NORMA TÉCNICA
NTC
COLOMBIANA 5594
2008-02-27
CALIDAD DEL AGUA.
DETECCIÓN Y RECUENTO DE PSEUDOMONAS
AERUGINOSA POR EL MÉTODO DE FILTRACIÓN
POR MEMBRANA
E: WATER QUALITY. DETECTION AND ENUMERATION OF
PSEUDOMONAS AERUGINOSA. METHOD BY MEMBRANE
FILTRATION.
CORRESPONDENCIA: esta norma es una adopción modificada (MOD), respecto al documento de referencia, la norma ISO 16266:2006.
DESCRIPTORES: agua; método horizontal, método de análisis; microbiología; análisis microbiológico; recuento; recuento en placa; pseudomonas aeruginosa.
I.C.S.: 07.100.20; 07.100
Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC) Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. (571) 6078888 - Fax (571) 2221435
PRÓLOGO
El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo nacional de normalización, según el Decreto 2269 de 1993.
ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el sector gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en los mercados interno y externo.
La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último caracterizado por la participación del público en general.
La NTC 5594 fue ratificada por el Consejo Directivo del 2008-02-27.
Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en todo momento a las necesidades y exigencias actuales.
A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a través de su participación en el Comité Técnico 25 Microbiología.
ALIMENTOS POLAR COLOMBIA S.A. ALPINA PRODUCTOS ALIMENTICIOS S.A. ANNAR DIAGNOSTICA IMPORT LTDA. ARCHIVO DE BOGOTÁ
ASBIOQUIM LTDA.
ASEBIOL LABORATORIO LTDA. ASINAL LTDA.
ASOCIACIÓN COLOMBIANA DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA COSMÉTICA -ACCYTEC- AVESCO KOKORICO S.A.
BIANALISIS
BIOCONTROL LTDA. BIOQUILAB LTDA.
BIOTRENDS LABORATORIOS LTDA. CALIDAD INDUSTRIAL LTDA.
CARULLA VIVERO S.A. CONGELAGRO S.A.
DUPONT QUALICON DE COLOMBIA ENZIPÁN DE COLOMBIA LTDA.
INDUSTRIAS ALIMENTICIAS ZENU S.A. INSTITUTO DE GENÉTICA UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
INSTITUTO NACIONAL DE NORMAS TÉCNICAS Y CERTIFICACIÓN-ICONTEC IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA. JHONSON DIVERSEY COLOMBIA LTDA. KOYOMAD S.A.
LABCONTROL E.U.
LABFARVE LABORATORIO DE FARMACOLOGÍA VEGETAL
LABORATORIO EMICAL LTDA. LABORATORIO SFC LTDA. LABORATORIOS GRAM LTDA. LABORATORIOS MICROLAB LTDA. LESNIAK E.U.
MERCADEO DE ALIMENTOS DE COLOMBIA S.A.
MERCK S.A.
MICROBIÓLOGOS ASOCIADOS LTDA. NULAB LTDA.
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA PURIFICACIÓN Y ANÁLISIS DE FLUIDOS LTDA.
QUALA S.A. QUIK LTDA.
SECRETARÍA DISTRITAL DE SALUD DE BOGOTÁ
SERVICIOS DE LABORATORIO CLÍNICO LTDA.
SUIZO S.A.
UNIVERSIDAD DE LOS ANDES UNIVERSIDAD MANUELA BELTRÁN UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA VILASECA LTDA.
Además de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las siguientes empresas:
3M COLOMBIA S.A.
ACEITES Y GRASAS VEGETALES S.A. ALGARRA S.A.
AQUALAB
ASOCIACIÓN COLOMBIANA DE MICROBIOLOGÍA BAVARIA S.A.
BIOMERIEUX COLOMBIA BLANCA USECHE
CASA LUKER S.A. CENICAÑA
CENTROAGUAS S.A. E.S.P. CERCAL LTDA.
CERVECERÍA LEONA
COMPAÑÍA NACIONAL DE CHOCOLATES S.A. CONSULTORÍAS MICROBIOLÓGICAS
COOPERATIVA DE GANADEROS DE CARTAGENA LTDA.
CREPES Y WAFLES S.A.
EMPRESA DE ACUEDUCTO Y ALCANTARILLADO DE BOGOTÁ
FABRICA DE ESPECIAS Y CONDIMENTOS EL REY S.A.
FRIGORÍFICO GUADALUPE S.A. FRIGORÍFICO SUIZO S.A.
FRIGORÍFICOS COLOMBIANOS S.A. FRUGAL S.A.
HOSPITAL DEPARTAMENTAL DE VILLAVICENCIO INGENIO PICHICHI S.A.
INGENIO RIOPAILA
INSTITUTO COLOMBIANO AGROPECUARIO -ICA-
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
INVIMA - INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA MÉDICA
LA CONSTANCIA COLOMBIA
LABORATORIO DE GENÉTICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR
LABORATORIO MICROBIOLÓGICO SIS LABORATOTORIO MICROBIOLÓGICO DE BARRANQUILLA
LARKIN
LEVAPÁN S.A.
LLOREDA GRASAS S.A. MEDIIMPLANTES LTDA. MICROLABY LTDA.
MINISTERIO DE PROTECCIÓN SOCIAL. NESTLÉ DE COLOMBIA S.A.
PASIFLORA COLOMBIANA S.A.
PRODUCTORA DE CONCENTRADOS Y JUGOS DE FRUTA
QUIOS LTDA.
REPRESENTACIONES BIOTECNOLÓGICAS LTDA.
RICA RONDO, INDUSTRIA NACIONAL DE ALIMENTOS S.A.
SCHERING COLOMBIANA S.A.
TECNIMICRO LABORATORIO DE ANÁLISIS UNIVERSIDAD CATÓLICA INGECAL UNIVERSIDAD JORGE TADEO LOZANO VIKINGOS
ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados normas internacionales, regionales y nacionales y otros documentos relacionados.
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CONTENIDO
Página
INTRODUCCIÓN ... 1
1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN ... 1
2. REFERENCIAS NORMATIVAS ... 1 3. DEFINICIONES ... 2 4. FUNDAMENTO ... 2 4.1 FILTRACIÓN ... 2 4.2 RECUENTO ... 2 4.3 CONFIRMACIÓN ... 2
5. DILUYENTES, MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS ... 3
5.1 GENERALIDADES ... 3
5.2 MEDIO DE CULTIVO ... 3
5.3 MEDIOS DE CONFIRMACIÓN Y REACTIVOS ... 5
6. EQUIPOS Y MATERIAL DE VIDRO ... 6
6.1 GENERALIDADES ... 6
6.2 MATERIAL DE VIDRIO ... 7
6.3 INCUBADORA ... 7
6.4 LÁMPARA ULTRAVIOLETA ... 7
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Página
8. PROCEDIMIENTO ... 7
8.1 GENERALIDADES ... 7
8.2 FILTRACIÓN POR MEMBRANA ... 7
8.3 INCUBACIÓN DE LAS MEMBRANAS ... 7
8.4 EXAMEN DE LAS MEMBRANAS ... 8
8.5 CONFIRMACIÓN ... 8 9. EXPRESIÓN DE RESULTADOS ... 9 10. INFORME DE ENSAYO ... 10 11. DATOS ESTADÍSTICOS ... 10 12. INTERFERENCIAS ... 10 13. ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD ... 11 DOCUMENTO DE REFERENCIA ... 15 TABLAS Tabla 1. Etapas requeridas para la confirmación de las colonias desarrolladas en agar CN ... 8
Tabla 2. Ensayo interlaboratorios de Pseudomonas en agar: tasa media de recuperación (%) con respecto al número presente en agar nutritivo tras dilución en agua destilada y filtración ... 10
ANEXOS ANEXO A (Informativo) INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA SOBRE PSEUDOMONAS AERUGINOSA ... 12
ANEXO B (Informativo) MEDIOS ALTERNATIVOS ... 13
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1 de 15 CALIDAD DEL AGUA.
DETECCIÓN Y RECUENTO DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA POR EL MÉTODO DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA
INTRODUCCIÓN
Pseudomonas aeruginosa es un organismo oportunista patógeno para el hombre que es capaz de crecer en el agua con concentraciones de nutrientes muy bajas. Es conveniente que las aguas minerales naturales y las aguas de manantial estén exentas de Pseudomonas aeruginosa, tanto en origen como en el momento de su comercialización, al examinar 250 ml de muestra. El resto de aguas embotelladas comercializadas tiene que estar exentas de
Pseudomonas aeruginosa en 250 ml de muestra. Algunas veces, por razones de salud pública, puede investigarse la presencia de Pseudomonas en otros tipos de aguas, entre las que se incluyen las aguas de piscina y las aguas destinadas al consumo humano. En estos casos suele examinarse generalmente un volumen de 100 ml.
ADVERTENCIA Los usuarios de esta norma deberían estar familiarizados con las prácticas habituales de laboratorio. En esta norma no se pretende abordar todos los potenciales problemas relativos a la seguridad que pudieran presentarse en su utilización. Es responsabilidad del usuario establecer las prácticas de seguridad y salud laborales y asegurarse de que se cumplen todas las condiciones impuestas por la reglamentación nacional.
IMPORTANTE Es absolutamente indispensable que los ensayos realizados según esta norma sean llevados a cabo por personal correctamente entrenado.
1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN
Esta norma especifica un método que permite el aislamiento y el recuento de Pseudomonas aeruginosa en muestras de agua embotellada, mediante una técnica por filtración por membrana. Este método se puede aplicar a otros tipos de agua con una flora subyacente más baja, por ejemplo, aguas de piscina y aguas destinadas al consumo humano.
2. REFERENCIAS NORMATIVAS
Los siguientes documentos normativos referenciados son indispensables para la aplicación de este documento normativo. Para referencias fechadas, se aplica únicamente la edición citada. Para referencias no fechadas, se aplica la última edición del documento normativo referenciado (incluida cualquier corrección).
NTC 4491-1, Microbiología de los alimentos y alimentos para animales. Preparación de las muestras de ensayo, suspensión inicial y diluciones decimales para examen microbiológico. Parte 1: Reglas generales para la preparación de la suspensión inicial y las diluciones decimales (ISO 6887-1).
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NTC 5395, Agua para uso en análisis de laboratorio. Especificación y métodos de análisis. NTC-ISO 5667-1, Calidad del agua. Muestreo. Parte 1: Directrices para el diseño de programas de muestreo.
NTC-ISO 5667-2, Calidad del agua. Muestreo. Parte 2: Técnicas generales de muestreo.
NTC-ISO 5667-3, Calidad del agua. Muestreo. Parte 3: Directrices para la preservación y manejo de las muestras.
ISO 7704, Water Quality. Evaluation of Membrane Filters Used for Microbiological Analyses. ISO 8199, Calidad del agua. Guía general para el recuento de microorganismos sobre medios de cultivo.
ISO 19458, Water Quality. Sampling for Microbiological Analysis.
3. DEFINICIONES
Para los propósitos de esta norma se aplica la siguiente definición:
3.1 Pseudomonas aeruginosa. Microorganismos que se desarrollan en medios selectivos que contienen cetrimida y que producen piocianina o microorganismos que se desarrollan en medios selectivos que contienen cetrimida, son oxidasa positivos, producen fluorescencia bajo la luz UV (360 ± 20) nm, y son capaces de producir amoníaco a partir de la acetamida.
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BIBLIOGRAFÍA
[1] Directiva 80/777/CEE del Consejo, de 15 de julio de 1980, relativa a la aproximación de las legislaciones de los Estados miembros sobre explotación y comercialización de aguas minerales naturales. Diario Oficial de las Comunidades Europeas 1980 n° L229/ 1-10.
[2] Directiva 96/70/CE del Parlamento Europeo y del Consejo de 28 de octubre de 1996 por la que se modifica la Directiva 80/777/CEE del Consejo relativa a la aproximación de las legislaciones de los Estados miembros sobre explotación y comercialización de aguas minerales naturales. Diario Oficial de las Comunidades Europeas 1996 n° L299/ 26-28. [3] Directiva 98/83/CE del Consejo de 3 de noviembre de 1998 relativa a la calidad de las
aguas destinadas al consumo humano. Diario Oficial de las Comunidades Europeas 1998 n° L330/ 32-53.
[4] Standard Methods for the Examination of Water and Wasterwater, Method 9213.E. Membrane filter Technique for Pseudomonas aeruginosa.18 th ed, APHA, AWWA, WPCF, 2005.
[5] Drake, C. H. 1966. Evaluation of Culture Media for the Isolation and Enumeration of Pseudomonas aeruginosa. Health Lab. Sci. 3: 10.
[6] Brown, M. R. W. &J. H. Scott Foster. 1970. A Simple Diagnostic Milk Medium for Pseudomonas aeruginosa. J. Clin. Pathol. 23:172.
[7] Levin, M. A. & V. J. Cabelli. 1972. Membrane Filter Technique for Enumeration of Pseudomonas aeruginosa. Appl. Microbiol. 24:864.
[8] Dutka, B. J. & K. K. Kwan. 1977. Confirmation of the Single-step membrane filter procedure for estimating Pseudomonas aeruginosa Densities in Water. Appl. Environ, Microbiol. 33:240.
[9] Brodsky, M. H. & B W. Ciebin. 1978. Improved Medium for Recovery and Enumeration of Pseudomonas aeruginosa from Water using Membrane Filters. Appl. Environ. Microbiol. 36:26.
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