Efecto de la psilocibina sobre el crecimiento de Pseudomonas putida en condiciones de laboratorio

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. AS. BI. O. LO. G. IC. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. AS. ESCUELA PROFESIONAL DE. CI. Efecto de la psilocibina sobre el crecimiento. CI EN. de Pseudomonas putida en condiciones de. TESIS. CA. DE. laboratorio. BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO. IO. TE. PARA OPTAR EL TITULO PROFESIONAL DE. Br. Lavado Enco, Alessandra Sarita. BI. BL. Autor: Br. Gallardo Paredes, Denis Romario,. Asesor: Ms. C. Wilson Krugg, Juan Héctor. Trujillo-Perú 2019. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. AS. A mis padres Melania y Juan, por su apoyo y confianza en mí, por los sacrificios que hacen día a día con el fin de que nada me falte,. IC. espero de todo corazón no decepcionarlos nunca y poderles dar lo. LO. G. que dieron por mí, ser lo que fueron por mí y cuidar de ustedes como. BI. O. cuidaron de mí.. AS. A mis hermanos de otros padres Carlo, Jhomar, Aldair y Ruth,. CI. porque ustedes serán siempre la familia que yo escogí, con quienes. CI EN. puedo mostrar y expresar mis verdaderos sentimientos sin temor a nada y es que de una forma u otra siempre me impulsan a dar lo. DE. mejor de mi y este logro es prueba de ello.. CA. A mi padre, madre y hermano, por su apoyo incondicional en la. TE. formación académica, gracias por su cariño ayuda y comprensión. IO. en los buenos y malos momentos. A mi abuelita María que, aunque. BL. ya no se encuentra conmigo físicamente, siempre estará presente en. BI. mi corazón por haber creído en mi hasta el último momento.. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. AS. Nuestro más sincero agradecimiento a nuestro asesor y amigo MS. C. Juan Héctor Wilson Krugg; profesor de la Cátedra de Micología y Fitopatología y el mejor docente. IC. que hemos conocido, por todo el apoyo brindado, la confianza en nuestro proyecto y en. G. nuestra capacidad, por sus consejos y todas las recomendaciones que hicieron posible. BI. O. LO. este trabajo.. A Karina Soto Vásquez, por darme el privilegio de ser su amigo además del. AS. apoyo con diversas pruebas y como intermediaria para la consecución de otros. CI. materiales, por su infinita amabilidad, confianza y sinceridad, por ser de las. CI EN. pocas personas que hoy en día quedan y son muy difíciles de hallar.. DE. A mis hermanos Carlo, Jhomar y Aldair porque nunca dejaron que me sienta solo, aun cuando todos se fueron ustedes siempre estuvieron ahí, porque incluso. CA. cuando sentía que no podía más ustedes llegaban con un arsenal de licores. TE. dispuestos a no aceptar un “No” por respuesta, por borrar cada sentimiento de tristeza con esas salidas inolvidables, la resaca es temporal pero las historias de. IO. las borracheras son para siempre hermanos. Y sobre todo a Carlo por siempre. BL. apoyar mis ocurrencias, aun cuando estas sobrepasaban el limite de lo razonable. BI. para el siempre fueron una opción viable, no cambies nunca hermano.. A todas aquellas personas que de manera directa e indirecta permitieron la elaboración de esta tesis.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÍNDICE. DIDICATORIA…………………………………………………………………………………………………………..ii. AS. AGRADECIMIENTO…………………………………………………………………………………………………iii JURADO DICTAMINADOR..……………………………………………………………………………………iv. IC. INDICE.…………………………………………………………………………………………………………………………v. LO. G. PRESENTACIÓN………………………………………………………………………………………………………vii DEL ASESOR……………………………………………………………………………………………………………viii. O. RESUMEN………………………………………………………………………………………………………………….ix. BI. ABSTRACT ....................................................................................................................... x. AS. INTRODUCCIÓN ............................................................................................................ 1. CI. MATERIAL Y MÉTODO ............................................................................................... 4 Material biológico .................................................................................................. 4. 2.. Obtención de basidiocarpos de Psilocybe cubensis .............................................. 4. CI EN. 1.. Subcultivo de P. cubensis .............................................................................. 4. 2.2. Propagación de micelio de P. cubensis ........................................................ 4. 2.3. Producción de basidiocarpos de P. cubensis ............................................... 4. 2.4. Desecación de basidiocarpos de P. cubensis................................................ 5. DE. 2.1. 3.1. Extracción de psilocibina.............................................................................. 5 Purificación .................................................................................................... 5. TE. 3.2. CA. Obtención de psilocibina a partir de basidiocarpos de P. cubensis...................... 5. 3.. 3.3. Concentración y cristalización ..................................................................... 5. Reactivación y propagación de Pseudomonas putida........................................... 5. 5.. Evaluación del efecto de la psilocibina sobre el crecimiento de P. putida .......... 6. BI. BL. IO. 4.. 5.1. Preparación del medio base para la evaluación ......................................... 6. 5.2. Obtención de las concentraciones de psilocibina al 0.5%, 1.0% y 1.5%.. 6. 5.3. Estandarización del inóculo ......................................................................... 6. 5.4 Evaluación del efecto de la concentración de 0.5%, 1.0% y 1.5% de psilocibina sobre el crecimiento de Pseudomonas putida ....................................... 6 5.5. Incubación y resultados ................................................................................ 7. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Análisis de resultados.................................................................................... 7. 5.6. RESULTADOS ................................................................................................................. 8 DISCUSIÓN .................................................................................................................... 11. AS. CONCLUSIÓN ............................................................................................................... 13 RECOMENDACIONES................................................................................................. 14. IC. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS .......................................................................... 15. G. ANEXOS .......................................................................................................................... 20. O. LO. Anexo 1. P. cubensis, fase micelial en cultivo proporcionado por el laboratorio de Fitopatología de la Universidad Nacional de Trujillo. ................................................... 21. BI. Anexo 2. Cepa de P. putida ATCC 12633 ...................................................................... 22 Anexo 3. Micelio de P. cubensis propagado en arroz integral...................................... 23. AS. Anexo 4. Superficie colonizada por P. cubensis ............................................................ 23 Anexo 5. Basidiocarpos inmaduros de P. cubensis ....................................................... 24. CI EN. CI. Anexo 6. Secado a 40°C durante 24 horas y pulverización de basidiocarpos de P. cubensis. ........................................................................................................................ 25 Anexo 7. Purificación de la resina obtenida con éter de petróleo, cloroformo y etanol. ...................................................................................................................................... 26. DE. Anexo 8. Psilocibina cristalizando en forma de agujas incoloras durante el transcurso de la evaporación del metanol ..................................................................................... 27 Anexo 9. Conservación de la psilocibina obtenida. ...................................................... 28. CA. Anexo 10. Estandarización del inoculo de P. putida..................................................... 29. TE. Anexo 11. Tratamientos empleados para la evaluación, en donde T1 corresponde a 0.5%, T2 a 1.0% y T3 a 1.5% de psilocibina. Los experimentos se realizaron por triplicado ....................................................................................................................... 30. IO. Anexo 12. Análisis estadístico de comparación de medias mediante ANOVA, utilizando el programa estadístico informático IBM SPSS Statistics v. 25.0. ................................. 31. BI. BL. Anexo 13. Análisis estadístico de comparación de medias mediante HSD Tukey, utilizando el programa estadístico informático IBM SPSS Statistics v. 25.0. ................ 32. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. PRESENTACIÓN. G. IC. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. LO. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra. O. consideración y criterio, el informe de tesis titulado: “Efecto de la psilocibina. BI. sobre el crecimiento de Pseudomonas putida en condiciones de laboratorio”, con. Trujillo, Diciembre del 2019. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. el propósito de obtener el Título Profesional de Biólogo –Microbiólogo.. Br. Denis Romario Gallardo Paredes. Br. Alessandra Sarita Lavado Enco. xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. AS. El que suscribe, Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg, asesor de la presente tesis titulada: “Efecto de la psilocibina sobre el crecimiento de Pseudomonas putida en. G. IC. condiciones de laboratorio”. LO. CERTIFICA:. O. Que ha sido desarrollada, de acuerdo al reglamento establecido de la Facultad. BI. de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en. AS. conformidad con su correspondiente proyecto, y que el informe ha sido redactado. CI. acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.. CI EN. Por lo tanto, autorizo a los bachilleres DENIS ROMARIO GALLARDO PAREDES y ALESSANDRA SARITA LAVADO ENCO, continuar con el. DE. trámite del reglamento correspondiente. BI. BL. IO. TE. CA. Trujillo, Diciembre del 2019. Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg ASESOR. xiv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESÚMEN. AS. Se determinó el efecto de la psilocibina a concentraciones de 0.5, 1.0 y 1.5% sobre el crecimiento de Pseudomonas putida. Para lo cual se empleó psilocibina. IC. obtenida a partir de basidiocarpos de Psilocybe cubensis, las concentraciones en. LO. G. evaluación se lograron mediante la dilución en un medio mínimo de sales en donde posteriormente se inoculo una suspensión de P. putida estandarizada a. BI. O. 750OD a 600nm (3x108 UFC/ml) dando una cantidad inicial de células bacterianas correspondientes a 3x106 UFC/ml. Los sistemas en evaluación se mantuvieron. AS. durante 12 horas a 26° C en agitación constante a 200 rpm. El crecimiento de P.. CI. putida se determinó mediante lectura en espectrofotómetro a una longitud de onda. CI EN. de 600nm con alícuotas de 0.5 ml cada hora. Se obtuvo un crecimiento de P. putida correspondiente a una densidad óptica de 0.481 (1.9x108 UFC/ml) para la. DE. concetración de 0.5%, 0.629 (2.5x108 UFC/ml) para la concentración de 1.0% y 0.664 (2.7x108 UFC/ml) para la concentración de 1.5%, en cuanto al control. CA. positivo se obtuvo una densidad óptica de 0.596 (2.4x108 UFC/ml). Se concluyó. TE. que a mayor concentración de psilocibina mayor es el crecimiento de P. putida,. IO. además de ser capaz de metabolizar la psilocibina como única fuente de nitrógeno. BL. y carbono bajo condiciones de laboratorio.. clave:. Pseudomonas. putida,. psilocibina,. Psilocybe. cubensis,. BI. Palabras. crecimiento.. xv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT. The effect of psilocybin at concentrations of 0.5, 1.0 and 1.5% on the growth of. AS. Pseudomonas putida was determined. For which psilocybin obtained from Psilocybe cubensis basidiocarpos was used, the concentrations under evaluation. IC. were achieved by dilution in a minimal medium of salts where subsequently a. G. standardized P. putida suspension at 750OD at 600 nm (3x108 CFU / ml) giving an. LO. initial number of bacterial cells corresponding to 3x106 CFU / ml. The systems under evaluation were maintained for 12 hours at 26 ° C under constant agitation. O. at 200 rpm. The growth of P. putida was determined by spectrophotometer. BI. reading at a wavelength of 600 nm with 0.5 ml aliquots every hour. A growth of P. putida corresponding to an optical density of 0.481 (1.9x108 CFU / ml) was. AS. obtained for the concentration of 0.5%, 0.629 (2.5x108 CFU / ml) for the. CI. concentration of 1.0% and 0.664 (2.7x108 CFU / ml) for the concentration of. CI EN. 1.5%, as for the positive control an optical density of 0.596 (2.4x108 CFU / ml) was obtained. It was concluded that the higher the concentration of psilocybin is the growth of P. putida, in addition to being able to metabolize psilocybin as the. DE. sole source of nitrogen and carbon under laboratory conditions.. BI. BL. IO. TE. CA. Key words: Pseudomonas putida, psilocybin, Psilocybe cubensis, growth.. xvi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN. El carbono puede ser suministrado y asimilado en diversas formas, las bacterias del suelo. AS. poseen mecanismos para captarlo a partir de fuentes vegetales o animales, además del. IC. carbono pirogénico, resultante de un proceso de pirólisis, para luego ser empleado en el. G. proceso de obtención de energía asociado a la funcionalidad celular, el metabolismo del. LO. carbono no solo juega un papel en la obtención de energía sino también en la colonización. .. BI. 1-3. O. de plantas por algunas bacterias beneficiosas, que llegan a aportar resistencia a las sequías. AS. El nitrógeno es considerado también como un elemento de gran importancia para las. CI. funciones vitales de la célula bacteriana, la forma de obtención más común es mediante la. CI EN. fijación en suelo por enzimas reductasas, de manera similar otra de las formas involucra la captación a partir de los aminoácidos que son suministrados en el medio. 4,5. . La fuente de. DE. nitrógeno en los microorganismos llega a desarrollar un rol importante en el crecimiento, ya que la asimilación de este elemento se encuentra ligado a la captación de. CA. micronutrientes, solubilización de fosfatos en ciertas bacterias, así como también en la. TE. producción de bioenergía 6,7.. IO. Los alcaloides son considerados compuestos nitrogenados orgánicos 8, algunos indólicos. BL. con una estructura triptamina que funciona como esqueleto derivado del aminoácido. BI. triptófano 9. Dentro de los alcaloides heterocíclicos aromáticos tenemos a la psilocibina, producida por hongos del género Psilocybe, esta al ser considerada un alcaloide indolico posee una estructura de triptamina que conserva en gran parte el esqueleto del aminoácido que le da origen lo que causa una gran similitud estructural con el aminoácido triptófano, la estructura en concreto se compone de un anillo aromático de benceno y un anillo de pirrol,. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. con la adición de una cadena lateral de 2 carbonos, además de un grupo fosfato y dos moléculas de nitrógeno, haciendo que este alcaloide pueda ser empleado como una fuente de nitrógeno y/o carbono 10,11.. AS. Durante los últimos años se ha descubierto que la interacción entre algunos alcaloides. IC. incluidos dentro del grupo de los alcaloides heterocíclicos aromáticos y las bacterias puede. G. resultar en un efecto favorable para el crecimiento. Si consideramos como ejemplo a dos. LO. de los alcaloides comercialmente más conocidos como son la nicotina y la cafeína, se. O. puede encontrar una mejora en la relación sinérgica de Streptococcus mutans y Candida. BI. albicans en donde el número de células bacterianas y fúngicas en las biopelículas aumentó. AS. en presencia de nicotina 12.. CI. Además, se encontró que algunas especies del género Pseudomonas, tienen la capacidad de. CI EN. usar la nicotina como única fuente de nitrógeno y carbono para su crecimiento. Estudios realizados por Jianli Liu et al. reportan que a concentraciones de 1.8 g/l se obtuvo una asimilación del 98% de la nicotina como única fuente de nitrógeno y carbono por 13. DE. Pseudomonas putida. . Arthrobacter nicotinovorans también es capaz de crecer. CA. eficientemente en un medio con nicotina como fuente de carbono y nitrógeno 13.. TE. En cuanto a la cafeína, se encontró que Paraburkholderia caffeinitolerans sp. nov.,. IO. presenta la capacidad para degradar cafeína, utilizándola como única fuente de carbono y. BL. nitrógeno para su crecimiento 14. Alcaloides de β-carbolina también se vieron involucrados. BI. en la estimulación del crecimiento de diversas especies de Bacillus 15. Además, alcaloides producidos por Aspergillus sclerotium y Penicillium citrinum aumentaron el crecimiento y la aparición de biopelículas de Staphylococcus aureus en camarones. 16. . Pseudomonas. putida como organismo modelo de la rizosfera tiene la capacidad de utilizar l-aminoácidos y diversos compuestos aromáticos como fuente de nitrógeno y carbono en algunas. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. situaciones, además de tener una alta capacidad para usar alcaloides como fuente de carbono y nitrógeno 17-19. Esta bacteria es considerada un organismo modelo para los enfoques biotecnológicos. AS. debido a su versatilidad metabólica sumada a un bajo potencial patógeno, sin embargo. IC. mantiene un potencial considerable para aplicaciones biotecnológicas, particularmente en. , las cuales en la actualidad están sumando mucho interés por el beneficio económico. LO. 20-23. G. las áreas de biorremediación, biocatálisis, control biológico y en la producción bioplásticos. O. que aportan y la contribución amigable con el medio ambiente, por lo cual se propone. BI. emplear la psilocibina como fuente de nitrógeno para estimular el crecimiento de. AS. Pseudomonas putida.. CI. Debido a la similitud estructural de la psilocibina con el aminoácido triptófano y una alta. CI EN. sensibilidad de degradación, se presenta como una buena alternativa de uso para lograr una rápida obtención de nitrógeno y fosforo con un menor gasto de energía a comparación de. DE. las fuentes convencionalmente empleadas, de tal manera que se acorte el tiempo de producción de biomasa y así optimizar costos en futuros procesos, obteniendo de esta. CA. manera un mayor beneficio, por tal razón, el objetivo de esta investigación fue determinar. TE. el efecto de la psilocibina a concentraciones de 0.5%, 1% y 1.5% en el crecimiento de. BI. BL. IO. Pseudomonas putida en condiciones de laboratorio.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODO 1. Material biológico. AS. 1.1 Cultivo en fase micelial de Psilocybe cubensis proporcionado por el. IC. laboratorio de Fitopatología de la Universidad Nacional de Trujillo. (Anexo 1). LO. 2. Obtención de basidiocarpos de Psilocybe cubensis. G. 1.2 Cepa de Pseudomonas putida ATCC 12633. (Anexo 2). O. 2.1 Subcultivo de P. cubensis. BI. Se realizó el subcultivo de P. cubensis a partir de la fase micelial. AS. proporcionada por el laboratorio de fitopatología de la Universidad. CI. Nacional de Trujillo, se sembró en medio Agar papa dextrosa (PDA) y se. CI EN. dejó incubar a 27°C por un periodo de 5 días, de esta forma se obtuvieron nuevos cultivos listos para ser propagados 24. 2.2 Propagación de micelio de P. cubensis. DE. Se realizó la propagación de micelio en granos de arroz integral a partir de. CA. los subcultivos obtenidos, y se dejó incubar a 27°C por un periodo de 12 días hasta que todo el arroz fue colonizado 24. (Anexo 3). TE. 2.3 Producción de basidiocarpos de P. cubensis. BI. BL. IO. Se realizó la mezcla de abono de vaca y el arroz integral colonizado en proporciones 2:1 dentro de una caja de plástico con orificios para la ventilación y se dejó incubar a 24°C por 3 días en oscuridad, cuando toda el área superficial fue colonizada por el micelio se aplicó una cobertura con una ligera capa de fibra de plástico. A partir de aquí se dieron las condiciones de fructificación con una temperatura de 24°C y una humedad del 90% 24. (Anexo 4) 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.4 Desecación de basidiocarpos de P. cubensis Se recolectaron los basidiocarpos producidos que luego fueron colocados en placas Petri para ingresar a la estufa y pasar por el proceso de desecación a. AS. una temperatura de 40°C por 24 horas 25. (Anexo 6) 3. Obtención de psilocibina a partir de basidiocarpos de P. cubensis. G. IC. 3.1 Extracción de psilocibina. LO. Se pulverizaron 100 gramos de basidiocarpos desecados y se mezclaron con. O. 100 ml de metanol en agitación, luego se separó la extracción de los. BI. basidiocarpos pulverizados, el metanol resultante se evaporo hasta obtener. AS. una resina en la base 25. 3.2 Purificación. CI. Se realizó la purificación tratando la resina obtenida con éter de petróleo y. CI EN. luego 3 veces más con cloroformo que contenía 10% de etanol 26. (Anexo 6) 3.3 Concentración y cristalización. DE. La concentración se realizó agregando etanol hasta cubrir la resina ya purificada, se evaporo el etanol y luego se recogió el residuo resultante en. CA. 50 ml de metanol. Esta suspensión se pasó por la columna cromatográfica.. TE. La solución obtenida se recogió en placas Petri y con la evaporación del. IO. metanol en el transcurso de las horas se obtuvo psilocibina en forma de. BL. agujas incoloras 26. (Anexo 8). BI. 4. Reactivación y propagación de Pseudomonas putida Se reactivó la cepa de P. putida y se realizó la siembra en medio agar nutritivo, dejando este en incubación a 26°C de acuerdo a las especificaciones de ATCC ® 27. .. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 5. Evaluación del efecto de la psilocibina sobre el crecimiento de P. putida 5.1 Preparación del medio base para la evaluación La evaluación se realizó empleando un medio mínimo de sales compuesto. AS. por K 2 HPO 4 15 g/l, Na2HPO4 33.9 g/l, NaCl 2.5 g/l y NH4Cl 5 g/l en donde este último componente fue remplazado por las tres concentraciones de. G. IC. psilocibina a evaluar (0.5, 1.0 y 1.5%) y para el control positivo, se remplazó la. LO. psilocibina por peptona al ser una de las fuentes de carbono y nitrógeno. O. comúnmente empleada en los medios de cultivo. Se prepararon un total de doce. BI. matraces con 99 ml de medio con un pH final de 6.8 +/- 0.2, para cada. AS. tratamiento y control se realizó la evaluación por triplicado 29. 5.2 Obtención de las concentraciones de psilocibina al 0.5%, 1.0% y 1.5%. CI. Se adicionó 0.5g, 1.0g y 1.5g de la psilocibina obtenida, en un volumen total de. CI EN. 100 ml por matraz correspondientemente para cada grupo de matraces, durante la evaluación se emplearon grupos de 3 matraces por concentración.. DE. 5.3 Estandarización del inóculo. CA. Se realizó la estandarización del inoculo a partir de cultivo joven de Pseudomonas putida, preparando una suspensión en solución salina fisiológica. TE. estéril correspondiente a una densidad óptica de 0.75 a 600nm 28. (Anexo 10). IO. 5.4 Evaluación del efecto de la concentración de 0.5%, 1.0% y 1.5% de. BL. psilocibina sobre el crecimiento de Pseudomonas putida. BI. Se inoculo 1 ml de la suspensión estandarizada, en cada uno de los doce matraces, alcanzando así un volumen de 100 ml, estos fueron colocados inmediatamente en agitación a 200 rpm30 a temperatura de 26°C durante 12 horas, se realizaron 3 repeticiones por cada concentración en evaluación incluido el control positivo. (Anexo 11) 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 5.5 Incubación y resultados El crecimiento de P. putida en evaluación se determinó mediante espectrofotometría, tomando alícuotas de 0.5 ml a un tiempo cero y luego cada. AS. 1 hora por un periodo de 12 horas, estas alícuotas fueron leídas inmediatamente a una longitud de onda de 600nm 28.. G. IC. 5.6 Análisis de resultados. LO. Para determinar si existía diferencia significativa entre los tratamientos. O. evaluados se empleó el análisis de varianza, mediante el programa estadístico. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. SPSS v.25.0. (Anexo 12, 13). 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. El aumento de las densidades ópticas durante este experimentos indicó un mayor. AS. crecimiento, para las concentraciones de psilocibina al 0.5, 1.0 y 1.5% se produjeron densidades ópticas de 0.481, 0.629 y 0.664 respectivamente, además del control positivo. G. IC. que presento una densidad óptica de 0.596 a 600nm (Fig. 1).. LO. El mayor crecimiento se produjo al emplear psilocibina a una concentración del. O. 1.5% en comparación con el control positivo, obteniéndose diferencia significativa (Fig.. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. 2).. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Leyenda ⬛ Psilocibina 0.5% ▲ Psilocibina 1.0% ● Psilocibina 1.5% ◊ Control positivo. CI. Figura 1. Crecimiento de Pseudomonas putida en medio mínimo de sales con. CI EN. psilocibina al 0.5%, 1.0%, 1.5% y control positivo durante 12 horas de evaluación. Los cultivos se incubaron a 26°C con agitación a 200 rpm, el crecimiento se midió como la. BI. BL. IO. TE. CA. DE. OD600.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Porcentaje de crecimiento de P. putida. 120.00%. d. c. a. 100.00%. 109.73%. 105.54%. 100.00%. AS. b. 80.00%. 80.70%. G. IC. 60.00%. LO. 40.00%. 0.00%. O. 20.00%. 1.0% 0.5% Concetraciones de psilocibina. 1.5%. AS. BI. Control. CI. a, b, c y d son significativamente diferentes (p<0.05). CI EN. Figura 2. Porcentaje de crecimiento alcanzado por Pseudomonas putida con los diferentes. BI. BL. IO. TE. CA. DE. tratamientos y el control positivo luego de 12 horas de evaluación.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN Los resultados de esta investigación demostraron que Pseudomonas putida tiene la capacidad de metabolizar psilocibina y emplearla como única fuente de carbono y. AS. nitrógeno, esto concuerda con diferentes investigaciones en donde se demostró que la presencia de alcaloides lograba estimular el crecimiento microbiano, entre ellos la nicotina. G. IC. y la cafeína12-14.. LO. En concreto, Jianli Liu et al. reporta estudios acerca del potencial de diferentes. O. microorganismos para metabolizar nicotina, dentro de estos se encuentra Pseudomonas. BI. putida que demostró una capacidad para metabolizar este alcaloide como una fuente de. AS. carbono y nitrógeno a razón de 3.0 g/l durante un periodo de 10 horas13 obteniéndose un. CI. mayor crecimiento para la mayor concetración, lo cual concuerda con el mayor. CI EN. crecimiento en función de la mayor concentración (1.5%) obtenido en este estudio, la cantidad de psilocibina suministrada en el medio en evaluación y su metabolismo en el trascurso de 12 horas sugiere a comparación del estudio anterior, que la psilocibina podría. DE. estar siendo metabolizada de forma más rápida.. CA. Pseudomonas putida logra metabolizar la nicotina, mediante la flavoproteína nicotina. TE. oxidorreductasa (NicA2), en los pasos siguientes actúan dos enzimas, la 6-hidroxi-Lnicotina oxidasa (6HLNO) y 6-hidroxi-D-nicotina oxidasa (6HDNO) quienes rompen el. IO. anillo de pirrolidona31 para obtener el carbono y nitrógeno, este anillo de pirrolidona. BL. presenta una gran similitud con uno de los anillos que conforman a la psilocibina, por lo. BI. cual surge la sospecha que enzimas similar producidas por P. putida que aún no han sido caracterizadas podrían actuar de forma similar para lograr la asimilación de la psilocibina. Estudios realizados por Sato F. y Kumagai H. describen la existencia de enzimas microbianas capaces de metabolizar aminoácidos aromáticos y aminas aromáticas, en. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. específico se menciona la presencia de una enzima aminoácido aromático descarboxilasa en Pseudomonas putida32, con la cual se rompen los anillos aromáticos para obtener el carbono y nitrógeno requerido por la célula, es así que este tipo de enzimas producidas por. AS. P. putida podrían estar relacionadas al proceso de asimilación de psilocibina.. IC. Craig D. et al. menciona el uso de diversos aminoácidos en el metabolismo de. G. Pseudomonas putida, sin embargo, el triptófano precursor de la psilocibina, fue evaluado y. LO. resultó que únicamente era efectivo como fuente de nitrógeno mas no como fuente de. O. carbono18, con respecto a este experimento se puede deducir que la psilocibina al conservar. BI. es el esqueleto base del triptófano, funciona como fuente de nitrógeno y además la. AS. presencia de fósforo y carbono en su conformación le da la capacidad de ser empleada para. CI. la captación de fósforo y carbono. Esto explicaría el mayor crecimiento al emplear. CI EN. psilocibina en comparación con la peptona como fuente convencional, además los grupos NH2 liberados luego de la ruptura de los anillos, constituirían una forma más asimilable de nitrógeno frente a la forma NH4 convencional, facilitando el paso a través de la membrana.. DE. El aporte de fósforo por parte de este compuesto también podría influir de manera. CA. importante sobre el crecimiento dado que constituye un aporte considerable para la. BI. BL. IO. TE. producción de energía con respecto al ATP en la cadena respiratoria.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIÓN. El crecimiento de Pseudomonas putida aumenta conforme aumentan las concentraciones. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. de psilocibina.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RECOMENDACIONES. Realizar un estudio con respecto a los principales elementos que aporta la psilocibina al ser metabolizada para determinar como influyen estos sobre el crecimiento de Pseudomonas. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. putida. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Nguyen TTN, Wallace HM, Xu CY, Van Zwieten L, Weng ZH, Xu Z, et al. The. AS. effects of short term, long term and reapplication of biochar on soil bacteria. Sci. IC. Total Environ. 2018; 636: 142-151.. G. 2. Zhang L, Li M, Li Q, Chen C, Qu M, Li M, et al. The catabolite repressor/activator,. LO. Cra, bridges a connection between carbon metabolism and host colonization in the. O. plant drought resistance-promoting bacterium Pantoea alhagi LTYR-11Z. Appl. BI. Environ Microbiol. 2018; 84 (13): e00054-18. doi: 10.1128/AEM.00054-18.. AS. 3. Maresca JA, Miller KJ, Keffer JL, Sabanayagam CR, Campbell BJ. Distribution. CI. and diversity of rhodopsin-producing microbes in the Chesapeake Bay. Appl. CI EN. Environ Microbiol. 2018; 84 (13): e00137-18. doi: 10.1128/AEM.00137-18. 4. Xingang Zhou, Zhilin Wang, Huiting Jia, Li Li, Fengzhi W. Continuously Monocropped. Jerusalem. Artichoke. Changed. Soil. Bacterial. Community. DE. Composition and Ammonia-Oxidizing and Denitrifying Bacteria Abundances.. CA. Front Microbiol. 2018; 9: 705. doi: 10.3389/fmicb.2018.00705. 5. Wang JJ, Yan AH, Wang W, Li JQ, Li YL. Screening, identification and. TE. phosphate-solubilizing characteristics of phosphate-solubilizing bacteria strain D2. IO. (Pantoea sp.) in rhizosphere of Pinus tabuliformis in iron tailings yard. Ying Yong. BL. Sheng Tai Xue Bao. 2016; 27 (11): 3705-3711.. BI. 6. Lourenço KS, Cassman NA, Pijl AS, van Veen JA, Cantarella H, Kuramae EE. Nitrosospira sp. Govern Nitrous Oxide Emissions in a Tropical Soil Amended With Residues. of. Bioenergy. Crop.. Front. Microbiol.. 2018;. 9:. 674.. doi:. 10.3389/fmicb.2018.00674.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 7. Cardinali F, Milanović V, Osimani A, Aquilanti L, Taccari M, Garofalo C, et al. Microbial dynamics of model Fabriano-like fermented sausages as affected by starter cultures, nitrates and nitrites. Int J Food Microbiol. 2018; 278: 61-72.. AS. 8. Martin SF. Natural Products and Their Mimics as Targets of Opportunity for Discovery. J Org Chem. 2017; 82 (20): 10757-10794.. G. IC. 9. Wang Y, Xie F, Lin B, Cheng M, Liu Y. Synthetic Approaches to Tetracyclic. LO. Indolines as Versatile Building Blocks of Diverse Indole Alkaloids. Chem Eur J.. O. 2018.10.1002/chem.201800775.. diversity. in. prenylated. indole. alkaloids. containing. the. AS. stereochemical. BI. 10. Klas KR, Kato H, Frisvad JC, Newmister SA, Fraley AE. Structural and. Rep. 2018; 35 (6): 532-558.. CI. bicycle[2.2.2]diazaoctane ring system from marine and terrestrial fungi. Nat Prod. CI EN. 11. Fricke J, Blei F, Hoffmeister D. Enzymatic Synthesis of Psilocybin. Angew Chem Int Ed Engl. 2017; 56 (40): 12352-12355.. DE. 12. Liu S, Qiu W, Zhang K, Zhou X, Ren B, He J, et al. Nicotine Enhances Interspecies Relationship between Streptococcus mutans and Candida albicans. Biomed Res. CA. Int. 2017; 2017: 7953920. doi: 10.1155/2017/7953920.. TE. 13. Liu J, Ma G, Chen T, Hou Y, Yang S, Zhang KQ, et al. Nicotine-degrading. IO. microorganisms and their potential applications. Appl Microbiol Biotechnol. 2015;. BL. 99 (9): 3775-3785.. BI. 14. Gao ZQ, Zhao DY, Xu L, Zhao RT, Chen M, Zhang CZ. Paraburkholderia caffeinitolerans sp. nov., a caffeine degrading species isolated from a tea plantation soil sample. Antonie Van Leeuwenhoek. 2016; 109 (11): 1475-1482. 15. Kejela T, Thakkar VR, Thakor P. Bacillus species (BT42) isolated from Coffea arabica L. rhizosphere antagonizes Colletotrichum gloeosporioides and Fusarium. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. oxysporum and also exhibits multiple plant growth promoting activity. BMC Microbiol. 2016; 16: 277. DOI 10.1186/s12866-016-0897-y. 16. Bao J, Wang J, Zhang XY, Nong XH, Qi SH. New Furanone Derivatives and. AS. Alkaloids from the Co-Culture of Marine-Derived Fungi Aspergillus sclerotiorum and Penicillium citrinum. Chem Biodivers. 2017; 14 (3): e1600327. doi:. G. IC. 10.1002/cbdv.201600327.. LO. 17. Hervás AB, Canosa I, Santero E. Regulation of glutamate dehydrogenase. O. expression in Pseudomonas putida results from its direct repression by NtrC under. BI. nitrogen-limiting conditions. Mol Microbiol. 2010; 78 (2): 305-319.. AS. 18. Daniels C, Godoy P, Duque E, Molia-Henares MA, de la Torre J, Del Arco JM, et al. Global Regulation of Food Supply by Pseudomonas putida DOT-T1E. J. CI. Bacteriol. 2010; 192 (8): 2169-2181.. CI EN. 19. Herrera MC, Daddaoua A, Fernandez-Escamilla A, Ramos JL. Involvement of the global Crp regulator in cyclic AMP-dependent utilization of aromatic amino acids. DE. by Pseudomonas putida. J Bacteriol. 2012; 194 (2): 406-412. 20. Wittgens A, Santiago-Schuebel B, Henkel M, Tiso T, Blank LM, Hausmann R, et. CA. al. Heterologous production of long-chain rhamnolipids from Burkholderia glumae. TE. in Pseudomonas putida-a step forward to tailor-made rhamnolipids. Appl Microbiol. IO. Biotechnol. 2018; 102 (3): 1229-1239.. BL. 21. Caulier S, Gillis A, Colau G, Licciardi F, Liépin M, Desoignies N, et al. Versatile. BI. Antagonistic Activities of Soil-Borne Bacillus spp. and Pseudomonas spp. against Phytophthora infestans and Other Potato Pathogens. Front Microbiol. 2018; 9: 143.. doi: 10.3389/fmicb.2018.00143.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 22. Li M, Guo R, Yu F, Chen X, Zhao H, Li H et al. Indole-3-Acetic Acid Biosynthesis Pathways in the Plant-Beneficial Bacterium Arthrobacter pascens ZZ21. Int J Mol Sci. 2018; 19 (2): 443. doi: 10.3390/ijms19020443.. AS. 23. Stringlis IA, Proietti S, Hickman R, Van Verk MC, Zamioudis C, Pieterse CMJ. Root transcriptional dynamics induced by beneficial rhizobacteria and microbial. G. IC. immune elicitors reveal signatures of adaptation to mutualists. Plant J. 2018; 93 (1):. LO. 166-180.. O. 24. Gartz J. Biotransformation of tryptamine derivatives in mycelial cultures of. BI. Psilocybe. J Basic Microbiol. 1989; 29 (6): 347-352.. AS. 25. Zhuk O, Jasicka-Misiak I, Poliwoda A, Kazakova A, Godovan VV, Halama M, et al. Research on acute toxicity and the behavioral effects of methanolic extract from. CI. psilocybin mushrooms and psilocin in mice. Toxins. 2015; 7 (4):1018-1029.. CI EN. 26. Roger Heim, Albert Hofmann, Artur Brack, Hans Kobel, Roger Cailleux; Sandoz Ltd, assignee. Obtaining psilocybin and psilocin from fungal material. United. DE. States Patent Office US 3,183,172. 1965 May 11. 27. Ito F, Tamiya T, Ohtsu I, Fujimura M, Fukumori F. Genetic and phenotypic of. CA. characterization. the. heat. shock. response. in. Pseudomonas. putida.. TE. Microbiologyopen. 2014; 3 (6): 922–936.. IO. 28. Civilini M, Domenis C, Sebastianutto N, de Bertoldi M. Nicotine decontamination. BL. of tobacco agro-industrial waste and its degradation by micro-organisms. Waste. BI. Manag Res. 1997; 15 (4): 349–358.. 29. Tang H, Wang L, Wang W, Yu H, Zhang K, Yao Y, et al. Systematic Unraveling of the Unsolved Pathway of Nicotine Degradation in Pseudomonas. PLoS Genet. 2013; 9 (10): e1003923. doi: 10.1371/journal.pgen.1003923.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 30. Sayqal A, Xu Y, Trivedi DK, AlMasoud N, Ellis DI, Rattray NJ, et al. Metabolomics Analysis Reveals the Participation of Efflux Pumps and Ornithine in the Response of Pseudomonas putida DOT-T1E Cells to Challenge with PLoS. One. 2016;. 11. (6):. e0156509.. doi:. AS. Propranolol.. 10.1371/journal.pone.0156509.. G. IC. 31. Tararina M A, Janda K D, Allen K N. Structural Analysis Provides Mechanistic. LO. Insight into Nicotine Oxidoreductase from Pseudomonas putida. Biochemistry.. O. 2016; 55(48): 6595-6598.. BI. 32. Sato F, Kumagai H, Microbial production of isoquinoline alkaloids as plant. AS. secondary metabolites based on metabolic engineering research. Proceedings of the. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. Japan Academy. Series B, Physical and biological sciences, 2013; 89(5): 165-82.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. ANEXOS. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. Anexo 1. P. cubensis, fase micelial en cultivo proporcionado por el laboratorio de Fitopatología de la Universidad Nacional de Trujillo.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. BL. IO. Anexo 2. Cepa de P. putida ATCC 12633. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. Anexo 3. Micelio de P. cubensis propagado en arroz integral. Anexo 4. Superficie colonizada por P. cubensis. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 5. Basidiocarpos inmaduros de P. cubensis. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. Anexo 6. Secado a 40°C durante 24 horas y pulverización de basidiocarpos de P. cubensis.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. Anexo 7. Purificación de la resina obtenida con éter de petróleo, cloroformo y etanol.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. evaporación del metanol. CI EN. Anexo 8. Psilocibina cristalizando en forma de agujas incoloras durante el transcurso de la. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Anexo 9. Conservación de la psilocibina obtenida.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. Anexo 10. Estandarización del inoculo de P. putida. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 11. Tratamientos empleados para la evaluación, en donde T1 corresponde a 0.5%,. BI. BL. IO. TE. CA. DE. T2 a 1.0% y T3 a 1.5% de psilocibina. Los experimentos se realizaron por triplicado. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 12. Análisis estadístico de comparación de medias mediante ANOVA, utilizando el programa estadístico informático IBM SPSS Statistics v. 25.0. ANOVA Crecimiento de P. putida cuadrados. gl. cuadrática. F. ,053. 3. ,018. Dentro de grupos. ,000. 8. ,000. Total. ,053. 11. Sig.. 21040,800. ,000. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. Entre grupos. AS. Media. IC. Suma de. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 13. Análisis estadístico de comparación de medias mediante HSD Tukey, utilizando el programa estadístico informático IBM SPSS Statistics v. 25.0. Comparaciones múltiples Variable dependiente: Crecimiento de P. putida HSD Tukey. AS. Intervalo de confianza al 95%. Desv.. medias (I-J). Error. Límite Sig.. 0.5%. .115000*. .000745 ,000. POSITIVO. 1.0%. -.033000*. 1.5%. -.058000*. CONTROL. -.115000*. 1.0%. -.148000*. 1.5%. -.173000*. CONTROL POSITIVO. CONTROL POSITIVO 0.5%. .000745 ,000. -.06039. -.05561. .000745 ,000. -.11739. -.11261. .000745 ,000. -.15039. -.14561. .000745 ,000. -.17539. -.17061. LO. .03061. .03539. .148000*. .000745 ,000. .14561. .15039. -.025000*. .000745 ,000. -.02739. -.02261. .058000*. .000745 ,000. .05561. .06039. .173000*. .000745 ,000. .17061. .17539. .025000*. .000745 ,000. .02261. .02739. DE. 1.0%. -.03061. .000745 ,000. CI EN. 1.5%. -.03539. .033000*. CI. 0.5% 1.5%. .000745 ,000. AS. 1.0%. .11739. BI. POSITIVO. superior. .11261. O. 0.5%. inferior. G. CONTROL. Límite. IC. (I) Concentraciones (J) Concentraciones. Diferencia de. BI. BL. IO. TE. CA. *. La diferencia de medias es significativa en el nivel 0.05.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Subconjuntos homogéneos. Crecimiento de P. putida HSD Tukeya Subconjunto para alfa = 0.05 3. CONTROL POSITIVO. 3. 1.0%. 3. 1.5%. 3. Sig.. 3. 4. .48067 .59567 .62867. IC. 0.5%. 2. AS. 1. .65367. 1,000. 1,000. 1,000. G. N. 1,000. LO. Concentraciones. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 3,000.. O. Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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