Quito Ecuador EXTRACTO

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Quito – Ecuador

ESPECIFICACIÓN

TÉCNICA

ECUATORIANA

ETE INEN-ISO/TS 21569-2

Primera edición

2014-12

MÉTODOS

HORIZONTALES

PARA

EL

ANÁLISIS

DE

BIOMARCADORES MOLECULARES

– MÉTODOS DE ANÁLISIS

PARA LA DETECCIÓN DE ORGANISMOS GENÉTICAMENTE

MODIFICADOS Y PRODUCTOS DERIVADOS

– PARTE 2: MÉTODO

DE PCR EN TIEMPO REAL CON UN CONSTRUCTO ESPECÍFICO

PARA LA DETECCIÓN DE EVENTOS FP967 EN LINAZA Y

PRODUCTOS DE LINAZA (ISO/TS 21569-2:2012, IDT)

HORIZONTAL METHODS FOR MOLECULAR BIOMARKER ANALYSIS — METHODS OF ANALYSIS FOR THE DETECTION OF GENETICALLY MODIFIED ORGANISMS AND DERIVED PRODUCTS — PART 2: CONSTRUCT-SPECIFIC REAL - TIME PCR METHOD FOR DETECTION OF EVENT FP967 IN LINSEED AND LINSEED PRODUCTS (ISO/TS 21569-2, IDT)

_________________________________________

Correspondencia:

Esta Especificación Técnica Ecuatoriana es una traducción idéntica de la Especificación Técnica Internacional ISO/TS 21569-2:2012.

DESCRIPTORES: Método de análisis, organismos genéticamente modificados, PCR, linaza ICS: 67.050

9 Páginas

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2014-4064 i

Prólogo nacional

Esta Especificación Técnica Ecuatoriana INEN-ISO/TS 21569-2 es una traducción idéntica de la Especificación Técnica Internacional ISO/TS 21569-2:2012, “Horizontal methods for molecular biomarker analysis — Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products — Part 2: Construct-specific real-time PCR method for detection of event FP967 in linseed and linseed products”. El comité nacional responsable de esta Especificación Técnica

Ecuatoriana y de su adopción es el Comité Interno del INEN.

Para el propósito de esta Especificación Técnica Ecuatoriana se enlistan los documentos normativos internacionales que se referencia en la Especificación Técnica Internacional ISO 21569-2:2012 y el documento normativo nacional correspondiente:

Documento Normativo Internacional Documento Normativo Nacional

ISO 21569, Productos alimenticios. Métodos de análisis para la detección de organismos modificados genéticamente y productos derivados. Métodos cualitativos basados en ácidos nucleicos.

ISO 21571, Productos alimenticios. Método de análisis para la detección de organismos modificados genéticamente y productos derivados. Extracción de ácidos nucleicos.

ISO 24276, Productos alimenticios. Métodos de análisis para la detección de organismos genéticamente modificados y productos derivados. Requisitos generales y definiciones.

NTE INEN-ISO 21569:2013, Productos alimenticios. Métodos de análisis para la detección de organismos modificados genéticamente y productos derivados. Métodos cualitativos basados en ácidos nucleicos. (ISO 21569:2005, IDT).

NTE INEN-ISO 21571:2013, Productos

alimenticios. Método de análisis para la detección de organismos modificados genéticamente y productos derivados. Extracción de ácidos nucleicos. (ISO 21571:2005, IDT).

NTE INEN-ISO 24276:2013, Productos

alimenticios. Métodos de análisis para la detección de organismos genéticamente modificados y productos derivados. Requisitos generales y definiciones. (ISO 24276:2006, IDT).

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Índice

Página

Prólogo...iii

1 Objeto y campo de aplicación...1

2 Referencias normativas...1 3 Términos y definiciones...1 4 Principio...1 5 Reactivos y materiales...2 5.1 Reactivos de PCR...2 6 Equipos...3 6.1 Generalidades...3 6.2 Dispositivo de PCR...3 7 Muestreo...3 8 Procedimiento...3

8.1 Preparación de la muestra de ensayo...3

8.2 Preparación de los extractos de ADN...3

8.3 Extracción de ADN...3

8.4 Preparación de PCR...3

8.5 Programa temperatura - tiempo...4

9 Criterios de aceptación/rechazo...4

9.1 Generalidades...4

9.2 Identificación...5

10 Estado de validación y criterios de desempeño...5

10.1 Robustez del método...5

10.2 Ensayo intralaboratorio...5 10.3 Ensayo colaborativo...5 10.4 Sensibilidad...7 10.5 Especificidad...7 11 Informe de ensayo…...8 Bibliografía…...9

EXTRACTO

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2014-4064 iii

Prólogo

ISO (Organización Internacional de Normalización) es una federación mundial de organismos

nacionales de normalización (organismos miembros de ISO). El trabajo de preparación de las Normas Internacionales normalmente se realiza a través de los comités técnicos de ISO. Cada organismo miembro interesado en una materia para la cual se haya establecido un comité técnico tiene el derecho de estar representado en dicho comité. Las organizaciones internacionales, gubernamentales y no gubernamentales, en coordinación con ISO, también participan en el trabajo. ISO colabora estrechamente con la Comisión Electrotécnica Internacional (IEC) en todas las materias de normalización electrotécnica.

Las Normas Internacionales se redactan de acuerdo con las reglas establecidas en la Parte 2 de las Directivas ISO/IEC.

La tarea principal de los comités técnicos es preparar Normas Internacionales. Los Proyectos de Normas Internacionales adoptados por los comités técnicos son enviados a los organismos miembros para su votación. La publicación como Norma Internacional requiere la aprobación de menos el 75 % de los organismos miembros con derecho a voto.

En otras circunstancias, particularmente cuando existe una demanda urgente del mercado, un comité técnico puede decidir publicar otros tipos de documentos normativos:

- una Especificación Disponible al Público ISO (ISO/PAS) (Publicly Available Specification) representa el acuerdo entre los expertos técnicos de un grupo de trabajo de ISO y su publicación se acepta si se aprueba por más del 50% de los miembros del comité técnico que emiten voto; - una Especificación Técnica ISO (ISO/TS) (Technical Specification) representa el acuerdo entre los

miembros del comité técnico y su publicación se acepta si se aprueba por 2/3 de los miembros del comité técnico que emiten voto.

Una ISO/PAS o una ISO/TS se revisa a los tres años a fin de decidir si será confirmada por otros tres años, revisada para convertirse en una norma internacional, o anulada. Si la ISO/PAS o la ISO/TS se confirma, será objeto de una nueva revisión tras tres años, momento en el que se debe decidir si se transformará en una norma internacional o se anulará.

Se señala la posibilidad de que algunos de los elementos de este documento puedan estar sujetos a derechos de patente. ISO no asume la responsabilidad por la identificación de cualquiera o todos los derechos de patente.

ISO/TS 21569-2 fue preparada por el Comité Técnico ISO/TC 34, Productos alimenticios, Subcomité SC 16, Métodos horizontales para el análisis de biomarcadores moleculares.

ISO 21569 consta de las siguientes partes, bajo el título general Métodos horizontales para el análisis

de biomarcadores moleculares – Métodos de análisis para la detección de organismos genéticamente modificados y productos derivados:

– Parte 2: Método de PCR en tiempo real con un constructo específico para la detección de eventos FP 967 en linaza y productos de linaza

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Métodos horizontales para el análisis de biomarcadores moleculares

–

Métodos de análisis para la detección de organismos genéticamente

modificados y productos derivados

– Parte 2: Método de PCR en tiempo real

con un constructo específico para la detección de eventos FP 967 en linaza y

productos de linaza.

1 Objeto y campo de aplicación

Este método describe un procedimiento para la detección de una secuencia de ADN presente en una línea de linaza (Linum usitatissimum) genéticamente modificada (evento FP967, también llamado "CDC Triffid"). Para este propósito, el ADN extraído es usado en un PCR en tiempo real y la modificación genética (MG) es detectada específicamente por la amplificación de una secuencia de ADN 105 pb que representa la transición entre el terminador del gen de la sintasa de nopalina (Tnos) de Agrobacterium tumefaciens y el gen dihidrofolato reductasa (dfrA1) de un integrón de clase 1 de

Escherichia coli.

El método descrito es aplicable para el análisis de ADN extraído de productos alimenticios. También puede ser adecuado para el análisis de ADN extraído de otros productos tales como piensos y semillas. La aplicación de este método requiere la extracción de una cantidad adecuada de ADN amplificable de la matriz de referencia a efectos de análisis.

2 Referencias normativas

ISO 21569, Productos alimenticios - Métodos de análisis para la detección de organismos

genéticamente modificados y productos derivados – Métodos cualitativos basados en ácidos nucleicos

ISO 21571:2005, Productos alimenticios - Métodos de análisis para la detección de organismos

genéticamente modificados y productos derivados – Extracción de ácido nucleico.

ISO 24276, Productos alimenticios - Métodos de análisis para la detección de organismos

genéticamente modificados y productos derivados – Requisitos generales y definiciones

3 Términos y definiciones

Para los fines de este documento, se aplican los términos y definiciones dados en ISO 24276.

4 Principio

Se extrae el ADN de la muestra de ensayo aplicando un método adecuado. El análisis de ADN se compone de dos partes:

a) La verificación de la cantidad, calidad y amplificabilidad del ADN extraído, por ejemplo, por medio de un taxón diana específico para PCR en tiempo real con ‘primers’ (cebadores) que amplifiquen un fragmento de 68 pb de largo del gen de desaturasa 2 de la proteína portadora de estearoil-acilo (SAD) de linaza específica (Linum usitatissimum) (Referencia [1]).

b) Detección del constructo Tnos - dfr en una PCR en tiempo real (Referencia [1]).

EXTRACTO

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INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA

Documento: ETE INEN-ISO/TS 21569-2

TÍTULO: MÉTODOS HORIZONTALES PARA EL ANÁLISIS DE BIOMARCADORES MOLECULARES – MÉTODOS DE ANÁLISIS PARA LA DETECCIÓN DE ORGANISMOS GENÉTICAMENTE MODIFICADOS Y PRODUCTOS DERIVADOS – PARTE 2: MÉTODO DE PCR EN TIEMPO REAL CON UN CONSTRUCTO ESPECÍFICO PARA LA DETECCIÓN DE EVENTOS FP967 EN LINAZA Y PRODUCTOS DE LINAZA (ISO/TS 21569-2:2012, IDT)

Código ICS: 67.050

ORIGINAL:

Fecha de iniciación del estudio:

2014-02-17

REVISIÓN:

La Subsecretaría de la Calidad del Ministerio de Industrias y Productividad aprobó este proyecto de norma

Oficialización con el Carácter de por Resolución No.

publicado en el Registro Oficial No.

Fecha de iniciación del estudio: Fechas de consulta pública: 2014-03-25 al 2014-04-07

Comité Interno del INEN

Fecha de iniciación: 2014-05-15 Fecha de aprobación: 2014-05-15 Integrantes del Comité Interno:

NOMBRES:

Ing. Gisela Medina (Presidenta) Quim Erika Chicaiza

INSTITUCIÓN REPRESENTADA:

DELEGADA DE LA DIRECCIÓN EJECUTIVA DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN

Ing. Luigi Furlan DIRECCIÓN DE VALIDACIÓN Y

CERTIFICACIÓN

Ing. Sebastián Vicente DIRECCIÓN DE METROLOGÍA

Arq. Francisco Ramírez DIRECCIÓN DE REGLAMENTACIÓN

Ing. Maritza Farinango (Secretaria Técnica) DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN

Otros trámites:

La Subsecretaría de la Calidad del Ministerio de Industrias y Productividad aprobó este proyecto de especificación

Oficializada como: Voluntaria Por Resolución No. 14481 de 2014-11-25 Registro Oficial No. 399 de 2014-12-18