Efecto de la coinoculación de Rhizobium etli y Azotobacter chroococcum sobre el crecimiento de Lycopersicum esculentum “tomate” en condiciones de laboratorio

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. RM. Efecto de la coinoculación de Rhizobium etli y Azotobacter. IN FO. chroococcum sobre el crecimiento de Lycopersicum esculentum. Tesis. EM. AS. DE. “tomate” en condiciones de laboratorio. SI ST. PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL DE. DI. RE. CC. IO. N. DE. BIÓLOGO – MICROBIÓLOGO. AUTORA: Br. SUSAN RAQUEL RUIZ ALBA. ASESORA: Dra. BERTHA SORIANO BERNILLA TRUJILLO – PERU 2014. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. AC IÓ. N. TRUJILLO. UN IC. Dr. Orlando Velásquez Benítez. IC. A. Y. CO. M. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. ÁT. Dra. Vilma Julia Méndez Gil. AS. DE. IN FO. RM. VICERRECTOR ACADÉMICO. EM. Dr. Santiago Uceda Duclos. TRUJILLO. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. Dr. José Mostacero León DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Dr. William Zelada Estraver. M. UN IC. AC IÓ. N. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. CO. Dra. Bertha Soriano Bernilla. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. DE. Dr. Juan José Guevara Gonzáles. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. JEFE DEL DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MIEMBROS DEL JURADO. Los suscritos, Miembros del Jurado, declaran que la presente Tesis ha sido ejecutada en concordancia con los requisitos formales y fundamentales de la Escuela. AC IÓ. N. Académico Profesional de Microbiología y Parasitología de la Universidad Nacional. Y. CO. M. UN IC. de Trujillo.. DE. IN FO. RM. ÁT. PRESIDENTE. IC. A. MsC. Juan Héctor Wilson Krugg. AS. Dra. Bertha Soriano Bernilla. MsC. Eduardo Ganoza Muñoz VOCAL. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. SECRETARIA. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. Los profesores que suscriben, Miembros del Jurado Dictaminador, declaran que la presente Tesis titulada: Efecto de la coinoculación de Rhizobium etli y Azotobacter. AC IÓ. N. chroococcum sobre el crecimiento de Lycopersicum esculentum “tomate” en condiciones de laboratorio, ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales,. IC. A. Y. CO. M. UN IC. siendo APROBADA por UNANIMIDAD.. RM. ÁT. MsC. Juan Héctor Wilson Krugg. EM. AS. DE. IN FO. PRESIDENTE. SECRETARIA. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. Dra. Bertha Soriano Bernilla. MsC. Eduardo Ganoza Muñoz VOCAL. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ASESORA. La que suscribe, Dra. Bertha Soriano Bernilla, asesora de la presente Tesis. N. titulada: Efecto de la coinoculación de Rhizobium etli y Azotobacter chroococcum. AC IÓ. sobre el crecimiento de Lycopersicum esculentum “tomate” en condiciones de. UN IC. laboratorio.. CO. M. CERTIFICA:. Y. Que la presente investigación ha sido desarrollada de acuerdo al reglamento. A. establecido por la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de. IC. Trujillo, estando en conformidad con su correspondiente proyecto y que el informe. RM. ÁT. ha sido redactado acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.. IN FO. Por lo tanto, autorizo a la Bachiller SUSAN RAQUEL RUIZ ALBA, continuar. DE. SI ST. EM. AS. DE. con el trámite del reglamento correspondiente.. Docente Principal del Departamento Académico de Microbiología y Parasitología Código 4007.. DI. RE. CC. IO. N. Dra. Bertha Soriano Bernilla. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. Dedico este trabajo principalmente a Dios, por haberme dado la vida. N. y permitirme el haber llegado hasta este momento tan importante de mi. AC IÓ. formación profesional. Y por darme la voluntad y fuerza para no. UN IC. dejarme vencer ante las adversidades y haberme brindado una familia. CO. M. unida, fuerte y feliz.. Y. De igual forma, dedico esta tesis a mis padres, DANIEL y RAQUEL,. IC. A. que han sabido formarme con buenos sentimientos, hábitos y valores, lo. ÁT. cual me ha ayudado a salir adelante en los momentos más difíciles. Por. RM. ser mis pilares más importantes y por demostrarme siempre su cariño,. IN FO. amor, confianza, sacrificio diario y apoyo incondicional. Y a pesar de. AS. DE. nuestra distancia física, siempre están conmigo.. EM. A mis hermanos, Henry y Piere, por su cariño, apoyo, bromas y por. DE. SI ST. qué siempre me estimulan a seguir luchando en mis propósitos.. IO. N. A mi hermana Judith y Don Pedro, por haberme abierto las puertas. DI. RE. CC. de su hogar, y haberme brindarme su apoyo.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. AGRADECIMIENTOS. AC IÓ. Agradezco de manera sincera y especial a mi asesora, Dra. Bertha. UN IC. Soriano Bernilla, por brindarme su apoyo, dedicación, guía y. ÁT. IC. A. Y. CO. M. orientación durante el desarrollo de la presente investigación.. RM. A los profesores de la Escuela de Microbiología y Parasitología por. IN FO. su amistad, dedicación, y por brindarme sus conocimientos académicos. SI ST. EM. AS. DE. durante mi formación como futuro profesional.. DE. Y gracias a todos los que me brindaron su ayuda desinteresando en la. DI. RE. CC. IO. N. ejecución de este proyecto.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. AC IÓ. N. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR: En cumplimiento de las disposiciones vigentes establecidas por el Reglamento de. UN IC. Grados y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, presento a su consideración y elevado criterio la presente Tesis titulada: Efecto de la coinoculación de Rhizobium. M. etli y Azotobacter chroococcum sobre el crecimiento de Lycopersicum esculentum. CO. “tomate” en condiciones de laboratorio, con el cual pretendo obtener el Título. Y. Profesional de Biólogo - Microbiólogo.. IC. A. Esperando que los miembros del jurado se sirvan calificar este trabajo según su. DE. IN FO. RM. ÁT. criterio establecido, y a que el presente sea merecedor de vuestra aprobación.. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. Trujillo, Diciembre del 2014. DI. RE. CC. Br. Susan Raquel Ruiz Alba. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÍNDICE Pág. ii. MIEMBROS DEL JURADO. iv. AC IÓ. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. UN IC. APROBACIÓN ASESORA. CO. M. DEDICATORIA. Y. AGRADECIMIENTOS. IC. A. PRESENTACIÓN. RM. ÁT. ÍNDICE. IN FO. RESUMEN INTRODUCCIÓN. AS. 2. Procedimiento. vii viii ix x xii 1. 11 12. EM. 1. Material de estudio. vi. 11. DE. MATERIAL Y MÉTODOS. v. 12. 2.2 Propagación de cultivos microbianos. 12. 2.3 Estandarización del inóculo. 13. 2.4 Determinación del porcentaje de germinación de L. esculentum. 13. N. DE. SI ST. 2.1 Reactivación de cultivos microbianos. 13. 2.6 Recolección y preparación de suelo de cultivo. 14. 2.7 Inoculación en L. esculentum. 14. RE. CC. IO. 2.5 Tratamiento de semillas. DI. 2.8 Siembra de semillas germinadas de L. esculentum en suelo de cultivo Estéril. 15. 2.9 Evaluación del efecto de la coinoculación de R. etli Rf 167-01 y A. chroococcum, sobre el. crecimiento de L. esculentum. 2.10 Recolección de datos. 15 16. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.11 Análisis estadístico. 16. RESULTADOS. 17 19. Figura 2:. 20. AC IÓ. N. Figura 1:. Figura 3:. UN IC. Figura 4:. 22 23. CO. M. Figura 5:. 21. Y. DISCUSIÓN. 29. IC. A. CONCLUSIÓN. 24. ÁT. RECOMENDACIONES. IN FO. RM. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 31 37. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. ANEXOS. 30. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN Se determinó el efecto de la coinoculación de Rhizobium etli Rf 167-01 y Azotobacter chroococcum sobre el crecimiento de Lycopersicum esculentum. N. “tomate”, mediante la estimación de cinco variables agronómicas: longitud de tallo y. AC IÓ. raíz, peso seco de la parte aérea y radicular, y peso seco total de la planta, en. UN IC. condiciones de laboratorio. Para la preparación del inoculante, se reactivó y propagó. M. los cultivos de R. etli Rf 167-01 y A. chroococcum, en el medio Extracto de. CO. Levadura Manitol Rojo de Congo (ELMARC) y medio ASHBY, respectivamente, y. Y. se verificó la pureza de R. etli Rf 167-01 sembrando la bacteria en Agar Extracto de. IC. A. Levadura (LLA) y Agar Peptona Glucosa Purpura Bromocresol (PG-PBC); además. RM. ÁT. se realizó la observación microscópica de ambas bacterias con tinción de Gram para. IN FO. verificar su pureza, posteriormente, se preparó el inóculo bacteriano realizando una suspensión teniendo como patrón el tubo N°3 del Nefelómetro de Mac Farland. DE. (9x108cel/mL); luego se realizó diluciones y de las dos últimas se sembró,. AS. determinando las UFC/mL inicial de ambas bacterias. Se trabajó con 108 semillas,. EM. las cuales fueron desinfectadas y colocadas sobre una base de papel toalla. SI ST. humedecido para su germinación. Se efectuaron cuatro tratamientos de semillas. DE. germinadas de L. esculentum: un control, 9 semillas tratadas con agua destilada. N. estéril, 9 semillas inoculadas con R. etli Rf 167-01, 9 semillas inoculadas con A.. CC. IO. chroococcum y 9 semillas coinoculadas con R. etli Rf 167-01 y A. chroococcum. Se tres repeticiones para cada tratamiento. Posteriormente cada semilla. RE. realizó. DI. inoculada fue sembrada en suelo agrícola esterilizado y distribuido en bolsas de. polietileno en cantidad de 400 g por cada una. Estas bolsas fueron colocadas en un estante con luz artificial y periódicamente se regaba las plántulas con agua destilada estéril. A los 20, 30 y 40 días de inoculación se realizaron las mediciones. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. correspondientes. Los datos obtenidos fueron organizados en tablas y figuras, y procesados estadísticamente obteniéndose diferencia significativa en el tratamiento de la coinoculación de Rhizobium etli Rf 167-01 y Azotobacter chroococcum, por lo. AC IÓ. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. plántulas de L. esculentum “tomate”, en condiciones de laboratorio.. N. que podemos decir que estas bacterias asociadas promueven el crecimiento de. xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN. Las hortalizas como el tomate, calabaza, repollo, zanahoria, nabo, apio, coliflor. AC IÓ. N. y lechuga, constituyen un grupo de cultivos fundamentales dentro de la producción agrícola, representando un renglón importante desde los puntos de vista tanto. UN IC. económico como social para muchos países, al jugar un papel importante en la. M. alimentación humana por su riqueza en vitaminas, ácidos orgánicos fácilmente. CO. asimilables, sales minerales y aceites esenciales, lo que ha motivado el incremento. Y. continuo de su producción a escala mundial. (1) El tomate es la hortaliza más. IC. A. difundida en todo el mundo y la de mayor valor económico. Su demanda aumenta. RM. ÁT. continuamente y con ella su cultivo, producción y comercio. El tomate en fresco se. IN FO. consume principalmente en ensaladas, cocido o frito. En mucha menor escala se utiliza como encurtido. Según la organización de las Naciones Unidas para la. DE. Alimentación y la Agricultura, la producción agrícola anual a nivel mundial de. AS. tomate fresco son más de 115 millones de toneladas, por lo que se le considera uno. EM. de los cultivos más importantes del mundo. La importancia del tomate surge a partir. SI ST. de su alto contenido en licopeno y de sus beneficios para la salud, de su sabor y de. DE. sus cualidades como producto alimenticio. El tomate se disfruta en todo el mundo y. CC. IO. N. es un ingrediente que nunca falta en la cocina de todas las culturas. (2). RE. Lycopersicum esculentum “tomate” pertenece a la familia Solanaceae, la semilla. DI. tiene forma lenticular, con unas dimensiones de 5x4x2 mm y está constituida por el embrión, endospermo y la testa o cubierta seminal. El embrión está constituido por la yema apical, dos cotiledones, hipocotíleo y radícula. El endospermo contiene los elementos nutritivos necesarios para el desarrollo inicial del embrión. La testa o. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. cubierta seminal está constituida por un tejido duro e impermeable, recubierto de pelos que envuelve al embrión del endospermo.. (3). En la germinación de la semilla. de tomate se distingue tres etapas. La primera que dura 12 horas, se produce una. N. rápida absorción de H2O por la semilla, le sigue un periodo de reposo de unas 40. AC IÓ. horas durante el cual no se observa ningún cambio en la anatomía, ni en la actividad. UN IC. metabólica de la misma y posteriormente la semilla comienza a absorber H 2O de nuevo, iniciándose la etapa de crecimiento asociado con la emergencia de la. Y. CO. M. radícula. (3,4). IC. A. La duración del ciclo de cultivo del tomate está determinada por la variedad y. ÁT. por las condiciones climáticas de la zona en la cual se establece el cultivo. La fase. RM. inicial se inicia desde la siembra en semillero, seguida de la germinación, dura entre. IN FO. 10 a 15 días. La fase vegetativa, comienza con la formación de las hojas verdaderas,. DE. requiere de mayores cantidades de nutrientes para satisfacer las necesidades de las. AS. plantas en crecimiento y expansión., la floración dura entre 28 a 35 días. La fase. EM. vegetativa dura aproximadamente entre 100 a 140 días. Posteriormente se produce la. SI ST. fase reproductiva, se inicia a partir de la fructificación, dura entre 40 a 60 días, se. DE. caracteriza porque el crecimiento de la planta se detiene y los frutos extraen los nutrientes necesarios para su crecimiento y maduración. El ciclo total del cultivo es. RE. CC. IO. N. de aproximadamente siete meses. (4,5). DI. L. esculentum, es una planta de estación cálida razonablemente tolerante al. calor, a la sequía y sensible a las heladas. El tomate puede producirse en una amplia gama de condiciones de suelos, los mejores resultados se obtienen en suelos profundos (1 m o más), de texturas medias, permeables y sin impedimentos físicos. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. en el perfil. Suelos con temperaturas entre los 15 a 25°C favorecen un óptimo establecimiento del cultivo después del trasplante. (5). N. Tradicionalmente, la obtención de posturas de las plantas hortícolas como el. AC IÓ. tomate se ha realizado en semilleros sobre suelo y con el empleo de fertilizantes. UN IC. minerales, fertilizantes químicos, los que, si bien es cierto, garantizan buena calidad de las posturas, pero al ser usados indiscriminadamente llegan a generar serios. CO. M. desequilibrios en los agroecosistemas por contaminación del suelo, el agua, el aire y. Y. los alimentos, pudiendo provocar su uso excesivo la degradación de los suelos y la. IC. A. resistencia a plagas, la destrucción de los controles naturales y hasta poner en. ÁT. peligro la salud humana. En los últimos años debido al impacto negativo de la. RM. agricultura en el ambiente y a los altos costos de producción se ha venido. IN FO. planteando el concepto de agricultura sostenible, definida como la manera de. DE. cultivar el suelo conservando al máximo la calidad medioambiental, permitiendo. AS. ingresos adecuados a los agricultores y generando suficientes alimentos a los. EM. consumidores, con el único fin de preservar y regenerar los recursos naturales y. DE. SI ST. producir alimentos sanos y seguros. (6,7). N. Por tal motivo es de gran interés restaurar la microflora del suelo mediante. IO. estrategias que permitan mejorarlo en relación a la productividad agrícola y de una (8). Ésta, es una problemática preocupante tanto a nivel. RE. CC. manera no contaminante.. DI. nacional como mundial. Una alternativa clave para evitar el uso excesivo de fertilizantes químicos es la biofertilización con microorganismos del suelo. Hoy en día los biofertilizantes son considerados como un componente del manejo integrado de la nutrición vegetal y han sido definidos como sustancias que contienen microorganismos vivos que al aplicarse a las semillas, superficies de las plantas o al 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. suelo, colonizan la rizósfera o el interior de la planta y promueven su crecimiento aumentando la disponibilidad de los nutrientes y la sanidad vegetal en la planta hospedera.. (5,9). Los biofertilizantes como una manera de disminuir la aplicación de. UN IC. AC IÓ. y, sobre todo, económica para recuperar la productividad de los suelos. (10). N. fertilizantes de síntesis química, se plantean como una alternativa segura, efectiva. El uso de biofertilizantes y bioestimulantes ha mejorado la comprensión de la. CO. M. relación planta microorganismo en su contribución a minimizar los riesgos de. Estas consideraciones han tomado importancia en las últimas tres. A. (7). IC. producción.. Y. degradación de suelos y a maximizar el regreso de energía a los sistemas de. ÁT. décadas para establecer las fronteras a la agricultura, no solo desde el punto de vista. RM. de lograr una máxima producción sostenida, sino buscando la estabilización de los. IN FO. sistemas de producción a largo plazo. El incremento en la productividad a base de. DE. grandes cantidades de energía (como es el caso de la aplicación de fertilizantes. AS. químicos sintéticos) no puede ser mantenido indefinidamente, existe un límite en la. EM. capacidad de producción que va a estar regulada por los costos externos de la. DE. SI ST. energía que se introduce en los sistemas de producción. (7,11 y 12). N. La fertilidad de un suelo está basada en su capacidad para suministrar los. IO. nutrientes necesarios para el desarrollo de las plantas; en ello juega un papel. RE. CC. importante la comunidad microbiana que participa activamente en la captación de. DI. nutrientes y en la mineralización de la materia orgánica. (13) Numerosos reportes han. descrito la asociación benéfica entre plantas y microorganismos. Estos microorganismos son conocidos como promotores del crecimiento vegetal y pueden ser empleados como biofertilizantes en cultivos.. (14). Dentro de este contexto en los. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. últimos años se han venido produciendo biofertilizantes a base de microorganismos simbióticos, principalmente las bacterias de la familia Rhizobiaceae. (14,15). N. Los primeros trabajos para la inoculación de semillas fueron realizados en Rusia. AC IÓ. en 1930. A finales de la década de los 70, Kloepper y colaboradores fueron los. UN IC. pioneros en introducir el término PGPR (Plant Growtth Promoting Rhizobacteria) para referirse a las rizobacterias capaces de provocar un efecto benéfico en las. CO. M. plantas. El grupo de bacterias conocido como PGPR, fue definido por Kloepper et. Y. al. , en 1989 como bacterias que colonizan la raíz y la estimulan significativamente. ÁT. RM. asociaciones simbióticas o de vida libre. (16). IC. A. el crecimiento de plantas. Estos microorganismos pueden encontrarse en. IN FO. Entre los mecanismos bioquímicos descritos en los microorganismos promotores. DE. del crecimiento de plantas se encuentra la fijación biológica de nitrógeno. AS. atmosférico (FBN), que es llevada a cabo por rizobacterias simbióticas como. EM. Rhizobium sp. u otras de vida libre como Azotobacter sp. y Azospirillum sp. que. SI ST. han sido empleadas extensivamente como biofertilizantes para mejorar la. DE. disponibilidad de nitrógeno en hortalizas como tomate (Lycopersicum esculentum ), (6,17). Otra de las propiedades de tales. N. cebolla (Allium cepa L.) y maíz (Zea mays L).. IO. microorganismos se relaciona con la capacidad de aumentar la disponibilidad de. RE. CC. nutrientes en el suelo, como el fósforo, mediante la producción de ácidos orgánicos. DI. capaces de solubilizar los fosfatos que forman complejos insolubles con las bases del suelo. Los ácidos orgánicos producidos por las bacterias promotoras del crecimiento incrementan también la disponibilidad de micronutrientes como el hierro (Fe) en la zona de la rizosfera. El hierro a su vez puede ser captado por sideróforos, moléculas orgánicas secretadas por estas bacterias, con las que forman 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. quelatos que pueden ser asimilados por las plantas. Las bacterias productoras de sideróforos y AIA frecuentemente poseen la enzima aminociclopropano carboxilato (ACC) deaminasa, la cual degrada al ACC, precursor del etileno. Etileno es una. N. hormona vegetal producida bajo estrés, que en altas concentraciones inhibe el. AC IÓ. crecimiento vegetal. Se ha reportado que la reducción en los niveles de etileno por. UN IC. acción de las rizobacterias promotoras del crecimiento, podría resultar en un mayor. CO. M. desarrollo de las plantas inoculadas. (18,19). Y. Las bacterias promotoras del crecimiento vegetal tienen un gran potencial en la. IC. A. agricultura moderna, porque en la actualidad el cultivo de la mayoría de las. ÁT. hortalizas como tomate y pimiento requiere de la producción de plántulas vigorosas,. RM. factor importante para la producción del fruto. (20) Este proceso natural de la fijación. IN FO. biológica de nitrógeno (FBN), es llevado a cabo por las α-proteobacterias del suelo. DE. pertenecientes a la familia de las rhizobacterias crean una simbiosis de tipo. AS. mutualista con plantas leguminosas. Durante la simbiosis las rhizobacterias aportan. EM. nitrógeno molecular de la atmósfera a la planta, el cual utilizan para la biosíntesis de. SI ST. proteínas mientras que ésta otorga nutrientes a la bacteria. En este proceso se. DE. desarrollan nódulos bacterianos en las raíces de las plantas infectadas. La capacidad. N. de varias cepas de Rhizobium para promover el desarrollo y crecimiento de. IO. diferentes plantas hospederas ha sido ampliamente estudiado en los últimos años. RE. CC. con el fin de verificar si la fijación de nitrógeno es factible en plantas no. DI. leguminosas. (21,22). A la familia Rhizobiaceae pertenecen los géneros Rhizobium, Bradyrhizobium, Sinorhizobium, Mesorhizobium, se caracterizan por ser bacilos Gram negativos que 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. miden entre 0.5-1.0 x 1.2-3.0 um y se desplazan por medio de 1-6 flagelos que pueden ser peritricales (varios flagelos que rodean el perímetro de la célula) o subpolares. Las células bacterianas del género Rhizobium se caracterizan por ser de. N. crecimiento rápido (1 a 3 días) con un tiempo de generación entre 2 y 4 horas. (23). Presenta colonias blancas o color. UN IC. abundante lipopolisacáridos extracelulares.. AC IÓ. después de cultivadas, productor de ácido en el medio de cultivo y producción de. crema, circulares, convexas, semitranslúcidas u opacas y mucilaginosas.. CO. M. Generalmente miden de 2 a 4 mm de diámetro a los 3-5 días de incubación en medio. Y. LMA (Levadura Manitol Agar) a una temperatura entre 25 y 30°C. Presentan. IC. A. crecimiento óptimo en pH entre 6,0 y 7,0; aunque se observa crecimiento de estas. ÁT. bacterias a pH entre 4,0 y 8,0. Son quimio-organotróficas y utilizan gran variedad de. RM. carbohidratos, ácidos orgánicos y algunas cepas requieren biotina, ácido nicotínico,. IN FO. pantotenato o tiamina como factores de crecimiento. Hay nueve especies definidas:. DE. R. leguminosarum, R. etli, R. galegae, R. gallicum, R. giardinii, R. huananiense, R.. AS. huatlense, R. mongolense y R. tropici. Este género nodula diferentes especies de. EM. leguminosas en zonas templadas o tropicales. (24) Son claramente polifiléticos, o sea,. SI ST. no existen ramificaciones del árbol de evolución que puedan contener solamente a. DE. los rizobios y no otras bacterias. La inoculación con cepas específicas de Rhizobium permite maximizar la fijación de nitrógeno e incrementar la producción de biomasa. RE. CC. IO. N. aprovechable. (25,26). DI. Rhizobium etli, es uno de estos pocos organismos capaces de descomponer el N2. a su forma reducida, el ion amonio NH4+, haciéndolo entonces asimilable para otros. seres vivos. Rhizobium etli y la planta del frijol establecen una simbiosis que favorece tanto a la planta como a la bacteria; mientras Rhizobium fija nitrógeno para. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. la planta, ésta le proporciona compuestos de carbono, los cuales son producto de la fotosíntesis. (26.27). N. Existen bacterias de vida libre que se asocian al sistema radical de diversas. AC IÓ. gramíneas (maíz, trigo, caña de azúcar, arroz, etc) y su actividad propicia la fijación. UN IC. de nitrógeno en estas plantas y la promoción de crecimiento. Entre los géneros bacterianos de vida libre se encuentran Azotobacter, Azospirillum, Beijerienckia,. CO. M. etc. El género Azotobacter, incluye bacterias Gram negativas, pleomorficas,. Y. variando su morfología desde bacilo hasta célula en forma de coco, se le observa. IC. A. como célula individual, como pares o formando agregados irregulares y algunas. ÁT. veces formando cadenas de tamaño variable, las colonias son viscosas, convexas,. RM. lisas o arrugadas y poseen pequeñas inclusiones irregulares, el color se presenta en. IN FO. diferentes matices de pardo, este tipo de bacterias tienen la capacidad de suministrar. AS. DE. a las plantas entre 15 – 50 % de sus necesidades de nitrógeno. (28,29). EM. Las bacterias del género Azotobacter muestran la doble función de fijar el. SI ST. nitrógeno atmosférico y producir sustancias estimuladoras del crecimiento vegetal.. DE. El Azotobacter, Azospirillum y Pseudomona son bacterias fijadoras de nitrógeno. N. atmosférico, aumentan la capacidad de solubilización del fósforo orgánico e. IO. inorgánico del suelo, colonizan las raíces de las plantas produciendo fitohormonas. RE. CC. como giberelinas (inducen a la germinación de las semillas y controlan el. DI. crecimiento vegetal), citocininas(fomentan y favorecen el crecimiento de las yemas laterales), auxinas (sustancias promotoras del crecimiento vegetal), esto trae como consecuencia un aumento en la captación de nutrientes. (21, 30, 31). 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. A. chroococcum, por ser un microorganismo diazótrofica (capaz de convertir el dinitrógeno atmosférico, N₂, a amonio, NH₄, mediante la acción de la enzima nitrogenasa), también sintetiza sustancias estimuladoras del crecimiento vegetal,. N. tales como, vitaminas y hormonas vegetales que intervienen directamente con el. UN IC. AC IÓ. desarrollo de la planta. (32). La capacidad de varias cepas de Rhizobium para promover el desarrollo y. CO. M. crecimiento de diferentes plantas hospederas ha sido ampliamente estudiado en los. La inoculación mixta de Bradyrhizobium o Rhizobium, en. A. (33). IC. no leguminosas.. Y. últimos años con el fin de verificar si la fijación de nitrógeno es factible en plantas. ÁT. combinación con cepas de Azotobacter y Azospirillum promotoras del crecimiento. RM. vegetal, repercute sobre la nodulación, actividad nitrogenasa y crecimiento vegetal. IN FO. de las leguminosas modificando además tanto la concentración como el contenido. para promover el crecimiento de plantas no leguminosas como. AS. chroococcum. DE. de nitrógeno de las plantas; sin embargo, el efecto de Rhizobium etli y Azotobacter. SI ST. EM. Lycopersiccum esculentum. “tomate” no es aún conocido. (34,35). DE. La importancia de esta investigación radica en la necesidad de tecnificar la. N. agricultura en nuestra región para hacerla más competitiva frente al mercado. CC. IO. agroexportador y esto se puede lograr mediante el uso de tecnologías limpias, como. RE. es el uso de biofertilizantes y bioestimulantes que mejoran la comprensión de la. DI. relación planta-microorganismo, y son considerados como un componente del manejo integrado de la nutrición vegetal y han sido definidos como sustancias que contienen microorganismos vivos que al aplicarse a las semillas, superficies de las plantas o al suelo, colonizan la rizósfera o el interior de la planta y promueven su. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. crecimiento aumentando la disponibilidad de los nutrientes y la sanidad vegetal en la planta hospedera. (36,37). N. Por todo lo mencionado anteriormente, el objetivo del presente trabajo fue. AC IÓ. determinar el efecto de la coinoculación de R. etli Rf 167-01 y A. chroococcum. UN IC. sobre el crecimiento de L. esculentum, evaluando las cinco variables agronómicas: longitud de tallo y raíz, peso seco de la parte aérea y radicular, y peso seco total de. CO. M. la planta, debido a que estos microorganismos son benéficos para las plantas, ya. Y. que en mediano o largo plazo pueden reemplazar a los fertilizantes químicos que. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. tanto daño le hacen a nuestro ecosistema.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIALES Y MÉTODOS. 1. Material de estudio . AC IÓ. N. 2 Kg de semillas de Lycopersicum esculentum, “semillas Manrique”. tomate Rio Grande, comercializado por Agro Inversiones DEL VALLE. . UN IC. S.A.C, Palermo, Trujillo, La Libertad.. CO. M. Rhizobium etli Rf 167-01 aislado en el Laboratorio de Microbiología Ambiental, Departamento de Microbiología y Parasitología de la. A. Y. Universidad Nacional de Trujillo, y autenticado molecularmente en el. ÁT. IC. Laboratorio de Ecología Microbiana y Biotecnología “Marino Tabusso”. RM. de la Universidad Nacional Agraria La Molina. . Ambiental,. Departamento. de. Microbiología. y. DE. Microbiología. IN FO. Azotobacter chroococcum proporcionado por el Laboratorio de. Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo.. AS. . EM. 50 Kg de suelo agrícola procedente del Centro Experimental Para. SI ST. Crianza de Animales Menores (CEPCAM) de la Universidad Nacional. DI. RE. CC. IO. N. DE. de Trujillo.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2. Procedimiento. Se reactivó los cultivos de R. etli. N. Reactivación de los cultivos microbianos. Rf 167-01 y A. chroococcum,. AC IÓ. 2.1. UN IC. sembrando por estría en placas conteniendo Agar Extracto de Levadura Manitol Rojo de Congo (ELMARC) (Anexo 1) y Agar ASHBY (Anexo. CO. M. 2), se incubaron a 28°C y 30°C, respectivamente, por dos a tres días.. Y. Posteriormente se comprobó la pureza sembrando la bacteria en Agar. IC. A. Extracto de Levadura Lactosa (LLA) (Anexo 3,4) y en Agar Peptona. ÁT. Glucosa Purpura de Bromocresol (PG-PBC) (Anexo 5) durante 48 horas. RM. a 28° C. (Anexo 6). IN FO. Luego de la incubación, se tomó una asada de la colonia y se hizo una. DE. extensión en lámina portaobjetos para realizar la observación. AS. microscópica con tinción de Gram (R. etli) (Anexo 7) y coloración Tinta. SI ST. EM. China (A. chroococcum) (Anexo 8) para verificar su pureza.. Propagación de los cultivos microbianos. DI. RE. CC. IO. N. DE. 2.2. A partir de los cultivos puros de R. etli Rf 167-01 y A. chroococcum se procedió a la propagación en frascos planos de vidrio conteniendo Agar ELMARC y Agar ASHBY, incubados a 28°C y 30°C, respectivamente, por dos a tres días.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.3. Estandarización del inóculo. A partir de los frascos de propagación de R. etli Rf 167-01 se realizó una. N. suspensión en solución agua destilada estéril en un volumen de 100 mL. AC IÓ. hasta obtener una concentración aproximada al tubo N° 3 del. UN IC. Nefelómetro de Mac Farland (9 x 108 UFC/mL) (Anexo 9), luego se realizó diluciones y de las dos últimas se sembró en agar ELMARC,. CO. M. determinando las UFC/mL inicial. (Anexo 10). A. chroococcum, con la. Y. El mismo procedimiento se realizó con. IN FO. RM. ÁT. IC. A. diferencia que el medio utilizado fue Agar ASHBY. (Anexo 10). 2.4. Determinación del porcentaje de germinación de L. esculentum. DE. Para evaluar el porcentaje de germinación se colocó cincuenta unidades. AS. de semillas de L. esculentum en papel toalla previamente humedecido, y. SI ST. EM. se hidrataron dos veces por día. Luego se halló mediante cálculos matemáticos el porcentaje de semillas germinadas después de 7 días.. CC. IO. N. DE. (Anexo 11). DI. RE. 2.5 Tratamiento de las semillas. Las semillas se lavaron con agua corriente y 10 veces con agua destilada estéril. Luego se desinfectaron por inmersión en alcohol al 70% durante un minuto y se lavó tres veces consecutivas con agua destilada estéril. 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Seguidamente se les agregó hipoclorito de sodio al 2.0% por un minuto y se lavó cinco veces consecutivas con agua destilada estéril. Dichas. Recolección y preparación de suelo de cultivo. UN IC. 2.6. AC IÓ. N. semillas fueron colocadas en placas Petri con algodón humedecido.. M. La muestra de suelo fue recolectada del Centro Experimental Para. CO. Crianza de Animales Menores (CEPCAM) de la Universidad Nacional de. A. Y. Trujillo, aproximadamente 50 Kg en bolsas de plástico de primer uso y. ÁT. IC. luego fue transportada al laboratorio de Microbiología Ambiental. Se. RM. realizó un análisis químico del suelo, en el laboratorio de la Facultad de. IN FO. Química, Universidad Nacional de Trujillo. (Anexo 12). DE. La muestra de suelo con textura: franco-arcilloso, fue tamizada y se. AS. distribuyó 400 g de suelo en bolsas plásticas de primer uso, luego fueron. Inoculación en L. esculentum. DI. RE. CC. IO. N. 2.7. DE. SI ST. EM. esterilizadas en autoclave por 45 minutos.. Se realizó la inoculación de los cuatro tratamientos, de la siguiente manera: . Tratamiento 1: Control 1, consistió de semillas germinadas de Lycopersicum esculentum tratadas con agua destilada estéril.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. . Tratamiento 2: Control 2, se inoculó las semillas germinadas de L. esculentum con 1mL de suspensión de R. etli Rf 167-01, a una concentración aproximada de 9 x 108 UFC/mL.. esculentum. N. Tratamiento 3: Control 3, se inoculó las semillas germinadas de L. con 1mL de suspensión de A. chroococcum, a una. AC IÓ. . . Tratamiento 4: Se inoculó. UN IC. concentración aproximada de 9 x 108 UFC/mL.. las semillas germinadas de L.. CO. M. esculentum con 0.5 mL de suspensión de R. etli Rf 167-01 y con. Y. 0.5 mL de suspensión de A. chroococcum, ambas a una. 2.8. IN FO. RM. ÁT. IC. A. concentración aproximada de 9 x 108 UFC/mL.. Siembra de semillas germinadas de L. esculentum en suelo de cultivo. AS. DE. estéril. EM. En el suelo agrícola contenido en las bolsas plásticas, se sembró una. SI ST. semilla germinada de L. esculentum, a una profundidad de 0.5 cm por. DE. recipiente y se regaron a capacidad de campo con agua destilada estéril.. N. (Anexo 13). DI. RE. CC. IO. 2.9. Evaluación del efecto de la coinoculación de R. etli Rf 167-01 y A.. chroococcum, sobre el. crecimiento de L. esculentum.. Se evaluó el efecto de la coinoculación de R. etli Rf 167-01 y A. chroococcum, en L. esculentum, en base a las cinco variables agronómicas como la longitud de tallo y de la raíz, peso seco de la parte aérea y radicular, peso seco total de la planta. 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Estas variables se evaluaron para cada tratamiento. Se realizó tres repeticiones para cada tratamiento, los cuales estuvieron en condiciones de luz artificial por fluorescentes de 36 W a una distancia de 50 cm y. N. fueron regadas con agua destilada estéril dos veces por día cada dos días.. UN IC. AC IÓ. La evaluación se realizó a los 20, 30 y 40 días.. CO. M. 2.10 Recolección de datos. A. Y. A los 20, 30 y 40 días de la inoculación bacteriana se cosechó las plantas. IC. “tomate” (Anexo 14, 15,16) y se procedió a la. ÁT. de L. esculentum. RM. recolección de datos de cada una de las cinco variables agronómicas. IN FO. descritas anteriormente. Las plantas fueron lavadas con agua corriente. DE. para eliminar los restos de suelo presente en la raíz, se midió la longitud. AS. de tallo y de la raíz. Posteriormente, el tallo fue separado de la raíz e. EM. independientemente colocado en sobrecitos de papel, luego se secó en. SI ST. horno a 70 °C por 48 h y se halló el peso seco en una balanza analítica. Los valores obtenidos se organizaron en tablas y figuras. (Anexo 17, 18,. IO. N. DE. 19, 20, 21). DI. RE. CC. 2.11 Análisis estadístico Los datos obtenidos fueron procesados mediante un análisis en base a la varianza unidireccional (ANOVA) y la diferencia entre tratamientos se hizo mediante la prueba de Múltiple Rango, método: diferencia mínima significativa (LSD). 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. De acuerdo a los resultados obtenidos, en la Figura 1 se presentó el promedio de. N. la longitud del tallo de plántulas de L. esculentum “tomate” después de 20, 30 y 40. AC IÓ. días de inoculación, en la cual se observa que hay un mayor aumento de crecimiento en el tratamiento con la coinoculación de R. etli Rf 167-01 y A.. UN IC. del tallo. chroococcum con respecto al tratamiento control, al tratamiento con solo R. etli. IC. A. Y. CO. M. Rf167-01 y al tratamiento con solo A. chroococcum.. ÁT. En la figura 2, el promedio de la longitud de la raíz de plántulas de L.. IN FO. RM. esculentum “tomate” después de 20, 30 y 40 días de inoculación, en la cual se observa que hay un mayor aumento de crecimiento de las raíces en el tratamiento con. DE. la coinoculación de R. etli Rf 167-01 y A. chroococcum con respecto al tratamiento. AS. control, al tratamiento con solo R. etli Rf167-01 y al tratamiento con solo A.. DE. SI ST. EM. chroococcum.. N. En la figura 3, el promedio del peso seco de la parte aérea de las plántulas de L.. CC. IO. esculentum “tomate” después de 20, 30 y 40 días de inoculación, se observa que hay. RE. un mayor peso seco de la parte aérea en el tratamiento con la coinoculación de R. etli. DI. Rf 167-01 y A. chroococcum con respecto al tratamiento control, al tratamiento con solo R. etli Rf167-01 y al tratamiento con solo A. chroococcum.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En la figura 4, el promedio del peso seco de la parte radicular de las plántulas de L. esculentum “tomate” después de 20, 30 y 40 días de inoculación, se observa que hay mayor peso seco de la parte radicular en el tratamiento con la coinoculación de. UN IC. AC IÓ. tratamiento con solo R. etli Rf167-01 y al tratamiento con solo A. chroococcum.. N. R. etli Rf 167-01 y A. chroococcum con respecto al tratamiento control, al. CO. M. En la figura 5, el promedio del peso seco total de las plántulas de L. esculentum. Y. “tomate” después de 20, 30 y 40 días de inoculación, se observa que hay mayor peso. IC. A. seco total en el tratamiento con la coinoculación de R. etli Rf 167-01 y A.. ÁT. chroococcum con respecto al tratamiento control, al tratamiento con solo R. etli. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. Rf167-01 y al tratamiento con solo A. chroococcum.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) d2. 9 8. d1. 7. c1. a2. b1. 6. a. b. Control (sin inóculo). c. R.etli Rf 167--01 (A). AC IÓ. 4. a1. N. d. 5. c2. b2. A. chroococcum (B). 3. UN IC. A+B. 2. M. 1 0 20. 30. CO. Promedio de lalongitud del tallo (cm) de las plántulas de L. esculentum. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 40. ÁT. IC. A. Y. Tiempo (Días). DE. IN FO. RM. * Letras distintas indican diferencias significativas (p˂0.05). AS. Figura 1. Promedio de la longitud del tallo (cm) de las plántulas de L. esculentum. EM. “tomate” después de 20, 30 y 40 días de inoculación con agua destilada estéril. SI ST. (control), R. etli Rf 167-01, A. chroococcum y la coinoculación de ambas. DI. RE. CC. IO. N. DE. bacterias, en condiciones de laboratorio.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) 8. c2. 7. b2 a2b2. 6. c1. 4. c. a1. a. N. Control (sin inoculo). b1. R.etli Rf 167--01 (A) A. chroococcum (B). UN IC. b. 3. a1. a2. AC IÓ. 5. a. A+B. M. 2 1. CO. Promedio de la longitud de raiz (cm) de las plántulas de L. esculentum. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 30. 40. A. 20. Y. 0. RM. ÁT. IC. Tiempo (Días). AS. DE. IN FO. * Letras distintas indican diferencias significativas (p˂0.05). EM. Figura 2. Promedio de la longitud de raíz (cm) de las plántulas de L. esculentum. SI ST. “tomate” después de 20, 30 y 40 días de inoculación con agua destilada estéril. DE. (control), R. etli Rf 167-01, A. chroococcum y la coinoculación de ambas. DI. RE. CC. IO. N. bacterias, en condiciones de laboratorio.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) 0.018. d2. 0.016. c2. 0.014. b2. 0.012. a2. 0.008. a b. d. N. A. chroococcum (B) A+B. M. 0.004. c. b1. R.etli Rf 167--01 (A). c1. UN IC. 0.006. a1. Control (sin inoculo). AC IÓ. d1. 0.01. CO. 0.002 0 20. 30. 40. RM. ÁT. IC. A. Tiempo (Días). Y. Peso seco aéreo promedio (g) de las plántulas de L. esculentum. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. DE. IN FO. * Letras distintas indican diferencias significativas (p˂0.05). EM. Figura 3. Promedio del peso seco (g) de la parte aérea de las plántulas de L. esculentum. SI ST. “tomate” después de 20, 30 y 40 días de inoculación con agua destilada estéril. DE. (control), R. etli Rf 167-01, A. chroococcum y la coinoculación de ambas. DI. RE. CC. IO. N. bacterias, en condiciones de laboratorio.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. c2. 0.016. b2. 0.014. a2b2. 0.012. a2. Control (sin inoculo). N. c1. R.etli Rf 167--01 (A). b1c1 a1b1. 0.008 0.006. a b. 0.004. b. c. AC IÓ. 0.01. A. chroococcum (B). a1. A+B. UN IC. Peso seco radicular promedio (g) de las plántulas de L. esculentum. 0.018. 0.002 30. 40. CO. 20. M. 0. ÁT. IC. A. Y. Tiempo (Días). DE. IN FO. RM. * Letras distintas indican diferencias significativas (p˂0.05). AS. Figura 4. Promedio del peso seco (g) de la parte radicular de las plántulas de L.. EM. esculentum “tomate” después de 20, 30 y 40 días de inoculación con agua. SI ST. destilada estéril (control), R. etli Rf 167-01, A. chroococcum y la. DI. RE. CC. IO. N. DE. coinoculación de ambas bacterias, en condiciones de laboratorio.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) 0.025. d2 0.02. b2. a b. c. d. Control (sin inoculo). c1. R.etli Rf 167--01 (A) A. chroococcum (B) A+B. UN IC. 0.01. a1. b1. a2. N. d1. AC IÓ. 0.015. c2. M. 0.005. 0 20. 30. CO. peso seco total (g) de las plántulas L. esculentum. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 40. RM. ÁT. IC. A. Y. Tiempo (Días). AS. DE. IN FO. * Letras distintas indican diferencias significativas (p˂0.05). EM. Figura 5. Promedio del peso seco total de las plántulas de L. esculentum “tomate”. SI ST. después de 20, 30 y 40 días de inoculación con agua destilada estéril. DE. (control), R. etli Rf 167-01, A. chroococcum y la coinoculación de ambas en. condiciones. de. laboratorio.. DI. RE. CC. IO. N. bacterias,. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. En la evaluación de la longitud del tallo se encontró diferencia significativa entre. N. los tratamientos (Anexo 22, 23), las plántulas de L. esculentum “tomate”. AC IÓ. coinoculadas con R. etli Rf 167-01 y A. chroococcum la longitud de tallo fue mayor. UN IC. en comparación con los inoculados con solo R. etli Rf 167-01, A. chroococcum y el control sin inóculo (figura 1), esto se explicaría porque la interacción de hospedante. CO. M. y simbionte promueve la fijación de nitrógeno, dicha interacción aumenta la. Y. absorción del nitrógeno, elemento importante para el crecimiento de las plántulas,. IC. A. además también promueven la disolución de fosfatos y la producción de. ÁT. fitohormonas de crecimiento como auxinas, giberalinas y citosinas, permitiendo el. RM. desarrollo y crecimiento de las plántulas. Estos microorganismos son considerados. IN FO. de gran importancia agrícola por su acción como PGPR, incrementando la tasa de. DE. germinación, crecimiento del tallo y la raíz, aumento en la absorción de nutrientes.. EM. AS. (35,37). SI ST. Azotobacter chroococcum al ser un microorganismo de vida libre presenta una. DE. alta tasa de respiración que permite proteger el nitrógeno y fijarlo permitiendo una. N. mayor efectividad. El incremento en la variable agronómica longitud del tallo. IO. concuerda con lo descrito por investigadores que reportaron incrementos del 34 al. DI. RE. CC. 100% en la altura del tomate. (36). En la evaluación de la longitud de raíz se encontró diferencia significativa entre. los tratamientos (Anexo 24,25), las plántulas de L. esculentum “tomate” coinoculadas con R. etli Rf 167-01 y A. chroococcum incrementaron significativamente su longitud de raíz en comparación con los tratamientos 1, 2 y 3 (Figura 2), esto. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. posiblemente se deba a un sinergismo entre el hospedante y las bacterias, lo que permitió la fijación biológica del N2. y su absorción por la planta, el cual. probablemente junto con las fitohormonas, que excretan las raíces tiene acción. N. fisiológica. (37) En cambio, el bajo efecto de la inoculación independiente de R. etli Rf. AC IÓ. 167-01 pudo deberse a que las cepas no encontraron el medio adecuado en la. UN IC. rizósfera, ya que en general, para que los microorganismos puedan asociarse íntimamente con las raíces, tienen que escapar de los mecanismos de defensa de la. CO. M. planta y encontrar condiciones nutritivas y ambientales adecuadas para su. IC. A. Y. crecimiento. (38). ÁT. Al respecto numerosos estudios han demostrado el uso de A. chroococcum y R.. RM. etli como bacterias fijadoras de N2 y como promotoras del crecimiento de plantas no. IN FO. leguminosas. En investigaciones realizadas se encontró que los rizhobios no solo. DE. colonizan la superficie de las raíces, sino también las células lisadas de la corteza de. AS. la raíz y en el espacio intracelular del centro de células cilindro de las raíces. Además. EM. se ha demostrado que tanto Rhizobium puede introducirse y colonizar otras plantas,. SI ST. tal como sucede con Azorhizobium caulinodans en raíces de la oleaginosa Brassica. DE. napus. Estas asociaciones entre los rizobios y plantas no leguminosas pueden mejorar el crecimiento de las plantas, aunque no se ha demostrado que sea mediante. IO. N. la fijación de nitrógeno. (39,40). RE. CC. Otras características que pueden favorecer el crecimiento de estas plántulas de L.. DI. esculentum “tomate” por Azotobacter y Rizhobium es la producción de sideróforos, los que tienen alta afinidad por el hierro, secuestrando a este elemento, convirtiéndolo en factor limitante para grupos de microorganismos patógenos, también producen sustancias que inducen la resistencia sistémica en algunas plantas,. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. jugando así un papel importante para el control biológico de algunas enfermedades en las plantas. (40). N. En el día 20 la longitud de raíces fue superior en las plántulas coinoculadas con. AC IÓ. R. etli Rf 167-01 y A. chroococcum encontrándose diferencias significativas entre los. UN IC. tratamientos, esto se explicaría porque A. chroococcum promueve en forma considerable el desarrollo de las raíces secundarias mediante la producción de. CO. M. metabolitos entre los que destacan las hormonas vegetales (giberalinas, auxinas, etc).. Y. Este incremento en el crecimiento radicular favorece la capacidad de la planta para. IC. A. absorber nutrientes e incrementar su crecimiento, es decir, evidencia la capacidad. RM. ÁT. promotora del crecimiento vegetal. (40,41). IN FO. En la evaluación del peso seco de la parte aérea se encontró diferencia. DE. significativa entre los tratamientos (Anexo 26, 27), las plántulas coinoculadas con R.. AS. etli Rf 167-01 y A. chroococcum incrementaron significativamente su peso seco. SI ST. EM. aéreo, en comparación con los tratamientos 1, 2 y 3(Figura 3).. DE. Con respecto a los resultados obtenidos del peso seco de la parte radicular se. N. encontró diferencia significativa entre los tratamientos (Anexo 28, 29), las plántulas. IO. coinoculadas. con. R. etli. Rf. 167-01. y. A.. chroococcum. incrementaron. RE. CC. significativamente su peso seco radicular, en comparación con los tratamientos 1, 2. DI. y3 (Figura 4). Los resultados obtenidos del peso seco total se encontró diferencia significativa. entre los tratamientos (Anexo 30, 31), las plántulas coinoculadas con R. etli Rf 16701 y A. chroococcum incrementaron significativamente su peso seco total, en comparación con los tratamientos 1, 2 y 3 (Figura 5). 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El incremento en el peso seco aéreo, radicular y total de las plantas inoculadas con A. chroococcum y R. etli Rf 167-01, se debería al sinergismo que hay entre R. etli Rf 167-01 y A. chroococcum, en la cual el efecto biológico combinado es mayor. AC IÓ. N. que los efectos de cada bacteria sola.. UN IC. En investigaciones realizadas con hortalizas se tiene en cuenta el tipo de suelo a utilizar y principalmente los elementos esenciales que requiere la planta como el. CO. M. nitrógeno (N) que es un elemento abundante en las plantas y se le encuentra en forma. A. ÁT. IC. nitrato (NO3) que puede transformarlo la raíz. (42). Y. de nitrógeno orgánico e inorgánico. Este último se puede acumular en forma de. RM. Dichos resultados concuerdan con trabajos realizados por Dobbelaere et. al. que. IN FO. sugieren efectos positivos de la inoculación combinada con Rhizobium – Azotobacter. DE. demostrando un efecto significativo en cuanto a la fijación de nitrógeno, aumento del. AS. contenido de macronutrientes y micronutrientes, en comparación con la inoculación. EM. individual. El agente potenciador de estos beneficios ha sido correlacionado con la. SI ST. influencia positiva de las bacterias promotoras de crecimiento, ya que se verifican aumentos significativos en factores de rendimiento como la acumulación de masa. IO. N. DE. seca y el contenido de nitrógeno. (43). RE. CC. Algunos autores demostraron que bacterias del género Azotobacter favorecen el. DI. desarrollo vegetativo de diferentes cultivos agrícolas, de igual manera mencionaron que entre los efectos beneficiosos de Azotobacter en las plantas se consideran el incremento de altura, área radicular y rendimiento de la cosecha, también concluyeron que Azotobacter promueve el crecimiento de raíces, lo que conlleva a un aumento de la concentración de materia seca. (44,45) 27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Varios autores coinciden que el AIA producido por las bacterias inoculadas es el principal metabolito que induce el crecimiento de las plantas, al aumentar la división celular y la diferenciación de los tejidos, efectos que se ven reflejados en un mayor. N. contenido de biomasa (Santillana et al., 2005). En cuanto al crecimiento de las. AC IÓ. plántulas de tomate, se encontró que a los 40 días de haberse iniciado el tratamiento,. UN IC. cada una de las bacterias había tenido un efecto positivo en las variables evaluadas. La coinoculación aumento de manera significativa (P ≤ 0.05) la longitud del tallo,. CO. M. raíz, peso seco aéreo, radicular y total, lo que se reflejó en aumentos de biomasa. Los. Y. cuales se evidenciaron mediante la evaluación de materia seca aérea, radicular y. RM. ÁT. IC. A. total. (45). IN FO. Por todo lo expuesto podemos decir que la coinoculación de R. etli Rf 167-01 y A. chroococcum tienen un efecto positivo sobre las plántulas de L. esculentum. DE. “tomate”, demostrándose una diferencia significativa en la evaluación de las. AS. variables agronómicas con respecto a los tratamientos 1, 2 y 3. Esto constituye una. SI ST. EM. alternativa para reducir el uso de fertilizantes químicos.. DE. Este trabajo indica que la coinoculación de Rhizobium etliRf 167-01 y. N. Azotobacter chroococcum, tiene un excelente potencial para que sean utilizados. CC. IO. como promotores de crecimiento de plantas no leguminosas, convirtiéndose en un. RE. medio económicamente atractivo y ecológicamente aceptable para reducir el uso de. DI. químicos en plantas.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIÓN. Rf-167-01 y. A. chroococcum, tuvo un efecto. UN IC. La coinoculación de R. etli. AC IÓ. N. Según los resultados obtenidos se concluye que:. “tomate”,. condiciones. de. laboratorio.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. en. M. estimulante y significativo sobre el crecimiento de plántulas de L. esculentum. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RECOMENDACIONES. Utilizar suelo agrícola no estéril, ya que las condiciones de campo en relación. AC IÓ. N. . Cuando se trabaje a nivel de campo, la concentración del inóculo debe ser mayor. M. . UN IC. con las del suelo estéril y a nivel de laboratorio son otras.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. a la utilizada en condiciones de laboratorio.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Pulido L. E, Medina N, Cabrera A. Biofertilización con rizobacterias y hongos. N. micorrízicos arbusculares en la producción de posturas de tomate (Lycopersicon. AC IÓ. esculentum mill.) y cebolla (Allium cepa l.). I. Crecimiento Vegetativo. Redalyc. UN IC. 2003; 24(1): 15-24.. 2. Ferrera Cerrato R, Alarcón A. La Microbiología del Suelo en la agricultura. CO. M. sostenible. Ciencia Ergo Sum 2001; 8(2): 175 – 183.. Y. 3. Rives N, Acebo Y, Hernández A. Bacterias promotoras del crecimiento vegetal. A. en el cultivo del arroz (Oryza sativa l.). perspectivas de su uso en cuba. Redalyc. ÁT. IC. 2007; 28(2): 29 – 38.. RM. 4. Reyes I, Alvarez L, El Ayoubi H, Valery A. Selección y Evaluación de. IN FO. Rizobacterias Promotoras del Crecimiento en Pimentón y Maíz. Bioagro 2008;. DE. 20(1): 37-48.. AS. 5. Santillana N, Arellano C, Zuñiga D. Capacidad del Rhizobium de promover el. EM. crecimiento en plantas de tomate (Lycopersicon esculentum Miller). Redalyc. SI ST. 2005; 4(1-2): 47-51.. 6. Torriente D. Aplicación de bacterias promotoras del crecimiento vegetal en el. DE. cultivo de la caña de azúcar. Perspectivas de su uso en cuba. Scielo 2010; 31(1):. IO. N. 1-10.. DI. RE. CC. 7. Hernandez A. Obtención de un bioestimulador del crecimiento vegetal a partir de rizobacterias asociadas al cultivo de maíz (Zea mays L.). [Tesis de grado], Instituto de Ciencias Agrícolas, 2002.. 8. Bashan Y. Inoculants of plant growth-promoting bacteria for use in agriculture. Elsevier Science Inc. Biotechnology Advances 1998. Vol.16 (4) ,729-770.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..