betahemolíticos grupo A. UN IC. y es transmitido de persona a persona por vía respiratoria. La infección más frecuente. M. que produce es la Faringitis Estreptococócica, su periodo de incubación varía de 2 a 4. CO. días y la mayoría de los casos se ven en niños en edad escolar (de 5 a 15 años de edad) 10,11. . La. A. Y. con una frecuencia de 15 – 30% y en adultos con una frecuencia de 5 – 10%. ÁT. IC. Faringitis Estreptococócica se caracteriza por un fuerte dolor de garganta, inflamación. RM. de amígdalas, secreciones en las amígdalas, ablandamiento de los nódulos linfáticos. IN FO. cervicales, fiebre no muy elevada; también puede producir infecciones en el oído interno (otitis), en las glándulas mamarias (mastitis), y en las capas superficiales de la. DE. piel (impétigo). También se han observado casos frecuentes de faringitis debidos a. SI ST. EM. AS. Streptococcus del grupo B, C y G 12,13.. El tratamiento de la faringitis producida por Streptococcus del grupo A es. DE. ampliamente conocido, siendo el antibiótico de elección la penicilina, también se 14,15. . Estudios realizados demuestran que el. IO. N. recomienda el uso de la eritromicina. CC. Streptococcus grupo A sigue siendo sensible a la penicilina, aunque en pacientes con. RE. alergia a la penicilina es preferible la administración de macrólidos. No obstante, el. DI. tratamiento estándar con penicilina presenta un 30% de fracasos; por lo que, en los últimos años, se ha examinado fuertes alternativas de tratamiento, siendo una de ellas la búsqueda de plantas con efecto antimicrobiano 16,17,18.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Para elegir el régimen de tratamiento de la Faringitis Estreptococócica es necesario considerar varios aspectos como: efectividad, espectro antimicrobiano, costo y la posible generación de tolerancias o resistencias bacterianas . Este último aspecto. AC IÓ. N. debe ser altamente considerado porque se ha observado que en los últimos 15 años, la resistencia microbiana a múltiples drogas van en un franco aumento tornándose en un. UN IC. problema mundial de salud pública. Este aumento de resistencia es mayor en bacterias,. M. aunque actualmente ocurre también en virus, hongos y protozoarios. La resistencia. CO. bacteriana se torna una amenaza en los tratamientos de infecciones comunes, debido al. A. Y. uso inapropiado o excesivo de antibióticos generando la aparición de cepas resistentes a. RM. ÁT. IC. la mayoría de antibióticos 19,20.. IN FO. La resistencia bacteriana es un tema importante en el estudio de los antibióticos, porque su comprobación implica el fracaso de la terapia antibiótica. Las infecciones por las bacterias multirresistentes generan una amplia morbilidad y. DE. causadas. EM. AS. mortalidad, así mismo causan un mayor costo por mayor estancia hospitalaria y. SI ST. complicaciones, lo que hace necesario la búsqueda de nuevas opciones o alternativas terapéuticas para dichas infecciones. 21. . Esta situación, así como la aparición de efectos. DE. indeseables de ciertos antibióticos, ha llevado a los científicos a investigar nuevas. IO. N. sustancias antimicrobianas a partir de plantas consideradas popularmente medicinales 22.. CC. La organización Mundial de la Salud estima que casi el 80% de todos los habitantes de. RE. la tierra, confían en alternativas tradicionales para resolver sus principales necesidades. DI. de salud 23.. Las propiedades curativas de ciertas especies de plantas se atribuyen a la presencia de una sustancia química en sus tejidos denominada: “principio activo”, que 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. son sustancias que ejercen una acción farmacológica beneficiosa o perjudicial sobre el organismo vivo, el cual se halla equilibrado por la presencia de sustancias complementarias, que van a potenciarse entre sí, de forma que no se acumulen en el. AC IÓ. N. organismo y no tengan efectos colaterales. Un gran porcentaje de estos principios activos están presentes en extractos y en aceites esenciales que pueden obtenerse a partir. UN IC. de hojas, bulbos, rizomas y frutos; los cuales contienen diferentes componentes como:. M. alcaloides, esteroides, terpenoides, flavonoides, gomas, resinas y taninos, etc. que. CO. pueden ser letales para las células microbianas (bacterias, levaduras y mohos) o. A. Y. simplemente servir como inhibidores de sus actividades metabólicas. Y que pueden. ÁT. IC. encontrase distribuidas por toda la anatomía de la planta o en algunas partes en. IN FO. RM. particular el jugo, el látex, las secreciones, etc.24, 25.. La flora peruana es muy rica en especies a las que la medicina tradicional. DE. atribuye eficaces propiedades terapéuticas, las que sin embargo aún no son investigadas. SI ST. EM. AS. convenientemente, como es el caso de Rosmarinus oficinalis L. 26.. La especie vegetal Rosmarinus oficinalis L. perteneciente a la familia. DE. Lamiaceae, y conocida popularmente como romero, es una especie común en la. IO. N. Península Ibérica, y en general, en toda la cuenca mediterránea. Se cría en todo tipo de. CC. suelos, preferiblemente los áridos, secos y algo arenosos y permeables, adaptándose. RE. muy bien en los suelos pobres. Se desarrolla preferentemente en un clima cálido y. DI. relativamente seco. En el Perú crece en Costa, Sierra y Selva hasta los 3,500 msnm, formando parte del sotobosque, en laderas de tierras bajas y en lugares secos. Puede medir de 50 a 150 cm de altura y es perenne, frondoso y muy ramificado. Los principios activos se encuentran en las hojas que pueden llegar a medir 3 cm de largo y 4mm de 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ancho, son pequeñas y muy abundantes y presentan forma linear. Las flores bilabiadas son de color azul violeta pálido, rosa o blanco con cáliz verde o algo rojizo y el fruto es. AC IÓ. N. una tetraquenio de color pardo.. Esta planta es muy usada en la medicina tradicional, rica en principios activos. UN IC. que ejercen su acción sobre numerosos órganos como: analgésico, antidiarreico,. M. antirreumática, sudorífico, cicatrizante, tónico, estimulante, colagogo, estomacal. El. . Es aperitiva, espasmolítica, carminativa, antiséptica,. Y. 27. A. hepatoprotectoras entre otras. antiespasmódico, y tiene propiedades. CO. romero es carminativo, digestivo y. ÁT. IC. fungiestática, emenagoga, expectorante, estimulante el sistema nervioso (aceite. RM. esencial). Colerética, y diurética (ácidos fenólicos y flavonoides). En uso externo, el. IN FO. aceite esencial es antiinflamatorio, cicatrizante y estimulante del cuero cabelludo;. DE. asimismo, es rubefaciente 28.. EM. AS. Actualmente existe un renovado interés por los productos naturales como. SI ST. fuentes de molécula con actividad antimicrobiana, han verificado que el extracto etanólico y el aceite esencial de hojas de Rosmarinus officinalis L. tiene actividad. DE. antimicrobiana contra algunas bacterias de interés alimentario como Escherichia coli, aureus,. Salmonella. typhimurium,. Shigella. sonnei,. Listeria. IO. N. Staphylococcus. , también se ha evaluado la eficiencia antibacteriana de un extracto etanólico de. RE. 29. CC. monocytogenes, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus cereus y Lactobacillus plantarum. DI. Rosmarinus officinalis L. que contiene altas concentraciones de polifenoles antioxidantes, en dos modelos de infección en piel de ratón: superficial y subcutáneo contra la bacteria patógena Staphylococcus aureus demostrando su acción bacteriostática 30. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Estudios previos informan que el extracto de hoja de R. officinalis presenta actividad antimicrobiana contra bacterias Gram positivas: Leuconostoc mesenteroides, Lysteria monocytogenes,. Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans y Bacillus. AC IÓ. 31. N. cereus; y también actividad antifúngica contra Penicillium roqueforti y Botrytis cinerea . Por otro lado, se ha demostrado el potencial de los extractos de romero sobre aislados. UN IC. clínicos de Pseudomonas aeruginosa provenientes de pacientes con fibrosis quística 32.. M. Las plantas medicinales han constituido desde tiempos remotos un recurso para. CO. cubrir las necesidades terapéuticas. Hoy en día su estudio se ha convertido en un hecho. Y. científico universal, que trasciende no solo en beneficio de la salud sino del sistema. IC. A. productivo y económico de los países. Es ampliamente conocida la utilización empírica. RM. ÁT. de las plantas como agentes de la salud en múltiples culturas del mundo transmitidas a. IN FO. través de generaciones. Este saber tradicional se ha ido perfeccionando a lo largo del tiempo, tamizado por el rigor científico de ensayos químicos, farmacológicos,. DE. toxicológicos y clínicos que busca los principios activos para explicar en forma racional. SI ST. EM. AS. el uso terapéutico de una planta y que permite además la vigencia de su empleo 33.. Por tal razón, considerando que los productos naturales constituyen una. DE. alternativa para combatir diversas enfermedades infecciosas, y dado que nuestro país. IO. N. posee una variada riqueza de plantas medicinales, entre ellas Rosmarinus officinalis L.. CC. “romero”, la presente investigación tuvo como objetivo conocer el Efecto del extracto. RE. hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” sobre la viabilidad de. DI. Streptococcus β-hemolítico “in vitro” y así contribuir al uso de esta planta como una alternativa en el tratamiento de Faringitis estreptococócica en fitoterapia por su fácil adquisición y bajo costo en nuestro medio.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. OBJETIVOS.  OBJETIVO GENERAL. N. Determinar el efecto de la concentración del extracto hidroalcohólico de. AC IÓ. -. Rosmarinus officinalis L. “romero” sobre la sensibilidad de Streptococcus β-. M. UN IC. hemolítico “in vitro”. Determinar si las concentraciones de 250, 500, 750 y 1000 mg/mL del. ÁT. -. IC. A. Y. CO.  OBJETIVOS ESPECÍFICOS. RM. extracto hidroalcohólico de Rosmarinus officinalis L. “romero”, afecta la. -. DE. IN FO. sensibilidad de Streptococcus β-hemolítico.. Determinar si el diámetro del halo de inhibición está en relación directa a la. -. SI ST. EM. AS. concentración del extracto hidroalcohólico de “romero”.. Determinar si las concentraciones del extracto hidroalcohólico de “romero”. DE. tienen mejor actividad antibacteriana que la Penicilina para Streptococcus β-. CC. IO. N. hemolítico.. DI. RE. -. Determinar mediante análisis estadísticos las diferencias significativas entre las diferentes concentraciones del extracto hidroalcohólico de “romero”.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II.. MATERIAL Y MÉTODOS. AC IÓ. N. 2.1. MATERIAL DE ESTUDIO. Hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” procedente del Caserío de. UN IC. Jesús María, distrito de Simbal, Provincia de Trujillo, Departamento de La. M. Libertad- Perú. La identificación se realizó en el Herbarium Truxillense de. A. Y. CO. la Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo – Perú (Anexo 1).. ÁT. IC. Diez cultivos de Streptococcus β- hemolítico aislados de secreciones. RM. faríngeas de los estudiantes del VII Ciclo de Microbiología y Parasitología. IN FO. de la facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de. MÉTODOS. AS. 2.2.. DE. Trujillo.. EM. 2.2.1 Preparación de la muestra de ensayo. SI ST. 2.2.1.1 Tratamiento y obtención del extracto. DE. Las hojas seleccionadas fueron lavadas con agua destilada y. DI. RE. CC. IO. N. secadas bajo sombra durante 2 días. Se continuó con el secado en estufa a 40ºC por 24 horas y luego se pulverizó en un molino de cuchillas hasta obtener un polvo fino por tamizaje. Posteriormente se hizo la obtención del extracto alcohólico al 100% por el Método de Maceración 34 (Anexo 2). A 30.0 g. de polvo fino se maceró con 300 mL de alcohol al 100% durante una semana, luego se reflujó por dos horas; posteriormente, se filtró y luego se concentró por pervaporación obteniéndose el 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. extracto hidroalcohólico de “romero” seco a partir del cual se obtuvieron las concentraciones estudiadas (Anexo 2).. AC IÓ. N. 2.2.1.2 Preparación de las diluciones para la realización del Método de Difusión en Agar.. UN IC. A partir de extracto seco, se preparó las diluciones en Agua. M. destilada al 250, 500, 750 y 1000 mg/mL luego se tapó. CO. herméticamente y se conservó en refrigeración (4-7ºC) hasta. IC. A. Y. realizar las pruebas.. RM. ÁT. 2.2.2 Ensayo microbiológico. IN FO. 2.2.2.1 Aislamiento del cultivo de Streptococcus β-hemolítico. Se realizó hisopados faríngeos a los estudiantes del VII Ciclo de. DE. Microbiología y Parasitología de la Facultad de Ciencias. EM. AS. Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo. Se sembró en. SI ST. Agar Sangre al 5% y se incubó 37ºC por 24 horas. Luego se identificaron las colonias por la β-hemólisis en Agar Sangre 35 y se. DI. RE. CC. IO. N. DE. evaluó la pureza de los cultivos mediante coloración Gram. 36. ,. posteriormente se sembró en tubos de ensayo conteniendo Caldo Infusión Cerebro - Corazón (BHI), se incubó a 37ºC por 24 horas (Anexo 3, 4 y 5).. 2.2.2.2 Preparación y estandarización del inóculo de Streptococcus βhemolítico. Los cultivos de Streptococcus β-hemolítico se sembraron en medio Tioglicolato y Agar Sangre y con las colonias se prepararon 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. suspensiones en 10 mL de Solución Salina Fisiológica Estéril hasta alcanzar la densidad similar a la turbidéz del tubo Nº 0,5 del. AC IÓ. 2.2.2.3 Sensibilidad antibiótica de Streptococcus β-hemolítico.. N. Nefelómetro de Mac Farland (1,5 x 108 cel/mL).. UN IC. La prueba de sensibilidad antibiótica se determinó a los 10 cultivos. M. de Streptococcus β-hemolítico utilizando como control positivo de. CO. inhibición: Penicilina.. Y. La evaluación se realizó mediante el método de difusión de Kirby. IC. A. Bauer modificado. Se sembró el inóculo de Streptococcus β-. RM. ÁT. hemolítico en placas con Agar Müeller Hinton Modificado por. IN FO. siembra en superficie. Se secaron las placas a estufa por 10 minutos aproximadamente, posteriormente se hizo un pocillo de 6 mm de. DE. diámetro en cada placa, y se agregaron 0.2 mL de las. AS. concentraciones indicadas (250, 500, 750 y 1000 mg/mL) del. EM. extracto hidroalcohólico previamente preparado además del grupo. SI ST. control, luego las placas se incubaron a 37ºC por 24 horas y se. DE. realizó la lectura. El ensayo se realizó por triplicado para cada. 2.2.2.4 Medición de los halos de inhibición Se realizó la medición de los halos de inhibición del crecimiento. DI. RE. CC. IO. N. cultivo.. bacteriano en milímetros (mm).. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.3. Análisis estadístico Los resultados obtenidos se analizaron mediante el programa SPSS 14 donde las pruebas estadísticas usadas fueron el análisis de Varianza unidireccional. N. (ANOVA) para observar las diferencias significativas entre las diferentes. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. concentraciones 37 (Anexo 4).. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VI. RESULTADOS. Los diámetros de los halos de inhibición de los diez cultivos de. AC IÓ. N. Streptococcus β-hemolítico frente a las concentraciones estudiadas (250, 500, 750 y. 1000 mg/mL) del extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L.. CO. M. UN IC. “romero”, se presentan en la tabla 1 y se observa que varían de 22,3 a 37,3 mm.. En la figura 1 muestra los diámetros promedios de halos de inhibición de. IC. A. Y. crecimiento de Streptococcus β-hemolítico a diferentes concentraciones de extracto. ÁT. hidroalcohólico de hojas de R. officinalis y se observa que a medida que aumenta la. RM. concentración del extracto hidroalcohólico de hojas de “romero”, aumenta el. DE. IN FO. diámetro de los halos de inhibición de los cultivos de Streptococcus β-hemolítico.. β-hemolítico. por. diferentes. concentraciones. de. de. extracto. EM. Streptococcus. AS. En la figura 2 se observa los halos de inhibición de crecimiento. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero”.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 1: Promedio del halo de inhibición (mm) de diez cultivos de Streptococcus β-hemolítico frente a cuatro concentraciones de extracto hidroalcohólico de “romero” y un grupo control positivo:. UN IC. AC IÓ. N. penicilina.. Concentraciones de "romero" (mg/mL) 500. 750. 1000. Y. 250. CO. M. N° Cultivos. 23,33. 3. 23,67. 4. 25,33. 5. 24,00. 6 7. 30,00. 35,33. 29,00. 30,33. 35,67. 28,00. 30,67. 37,33. 29,67. 31,00. 35,67. 22,67. 28,33. 31,00. 34,67. 22,33. 28,67. 31,00. 36,00. 23,67. 27,33. 30,0. 35,67. 24,67. 29,00. 31,00. 34,00. 24,33. 29,33. 31,00. 35,67. 23,70. 28,63. 30,67. 35,57. DE AS. EM. IO. N. DE. 8. CC DI. RE. 28,33. ÁT. 2. RM. 28,67. 10. 35,67. IN FO. 23,00. 9. 30,67. SI ST. 1. IC. A. Promedio de halos de inhibición (mm). 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. a: p< 0,05. CC. IO. Fig. 1. Diámetros promedios de halos de inhibición de crecimiento de Streptococcus β-. DI. RE. hemolítico a diferentes concentraciones de extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero”.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 1 3. 4. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. 3. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. 2. DE. Fig. 2 Halo de inhibición de crecimiento de Streptococcus β-hemolítico por diferentes. IO. N. concentraciones de extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis. CC. L. “romero”. 2. 500 mg/mL. 3. 750 mg/mL. 4. 1000 mg/mL. DI. RE. 1. 250 mg/mL. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. V. DISCUSIÓN La utilización de sustancias naturales en el tratamiento de diferentes enfermedades, incluidas las de etiología infecciosa, constituye en la actualidad un. AC IÓ. N. desafío en la medicina y se ofrece como una alternativa, especialmente en aquellas dolencias para las que no existe un remedio adecuado. Sin duda el reino vegetal es el. UN IC. que ofrece mayor variedad de sustancias potencialmente útiles aplicables a las. M. enfermedades humanas, en concreto a aquellas producidas por microorganismos. Es por. Y. .. ÁT. IC. A. 38. CO. eso, que la población está cada vez más interesada en este tipo de “terapias alternativas”. IN FO. RM. Las plantas medicinales elaboran en su metabolismo una serie de sustancias denominadas principios activos, que son en general metabolitos secundarios, cuya. DE. función en el vegetal no es del todo bien conocida y no son esenciales en el desarrollo. AS. de la planta. Son relativamente estables por lo que la mayor parte de ellos se puede. SI ST. EM. encontrar en la planta fresca como en la planta desecada 39.. DE. En relación al efecto del extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus. N. officinalis L. “romero” sobre la viabilidad de Streptococcus β-hemolítico “in vitro” (fig.. CC. IO. 2), se puede observar que hay inhibición del crecimiento de Streptococcus β-hemolítico. RE. en todas las concentraciones empleadas (250, 500, 750 y 1000 mg/mL) de extracto. DI. hidroalcohólico de R. officinalis, esto concuerda con lo reportado por Mangena y. Muyima que demostraron que Streptococcus pyogenes fue el más afectado por los aceites esenciales de Rosmarinus Officinalis 40.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Así mismo, se han demostrado que el extracto de Rosmarinus officinalis presenta actividad antimicrobiana contra bacterias Gram positivas: Leuconostoc mesenteroides,. Lysteria monocytogenes, cereus;. y. también. actividad. aureus, Streptococcus. antifúngica. contra Penicillium. AC IÓ. N. mutans y Bacillus. Staphylococcus. roqueforti y Botrytis cinerea. Se han realizado estudios de la eficacia de un extracto. UN IC. etanólico de “romero” contra Staphylococcus aureus en dos modelos de infección en. M. piel de ratón, como por ejemplo en infecciones producidas por heridas quirúrgicas. Los. CO. resultados evidenciaron la acción bacteriostática del extracto de Rosmarinus officinalis. Y. que contiene 4.6% de polifenoles activos contra la bacteria patógenas Staphylococcus. RM. ÁT. IC. A. aureus en la infección presente en la piel de ratón.. IN FO. En la figura 1 y 2 se puede apreciar que hay inhibición del crecimiento de Streptococcus β-hemolítico en todas las concentraciones empleadas, encontrándose que. DE. a medida que aumentan las concentraciones del extracto hidroalcohólico de hojas de R.. AS. officinalis en el rango de 250 a 1000 mg/mL aumenta el halo de inhibición de. EM. crecimiento de Streptococcus β-hemolítico, demostrándose el efecto antimicrobiano. DE. SI ST. sobre la sensibilidad de dicha bacteria.. N. En el Anexo 2, las diferentes concentraciones del extracto hidroalcohólico de. CC. IO. hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero”, presentaron halos de inhibición de. RE. Streptococcus β-hemolítico de mayor diámetro que los obtenidos con la penicilina.. DI. Mientras que en la figura 3 se observa que a diferentes concentraciones del extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” presentaron halos de inhibición de Streptococcus β-hemolítico de mayor diámetro que los obtenidos con. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. penicilina, lo cual indicaría que dicho extracto podría ser utilizado en el tratamiento de infecciones por dicha bacteria.. AC IÓ. N. En el anexo 3 se observa las colonias típicas de Streptococcus β-hemolítico, siendo su principal factor de virulencia la proteína M, que hace posible la multiplicación. UN IC. de los estreptococos en el huésped: el complejo de peptidoglucano y polisacáridos C. M. produce toxicidad celular y las hemolisinas, estreptolisinas O y S destruye la membrana. A. Y. CO. de los eritrocitos y otras células.. ÁT. IC. Según los resultados de este estudio demuestran que los principios activos de. RM. Rosmarinus officinalis L. “romero” tiene actividad bactericida frente a Streptococcus β-. IN FO. hemolítico por la presencia de taninos los cuales son sustancias complejas que se presentan como mezcla de polifenoles difíciles de separar. Los taninos pueden ser. DE. tóxicos a hongos filamentosos, levaduras y bacterias. 41. . Por lo tanto, existen tres. EM. AS. hipótesis en cuanto a su mecanismo de acción: la inhibición de enzimas de. SI ST. microorganismos, ligándose como sustratos a esas enzimas; a través de su acción sobre la membrana celular, modificando su metabolismo, y por la complementación de los. DE. taninos con los iones metálicos, disminuyendo estos iones esenciales para el Además los taninos precipitan proteínas. IO. N. metabolismo de los microorganismos.. CC. formando una capa protectora sobre la mucosa y piel inflamada disminuyendo así el. RE. proceso inflamatorio. Además, el carnosol y ácido ursólico, serían los responsables del. DI. mencionado efecto antimicrobiano 42.. En el Anexo 4 nos muestra que existe diferencia significativa entre el grupo experimental y el grupo control siendo todas las concentraciones de “romero” a 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. excepción de 250 mg/mL más efectivas que la penicilina; y la concentración 1000 mg/mL tiene más efecto antimicrobiano contra Streptococcus β-hemolítico. Según el análisis estadístico se encuentra que hay diferencia significativa entre las. N. concentraciones del extracto hidroalcohólico de Rosmarinus officinalis y el halo de. AC IÓ. inhibición de crecimiento de Streptococcus β-hemolítico, lo que demuestra que el. UN IC. crecimiento de Streptococcus β-hemolítico es dependiente de la concentración de. CO. M. extracto hidroalcohólico de hojas de R. officinalis con una certeza del 95%.. Y. En la figura 2 se puede evidenciar el mayor halo de inhibición se observa a la. IC. A. concentración de 1000 mg/mL con respecto al grupo control positivo, esto se debería a. RM. ÁT. que la concentración empleada en el extracto hidroalcohólico de “romero” es mayor que. IN FO. la contenida en la penicilina, se debe a que en los antibióticos existen principios activos puros y en el extracto de “romero” están los principios activos antibacterianos con otras. DE. sustancias que pueden interferir con los principios activos disminuyendo su efecto, esto. EM. AS. no sucede con los antibióticos que si se hallan en estado puro 43.. SI ST. Es necesario hacer notar que el efecto antimicrobiano de dicho extracto se. DE. produce a concentraciones mayores a la del antibiótico patrón, por lo que se sugiere;. N. evaluar la toxicidad de este extracto mediante un estudio “in vivo” acerca del efecto del. CC. IO. extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” sobre. DI. RE. Streptococcus β-hemolítico.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VI. -. CONCLUSIONES. El extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero”. El diámetro del halo de inhibición está en relación directa a la concentración. UN IC. -. AC IÓ. N. afecta la viabilidad de Streptococcus β-hemolítico.. Las concentraciones ensayadas de extracto hidroalcohólico de “romero”. Y. -. CO. M. del extracto hidroalcohólico de “romero”.. IC. A. (500, 750 y 1000 mg/mL) presentaron halos de inhibición de Streptococcus. ÁT. β-hemolítico de mayor diámetro que los obtenidos con penicilina, a. IN FO. Existe diferencia significativa entre las concentraciones del extracto. DE. -. RM. excepción de 250 mg/mL.. AS. hidroalcohólico de R. officinalis y el halo de inhibición de crecimiento de. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. Streptococcus β-hemolítico. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Barberán J, Giménez M, Aguilar L y Prieto J. Evidencia científica y concepción. N. global del tratamiento empírico de la infección de vías respiratorias bajas en la. UN IC. AC IÓ. comunidad. Rev Esp Quimioterap 2004; 17 (4): 317-324.. 2. Carmona Hernández JC. Infección Respiratoria Aguda en la relación con la. CO. M. contaminación atmosférica y otros factores ambientales. Arch Med Manizales 2009;. IC. A. Y. 9 (1):69-79.. ÁT. 3. Díez O, Batista N, Bordes A, Lecuona M y Lara M. Diagnóstico microbiológico de. RM. las infecciones del tracto respiratorio superior. Enferm Infecc Microbiol Clin 2007;. DE. Madigan M, Martinko J y Parker J. Brock. Biología de los microorganismos. 10ma. AS. 4.. IN FO. 25 (6): 387-393.. 5.. SI ST. EM. ed. Madrid: Prentice Hall; 2003.. Brooks G, Butel J, Morse S. Microbiología Médica de Jawetz, Melnick y Adelberg.. IO. N. DE. 17º ed. México: Manual Moderno; 2002.. RE. CC. 6. Murray P, Kobayashi G, Pfaller M, Rosental K. Microbiología Médica. 2º ed.. DI. Madrid: HarcoutBrace; 1997.. 7.. Chávez C, Requelme L, Natividad J, Luján V, Otiniano G, Benites C et al. Frecuencia y susceptibilidad antimicrobiana de Streptococcus beta-hemolítico del. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 16. Limia A, Jiménez M, Delgado T. Caracterización fenotípica de la resistencia a eritromicina de cepas del género Streptococcus aislado de muestras clínicas. Rev.. AC IÓ. N. Infectología. 2000; 26 (9): 82-85.. 17. Feder H, Gerber M, Randolph M, Stelmach P, Kaplan E. Once-daily therapy for. M. UN IC. Streptococcal pharyngitis with amoxicillin. Pedriatrics1999; 103(1): 47-51.. CO. 18. Virksvee P. Antibiotics and the development of resistant microorganisms. Can. IC. A. Y. homeopathy be an alternative? Homeopathy. London 2003; 92 (2): 99-107.. RM. ÁT. 19. Goldmann D y Hushins W. Control of Nosocomial antimicrobial-resistant bacteria:. IN FO. A Strategic priority for hospital worldwide. Clin Infect Dis. 1997; 24 (1): 139-145.. DE. 20. León Jaramillo E. Resistencia bacteriana a los antibióticos en la Unidad de Cuidados. EM. AS. intensivos, Hospital de caldas, 1992-1994. Rev Colom Med1996; 27(2): 66-68.. SI ST. 21. Heleno B. Conferencia magistral Investigación en plantas medicinales: Desafíos y. DE. Oportunidades. Segundo Simposium Internacional de Plantas Medicinales y. CC. IO. N. Fitoterapia Americano. Lima-Perú 2004; 9-12.. RE. 22. Zampini I, Cudmani N, Isla M. Actividad antimicrobiana de plantas medicinales. DI. argentinas sobre bacterias antibiótico-resistentes. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia. Universidad Nacional de Tucumán. Argentina. Rev Argentina 2007; 41.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 23. Álvarez M, Isaza G, Echevarry H. Efecto antibacteriano “in vitro” de Austroeupato riuminulaefolium H.B.K. “salvia amarga” y Ludwigia polygonoides H.B.K. “Clavo de laguna”. Facultad de Ciencias para la salud. Universidad de Caldas. Colombia.. AC IÓ. N. RevBiosalud 2005; 14: 46-55.. UN IC. 24. Madaleno I. Etno-farmacología en Iberoamérica, una alternativa a la globalización de las prácticas de cura. Cuadernos geográficos. Universidad de Granada, España. CO. M. 2007; 61-95.. IC. A. Y. 25. Muñoz M. Efecto del extracto etanólico de hojas de Passiflora foetida “Granadilla. ÁT. de culebra” sobre el crecimiento in vitro de Staphylococcu saureus, Salmonella. RM. tiphyy Pseudomonas aeruginosa. (Tesis Maestral). Universidad Nacional de. IN FO. Trujillo; 2010.. DE. 26. López M. El romero: Planta aromática con efectos antioxidantes. Ámbito. EM. AS. farmacéutico fitoterapia2008; 27 (7).. SI ST. 27. Estrada Orozco S. Determinación de la actividad antibacteriana in vitro de extractos de romero (Rosmarinus officinalis) y tomillo (Thymus vulgaris). Escuela Superior. IO. N. DE. Politécnica de Chimborazo. Riobamba- Ecuador. 2010.. CC. 28. Muñoz C. Plantas medicinales españolas Rosmarinus officinalis L. (Lamiaceae). DI. RE. “Romero”. Departamento de Botánica, Facultad de Farmacia, Universidad de Salamanca, España 2002;21: 105-118.. 29. Castaño H, Ciro G, Zapata J, Jiménez S. Actividad bactericida del extracto etanólico y del aceite esencial de hojas de Rosmarinus officinalis L. sobre algunas bacterias de. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. interés alimentario. Universidad de Antioquia Medellín, Colombia 2010; 17 (2): 149-154.. AC IÓ. N. 30. Barni M, Fontanals A, Moreno S. Estudio de la eficacia antibiótica de un extracto etanólico de Rosmarinus officinalis L. contra Staphylococcus aureus en dos modelos. UN IC. de infección en piel de ratón. Boletín Latinoamericano y del Caribe de Plantas. CO. M. Medicinales y Aromáticas. 2009; 8 (3): 219-233.. Y. 31. .Klancnik A, Guzej B, Kolar M, Abramovic H y Moz I. In vitro Antimicrobial and. IC. A. Antioxidant Activity of Commercial Rosemary Extract Formulations. J Food Protec.. RM. ÁT. 2009; 72 (8): 1744–1752.. potencial de extractos de. IN FO. 32. Mengoni E, Castañeda N, Centron D, Moreno S, Pivetta O, Cafferata E. et al. Uso romero sobre aislados clínicos de P. aeruginosa. DE. provenientes de pacientes con fibrosis quística. Boletín Latinoamericano y del. EM. AS. Caribe de Plantas Medicinales y Aromáticas. 2007; 6 (6): 354-355.. SI ST. 33. Muñoz O, Montes M y Wilkomirsky T. Plantas medicinales de uso en Chile.. N. DE. Química y Farmacología. Editorial Universitaria S.A. Chile 2004; 15-16.. CC. IO. 34. Lock O. Investigación Fitoquímica – métodos en el estudio de productos naturales.. DI. RE. 3ª ed. Lima: Editorial Pontificia; Universidad Católica Del Perú. 1994.. 35. Sacsaquispe C y Velásquez J. Manual de procedimientos para la prueba de sensibilidad antimicrobiana por el método de disco difusión. Instituto Nacional de Salud. Ministerio de Salud del Perú; 2002.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 36. Mac Faddin. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia. AC IÓ. N. clínica. 3ª ed. Madrid: Editorial Médica Panamericana S.A.; 2003.. 37. Gómez M. Introducción a la metodología de la investigación científica. 1ª ed.. M. UN IC. Córdoba: Editorial Brujas; 2006.. CO. 38. Domingo D y López-Brea M. Plantas con acción antimicrobiana. Rev Esp. IC. A. Y. Quimioterap. 2003; 16(4): 385-393.. IN FO. RM. ÁT. 39. Villar Del Fresno A. Farmacognesia general. España: Editorial Síntesis; 1999.. 40. Mangena T y Noyuma N. Comparative evaluation of the antimicrobial activities of. DE. essential oils of Artemisia afra, Pteronia incana and Rosmarinus officinalis on. AS. selected bacteriaand yeast strains. Letters in Applied Microbiology. 1999; 28: 291-. SI ST. EM. 296.. DE. 41. Murphy M. Plant products as Antimicrobial Agents Clinical. Microbiology. CC. IO. N. Reviews. 1999; 12(4): 564-582.. RE. 42. Bonner J y Galston A. Principios de Fisiología vegetal.5º ed. Madrid: Editorial. DI. Aguilar; 1993: 304-305.. 43. Guevara C y Guzmán B. estudio fitoquímico del Extracto Metanólico de Cheilanthes megriophyla “Cuticuti” y su efecto antibacteriano in vitro sobre Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tesis para optar el Grado de Bachiller en Farmacia y Bioquímica. Universidad. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Nacional de Trujillo.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. ANEXOS. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. Anexo 1. Rosmarinus officinalis L. “romero”.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. 1. 4. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. 3. DE. Anexo 2. Proceso de obtención de extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus. N. officinalis L. “romero”.. CC. IO. 1. Maceración de polvo seco de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” en. RE. alcohol al 100%.. DI. 2. Reflujo por dos horas para la obtención del extracto hidroalcohólico de “romero”.. 3. Secado del extracto hidroalcohólico de “romero”. 4. Extracto seco.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. N. DE. Anexo 3. Cultivo de Streptococcus beta-hemolítico en Agar Sangre.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. N. Anexo 4. Coloración Gram de Streptococcus β-hemolítico.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(46) N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Streptococcus β-hemolítico en Caldo Infusión cerebro-. CC. IO. Anexo 5. Crecimiento de. DI. RE. Corazón (BHI).. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(47) SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. Anexo 6. Halo de inhibición de crecimiento de Streptococcus β-hemolítico por. DI. RE. CC. IO. N. Penicilina (control positivo de inhibición).. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(48) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 7. Promedio del halo de inhibición (mm) de diez cultivos de Streptococcus β-. 1. 27. 2. 29. 3. 28. 4. 29. 5. AC IÓ. Penicilina. A. Y. CO. M. UN IC. N° Cultivos de Streptococcus β-hemolítico. IC. N. hemolítico frente a un grupo control positivo: penicilina.. ÁT. 30. RM. 6. IN FO. 7. 9. 27 28 27. DE. 8. 29. 27. EM. AS. 10. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. 28,1. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(49) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 8. Análisis de Varianza unidireccional (ANOVA) del efecto del extracto hidroalcohólico de hojas de Rosmarinus officinalis L. “romero” sobre la sensibilidad de. AC IÓ. N. Streptococcus β-hemolítico “in vitro”.. UN IC. Subconjuntos homogéneos PROMEDIOS. 10,00. 10. 28,1000. 500,00 750,00 1000,00 Sig. 250,00 10,00 500,00 750,00 1000,00 250,00. 10 10 10. A. SI ST. 10,00 500,00 750,00 1000,00. DE. Duncana. IC ÁT RM. 1,000 23,7000. ,612. 30,6700 1,000. 35,5800 1,000. 28,1000 28,6300 30,6700 35,5800. 23,7000. 10 10 10 10. 28,1000 28,6300 30,6700 35,5800 1,000. ,160. 1,000. 1,000. N. Sig.. 4. 28,6300. IN FO. 10 10 10 10 10 10. 23,7000. M. 10. 3. Y. 250,00. EM. Tukey B. 2. DE. a. Subconjunto para alfa = 0.05 1. AS. HSD de Tukeya. N. CO. TRATAMIEN TO. DI. RE. CC. IO. Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 10,000.. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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