Validación del método analítico por espectrofotometríauv/vispara la cuantificación de risperidona en tabletas 2 mg

Texto completo

(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA. BI. O. Q. UI. M IC. A. ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA. Y. Validación del método analítico por. AC I. A. espectrofotometríaUV/VISpara la cuantificación de Risperidona. RM. en Tabletas 2 mg. TE CA. AUTORES:. DE. FA. TESIS I. BI BL IO. ESCOBAR VÁSQUEZ, GLADYS FIORELLA. SÁNCHEZ BENITES, EDSON DIEGO.. ASESOR:. Dr. ALVA PLASENCIA, PEDRO MARCELO. Trujillo - Perú 2013. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. M IC. A DIOS:. UI. Con todo nuestro amor y cariño, por darnos la. Q. oportunidad de vivir, por estar con nosotros en. BI. O. cada paso que damos, por fortalecer nuestro. Y. corazón e iluminar nuestra mente, porhacer. nuestros. y. la. de. nuestros. FA. queridos padres.. anhelos. RM. cumplir. AC I. A. posible la realización de este trabajo, por poder. BI BL IO. TE CA. DE. A Él con profundo agradecimiento y amor.. Escobar Vásquez, Gladys Fiorella. Sánchez Benites, Edson Diego.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) O. Q. UI. M IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. Nuestro sincero agradecimiento al Dr. Pedro por. su. generosa. Y. Plasencia. dirección,. A. Alva. RM. BI BL IO. TE CA. DE. FA. presente trabajo.. AC I. asesoramiento y consejos en la realización del. TESISTAS.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A mis Padres. ELÍ Y NOEMÍ, A quien les debo toda mi vida y han estado conmigo en todo momento, les agradezco el cariño y su comprensión, a ustedes quienes han sabido formarme. con. buenos. sentimientos,. hábitos. y. valores, lo cual me ha ayudado a salir adelante. M IC. A. buscando siempre el mejor camino. Gracias por darme una carrera para mi futuro y. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. por creer en mí, los quiero con todo mi corazón.. TE CA. A mis hermanos. LUPITA, JAVIER Y VANESSA.. BI BL IO. Ustedes. han. sido. un. motor. para. propósitos, gracias por su ayuda,. lograr. mis. fortaleza,. por. estar conmigo y apoyarme siempre, los quiero mucho.. Escobar Vásquez, Fiorella. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A mis padres. SEBASTIANA Y MANUEL Que me dieron la vida y han estado siempre conmigo. en. todo. momento.. Por. su. apoyo,. confianza y consejos, quienes con su dedicación y sacrificio hicieron posible la culminación de mis estudios y gracias por darme una carrera.. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. Los quiero mucho y este trabajo es por ustedes.. A mis Hermanos:. TE CA. Patricia, Eder, Kennyy Ángel.. BI BL IO. Por ser estímulo para mi superación y poder brindarles gratitud. lo a. mejor,. los. toda. mi. quiero. mucho.. familia. por. Mi su. incondicionalidad, aliento y generosidad.. Sánchez Benites, Edson. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) A. M IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. mis mejores amigos; con el cual compartí gran. Q. UI. parte de mi vida durante estos seis años de carrera,. BI. O. Les agradezco a todos ustedes el haber llegado a mi. A. Y. vida y compartir momentos felices y tristes, pero esos. AC I. momentos son los que nos hacen crecer y valorar a las. RM. personas que nos rodean, los quiero mucho y nunca. BI BL IO. TE CA. corazón.. DE. FA. los olvidaré. Recuerden que siempre los llevaré en mi. Escobar Vásquez, Gladys Fiorella. Sánchez Benites, Edson Diego.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. De acuerdo con las disposiciones legalesestablecidas en el reglamento de Grados en la Escuela de Pre Grado de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, presento a vuestra consideración y. MÉTODO. ANALÍTICO. UI. DEL. POR. Q. “VALIDACIÓN. M IC. A. elevado nivel de criterio profesional, el informe del trabajo Tipo I:. RM. AC I. A. Y. DE RISPERIDONA EN TABLETAS 2 mg”. BI. O. ESPECTROFOTOMETRÍA UV/VISPARA LA CUANTIFICACIÓN. FA. Es propicia esta oportunidad para ser extensivo nuestro más profundo sentimiento de agradecimiento a nuestra alma mater y a toda su plana. DE. docente que lo conforma, por su meritoria labor de educadores y por la. TE CA. formación profesional que nos han brindado a través de sus enseñanzas y. BI BL IO. experiencias. De manera muy especial agradecemos la valiosa colaboración de los señores miembros del jurado. Trujillo, Abril del 2013. . ESCOBAR VÁSQUEZ, FIORELLA. SÁNCHEZ BENITES, EDSON. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. JURADO EVALUADOR. M IC. A. Dr. Curo Vallejos, Yuri. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. PRESIDENTE. MIEMBRO. BI BL IO. TE CA. DE. FA. Dra. Marín Cacho, Fanny. Dr. Alva Plasencia, Pedro MIEMBRO. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE RESUMEN ........................................................................................................................ i ABSTRACT ..................................................................................................................... ii I.. INTRODUCCIÓN......................................................................................................1. II. OBJETIVOS ...............................................................................................................9 III. MATERIAL Y MÉTODO .........................................................................................9. M IC. A. MATERIAL ...........................................................................................................9 1.1.. Método Analítico. ...........................................................................................9. 1.2.. Material de estudio. .......................................................................................10. 1.3.. Material y equipo de laboratorio. ..................................................................10. Y. BI. O. Q. UI. 1.. AC I. A. MÉTODO .............................................................................................................11 SELECCIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO ...............................................11. 2.2.. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA: ..............................................................11. 2.3.. MODO OPERATIVO ...................................................................................11. 2.4.. VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO ............................................12. 2.5.. ANÁLISIS DE LOS DATOS .......................................................................23. TE CA. DE. FA. RM. 2.1.. BI BL IO. 2.. IV. RESULTADOS ........................................................................................................29 V. DISCUSIÓN .............................................................................................................33 VI. CONCLUSIONES....................................................................................................40 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................................41 ANEXO .........................................................................................................................44. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN La validación del método analítico es parte integral del sistema de control de calidad, puesto que confiere fiabilidad a los resultados analíticos obtenidos en un laboratorio de análisis, a fin de asegurar que un medicamento cumpla los parámetros de calidad establecidos. En este trabajo presentamos la validación de un método analítico para la Risperidona. en. tabletas. 2mg,. utilizando. la. técnica. A. de. de. M IC. cuantificación. UI. Espectrofotometría UV/VIS propuesta por los autores G. AlagumaniVasagam, A. Anton. O. Q. Smith, del Departamento de Farmacia de la Universidad de Annamalai en la India.Para. BI. el análisis de risperidona 2 mg en tabletas procedente de tres laboratorios farmacéuticos. A. Y. (Farmindustria, Medrock y Marfan) se utilizó como solvente metanol y se medió a una. AC I. longitud de onda de máxima absorbancia de 278 nm.Las muestras fueron sometidas a. RM. degradación ácida, alcalina, oxidación y termólisis, obteniendo una interferencia menor. FA. al 2%. El ensayo de linealidad del método presentó un coeficiente de correlación de. DE. 0.9998910. Para la exactitud; el porcentaje de recuperación fue de 99.65 %, para el de G. TE CA. de Cochran se obtuvo Gexp menor Gtablas (0.5330 < 0.6830) y para el ensayo estadístico t de student se obtuvo texp menor que ttabla (0.9028 < 2.1448), por lo que la exactitud es. BI BL IO. conforme según sus respectivas especificaciones. Para la repetibilidad del sistema se obtuvo un CV de 0.121%. Para la repetibilidad del método se obtuvo un CV de 0.250%. Para la precisión intermedia el CV entre un analista y el otro fue de 1.50%. Los parámetros de validación determinados permiten dar como validado al método analítico propuesto por los autores. Palabras clave: Espectrofotometría, Cuantificación, Risperidona, Metanol, Validación.. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT The analytical method validation is an integral part of the quality control system, since it gives reliability to the analytical results obtained in a laboratory, to ensure that a drug comply established equality parameters. We present the validation of an analytical method for quantification of 2 mg Risperidone tablets, using the technique of. A. spectrophotometry UV / VIS proposed by the authors G. Alagumanivasagam, A. Anton. M IC. Smith, Department of Pharmacy, Annamalai University in India.For the analysis of 2. Q. UI. mg Risperidone tablets from three pharmaceutical laboratories (Farmindustria, Marfan. BI. O. and Medrock) methanol was used as solvent and was measured at a wavelength of. Y. maximum absorbance of 278 nm.The samples were subjected to acid degradation,. AC I. A. alkaline oxidation and thermolysis, obtaining interference less than 2%. The linearity. RM. test method showed a correlation coefficient of 0.9998910. For accuracy, the recovery. FA. rate was 99.65%, for the Cochran's Gtable less than Gexp was obtained (0.5330 <0.6830). DE. and the Student t test statistic was obtained ttable less than texp (0.9028 <2.1448), for which accuracy complied according to their respective specifications. For the. TE CA. repeatability of the system CV of 0.121% was yielded. For the repeatability of the. BI BL IO. method CV of 0.250% was yielded. For intermediate precision CV between an analyst and the other was of 1.50%.The validation parameters determined lead to a validated analytical method proposed by the authors. Keywords: Spectrophotometry, Quantification, Risperidone, Methanol, Validation.. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I. INTRODUCCIÓN La industria farmacéutica, como segmento vital del sistema de asistencia de la salud, conduce la investigación, fabricación y comercialización de productos farmacéuticos y biológicos, así como dispositivos médicos usados para el tratamiento agudo o crónico y el diagnóstico de la enfermedad. La fabricación de. M IC. A. productos farmacéuticos, así como la de otros productos relacionados con el. UI. campo de la salud, es indispensable realizar una inspección completa al proceso. Q. de la producción aplicando normas establecidas a fin de garantizar al. A. Y. BI. O. consumidor que los productos que recibe son de buena calidad. 1,2. AC I. Los adelantos recientes en el descubrimiento de drogas, principalmente en el. RM. campo de la biotecnología y en los controles requeridos sobre los procesos de. FA. fabricación, están planteando nuevos desafíos al control de calidad y a los. DE. sistemas que operan internamente en la industria y que deben ajustarse a las. TE CA. normas establecidas.1. BI BL IO. La garantía de calidad y el control de calidad desarrollan y siguen procedimientos operativos internos convencionales encaminados a asegurar la calidad, la inocuidad, la pureza y la eficacia de la provisión de drogas. 1. El control de la calidad es parte de las Buenas Prácticas de Manufactura (BPM) y comprende el muestreo, especificaciones y ensayos como también a los procedimientos de organización, documentación y autorización que asegure que. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. los ensayos necesarios y pertinentes realmente se efectúen, y que no se permita liberación de los materiales, ni se autorice la venta o suministro de los productos, hasta que su calidad haya sido aprobada como satisfactoria, el control de la calidad no se limita a las operaciones de laboratorio, sino que debe estar presente. A. en todas las decisiones concernientes a la calidad del producto. 2. M IC. El control de calidad dentro de una organización tiene varias funciones. Q. UI. principales: pruebas analíticas de laboratorio de los productos, muestreo,. O. inspección, y pruebas de la materia prima entrante, componentes del empaque, y. Y. BI. el prospecto (inspección física del producto y de las operaciones intermedias. AC I. A. criticas) y control del producto a lo largo de su distribución. Deben de existir especificaciones detalladas y métodos de prueba convalidados con los que se. DE. FA. RM. evalúen los productos y la materia prima. 1. La validación de un procedimiento analítico es el proceso que establece,. TE CA. mediante estudios en laboratorio que las características de desempeño del. BI BL IO. procedimiento cumplen los requisitos para las aplicaciones analíticas previstas. El objetivo de la validación no es comparar un método con otro ya existente, sino conocer mejor sus características. Los estudios de validación constituyen una parte esencial de las BPM, deben efectuarse conforme a protocolos definidos de antemano. Debe prepararse y archivarse un reporte escrito que resuma los resultados y las conclusiones registrados. Deben establecerse procesos y procedimientos sobre la base de un estudio de validación. Los cuales se sometan periódicamente a una revalidación para asegurar que con ellos se. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. puedan seguir obteniendo los resultados deseados. Se debe prestar especial atención a la validación de los procedimientos de proceso, limpieza y de los métodos analíticos. 2,3. La validación de un método analítico puede definirse como un paso crítico cuyo. A. propósito es asegurar su calidad o validez. La utilización de un método analítico. M IC. permite cuantificar el producto mayoritario en forma de materia prima o como. Q. UI. ingrediente activo de una formulación. Para asegurar confiabilidad, los métodos. O. analíticos se someten a un proceso de validación. Mediante un proceso de. Y. BI. validación, ya sea de carácter prospectivo, retrospectivo o de revalidación, se. AC I. A. comprueba si el método es lo suficientemente confiable y si los resultados. FA. RM. previstos se obtienen dentro de las condiciones prefijadas. 3-5. DE. La validación de los métodos analíticos se fundamenta en la determinación de diversos parámetros, que se aplican de acuerdo con la categoría a la que. BI BL IO. TE CA. pertenezcan. 3-5. Las categorías de prueba más habituales para las que se exigen datos de validación según la Farmacopea de los Estados Unidos de América (USP 35) y la. International Conference on Harmonisation (ICH) son: Categoría I,. procedimientos analíticos para la cuantificación de los componentes principales de fármacos a granel o ingredientes activos (incluyendo conservantes) en productos farmacéuticos terminados.Categoría II,procedimientos analíticos para la determinación de impurezas en fármacos a granel o productos de degradación. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. en productos farmacéuticos terminados. Estos procedimientos incluyen análisis cuantitativos y pruebas de límite.Categoría III, procedimientos analíticos para la determinación de las características de desempeño (p.ej. disolución, liberación de fármacos, etc.). Categoría IV, Pruebas de identificación. Para cada categoría, se requiere diferente información analítica. En la siguiente tabla se indican los. M IC. A. datos que normalmente se requieren para cada una de estas.5,6. Q. UI. Los procedimientos de ensayo están destinados a medir el analito presente en. O. una muestra dada. El ensayo representa una medición cuantitativa del. Y. BI. componente principal en la sustancia farmacológica. Las características de. AC I. A. validación también pueden aplicarse a los ensayos asociados con otros. FA. RM. procedimientos analíticos (por ejemplo, disolución).. DE. El objetivo del procedimiento analítico debe entenderse claramente desde esta regirá las características de validación que necesitan ser evaluadas. Los. TE CA. parámetros que son objeto de estudio en el presente trabajo pertenecen a la. BI BL IO. categoría I y se clasifican como métodos analíticos para la cuantificación de los principales componentes del fármaco, o de los principios activos en productos farmacéuticos terminados. Las características típicas de validación que deben tenerse en cuenta según la USP 35 y la ICH son las siguientes: 5,6,14. La exactitud de un procedimiento analítico es la proximidad entre los resultados de la prueba obtenidos mediante ese procedimiento y el valor verdadero, o un valor de referencia y el valor encontrado.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La precisión de un procedimiento analítico expresa el grado de concordancia (grado de dispersión) entre los resultados de las pruebas individuales cuando se aplica el procedimiento repetidamente a múltiples muestreos de una muestra homogénea en las condiciones prescritas. La precisión de un procedimiento. A. analítico se expresa normalmente como la varianza, la desviación estándar o el. en. tres. niveles:. repetibilidad,. intermedia. y. Y. BI. O. Q. reproducibilidad. 6. precisión. UI. considerado. M IC. coeficiente de variación de una serie de mediciones. La precisión puede ser. AC I. A. La repetibilidad,expresa la precisión bajo las mismas condiciones de operación. RM. durante un corto intervalo de tiempo. La repetibilidad se denomina también. FA. intra-ensayo de precisión.La precisión intermedia, se expresa dentro de los. TE CA. diferentes, etc.. DE. laboratorios de variaciones: diferentes días, diferentes analistas, equipos. BI BL IO. La linealidadde un procedimiento analítico es su capacidad (dentro de un rango dado) para obtener resultados de prueba, que son directamente proporcionales a la concentración (cantidad) del analito en la muestra, ya sea por medio de una transformación matemática.4,6,14 La especificidadse define como la capacidad de un método analítico para medir exacta y específicamente el analito sin interferencias de impurezas, productos de degradación o excipientes que pueden estar presentes en la muestra. La evaluación de este parámetro es especialmente importante en el caso de los. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. métodos analíticos diseñados para la cuantificación del analito en formulaciones y en estudios de estabilidad.4,14. El intervalo de un procedimiento analítico es la amplitud entre la concentración inferior y superior (cantidades) de analito en la muestra (incluyendo estas. A. concentraciones). En la cual se puede determinar al analito con un nivel. M IC. adecuado de precisión., exactitud y linealidad utilizando el procedimiento según. O. Q. UI. se describe. 5,6,14. Y. BI. La investigación de los últimos tiempos está apoyada y facilitada por los. AC I. A. métodos instrumentales y de análisis; los cuales entre sus diversas ventajas,. RM. incluyen el hecho de requerir cantidades de muestra cada vez más reducidas, así como también la rapidez con que se realizan los procedimientos de cálculos. DE. FA. mediante computadoras. 7. TE CA. Muchos son los métodos analíticos utilizados para cuantificar principios activos. BI BL IO. usados en la fabricación de medicamentos, desde los más sofisticados y costosos (HPLC, espectrometría de masa), hasta los más rápidos y baratos (volumetría y espectrofotometría UV/VIS).La espectrofotometría de absorción es una de ellas y tiene como principio básico, la medida de la radiación que llega a un detector tras producirse un fenómeno de absorción de luz por parte de una sustancia absorbente. El espectrofotómetro mide la intensidad de luz que pasa a través de una muestra, y la compara con la intensidad de luz antes de pasar a través de la muestra. 7. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los métodos espectrofotométricos son mucho más baratos, accesibles y de uso factible en nuestro medio, siempre y cuando se enmarquen en las normativas de calidad existentes.. A. Por otro lado en el país existen una gran cantidad de medicamentos multifuentes. M IC. que si bien sabemos son elaborados bajo las normas BPM estas no. UI. convenientemente aseguran la calidad terapéutica de los medicamentos,. Y. BI. O. Q. existiendo en nuestra población cierta duda de su eficacia. 7. AC I. A. En la India, SravanKumar M. y col, desarrollaron un método analítico por espectrofotometría UV/VIS para la cuantificación de Risperidona, método que. DE. FA. RM. es necesario validarlo para su posible utilización en nuestro medio. 8. La estabilidad de un medicamento puede verse afectada por diversos factores. TE CA. como son las condiciones ambientales como: luz, humedad, temperatura y aire,. BI BL IO. factores intrínsecos a la fabricación: tamaño de partícula, pH, naturaleza del envase y presencia de otros productos químicos procedentes de contaminación. La risperidona pertenece a la clase química de benzisoxazol y derivados, químicamente es 4-(2-(4-(6-Flurobenzo[d] isoxazd-3-il]-1-piperidil]etil]-3-metil2,6-diazabiciclo deca-1,3-dien-5-ona con la fórmula molecular C23H27FN4O2. Es un agente antipsicótico, que actúa a través del antagonismo selectivo de los receptores de serotonina 5HT2, receptores D2 de dopamina, que se utilizan en el tratamiento de la esquizofrenia y otras psicosis. Se metaboliza principalmente. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. por hidroxilación alicíclica y N-desalquilación oxidativa. La risperidona es soluble en HCl 0,1 N y metanol e insoluble en NaOH y acetonitrilo.8,9,16. Por todo lo mencionado anteriormente es que se decidió investigar la Validación del método analítico por espectrofotometría UV/VIS Visible para la. A. cuantificación de Risperidona en Tabletas 2 mg, investigación cuyos resultados. M IC. servirán como propuesta para realizar ensayos de cuantificación de este principio. Q. UI. activo en tabletas que se comercializan en nuestro país, para evaluar su. Y. BI. O. característica cuantitativa; por lo que se nos planteó el siguiente problema.. con. los. criterios. de. Validación. el. método. analítico. por. FA. ¿Cumple. RM. AC I. A. PROBLEMA. DE. espectrofotometría UV/VIS para la cuantificación de Risperidona en Tabletas 2. BI BL IO. TE CA. mg?. HIPÓTESIS. Considerando las características fisicoquímicas de Risperidona en lo que se refiere a estabilidad y absortividad a la longitud de onda establecida podemos. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. decir que el método analítico Espectrofotométrico UV/VIS para la cuantificación de Risperidona en Tabletas 2 mg si cumple con los criterios de validación.. II. OBJETIVOS. M IC. A. GENERAL. Q. Y. BI. O. cuantificación de Risperidona en Tabletas 2 mg.. UI.  Validar el Método Analítico Espectrofotométrico UV/VIS empleado para la. RM. AC I. A. ESPECÍFICOS. FA.  Determinar los parámetros de validación: linealidad, exactitud, precisión,. DE. especificidad y rango; del Método Analítico Espectrofotométrico UV/VIS. TE CA. para la cuantificación de Risperidona en Tabletas 2 mg.. BI BL IO.  Evaluar los parámetros de validación mencionados para establecer si cumple con lo establecido por los criterios de validación de acuerdo a la USP 35.. III. MATERIAL Y MÉTODO 1. MATERIAL: 1.1. Método Analítico.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Propuesta por los autores G. AlagumaniVasagam, A. Anton Smith, del Departamento de Farmacia de la Universidad de Annamalai en la India.8 1.2. Material de estudio.  30 Tabletas de Risperidona 2mg de tres laboratorios farmacéuticos, con. A. números de lote 10102743, 1791011, 4105141.. M IC. 1.3. Material y equipo de laboratorio.. O.  Estándar secundario de Risperidona. Q. UI. 1.2.1. Estándar.. Y. RM. 1.2.2. Material de vidrio.. AC I. A. Potencia tal cual: 100.23%. BI. Lote: 11903955. DE. 1.2.3. Solvente.. FA.  De uso común en el laboratorio.. TE CA.  Metanol p.a.. BI BL IO. 1.2.4. Reactivos..  Ácido clorhídrico p.a.  Peróxido de Hidrogeno 3% p/v.  Hidróxido de sodio p.a.. 1.2.5. Equipos:  Balanza analítica OHAUS GA-200  Espectrofotómetro UV/VIS visibleGenesys. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Lámpara UV-Vis  Refrigeradora  Sonicador  Cámara Climática 2. MÉTODO. A. 2.1. SELECCIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO. M IC. Se realizó una búsqueda bibliográfica de métodos que utilicen la. A. Y. 2.2. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA:. BI. O. Q. UI. espectrofotometría para cuantificar risperidona.. AC I. Las muestras a analizar se obtuvieron de oficinas farmacéuticas del. DE. FA. RM. Distrito de Trujillo, elegidas al azar.. TE CA. 2.3. MODO OPERATIVO 2.3.1. MÉTODO. ANALÍTICO. POR. ESPECTROFOTOMETRÍA. BI BL IO. UV/VIS CONDICIONES ESPECTROFOTOMÉTRICAS: Equipo: Espectrofotómetro UV/VIS Genesys. Celda: 10 mm. Blanco: Metanol. 2.3.2. DETERMINACIÓN. DE. LA. LONGITUD. DE. MÁXIMA. ABSORBANCIA ( λmáx )8. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se pesó 100 mg de Risperidona estándar, luego se llevó a una fiola de 100 mL y se adicionó 50 mL de metanol para disolver, luego se aforar. A partir de esta solución se preparó una dilución de concentración final de 40 µg/mL, para lo cual se tomó 2,0 mL de la solución anterior y se llevó a una fiola de 50 mL y luego se aforó. A. A. continuación se procedió a realizar una búsqueda de la longitud de. M IC. onda de mayor absorbancia, entre los rangos de 200 a 600 nm.. Q. UI. 2.3.3. PREPARACIÓN DE LA SOLUCION STOCK8. BI. O. Se pesó 100 mg de Risperidona estándar, luego se llevó a fiola de 100. Y. mL, posteriormente se adicionó 50 mL de metanol para disolver y. AC I. A. luego se aforó para obtener una concentración final de 1 mg/mL.. RM. 2.3.4. PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE LA MUESTRA8. FA. Se determinó el peso promedio de las 30 tabletas de Risperidona de 2. DE. mg, seguidamente todas las tabletas se trituraron en un mortero y se. TE CA. pesó un equivalente a 50 mg de principio activo, posteriormente se transfirió a una fiola de 50 mL, luego se añadió 20 mL de metanol. BI BL IO. para disolver, se sonicó por 15 min, se aforópara obtener una concentración final de 1mg/mL. Luego se filtró la solución en papel filtro watman n° 40.. 2.4. VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.4.1. LINEALIDAD. 7,12 LINEALIDAD DEL ESTÁNDAR: Se preparó 5 disoluciones estándar de Risperidona estándar, en un intervalo de 80, 90, 100, 110 y 120 % de la concentración de la disolución de referencia (40 µg/mL).. M IC. A. Estándar al 80%: De la Solución de referencia (ver punto 2.3.3) se. UI. sacó 1.6 mL y se llevó a una fiola de 50 mL, se completó el volumen. O. Q. con metanol para obtener una concentración final de 32 µg/mL. Se. BI. realizó la lectura de la solución en espectrofotómetro UV visible a. A. Y. 278 nm, empleando como blanco metanol y se realizó 3 lecturas de. RM. AC I. cada muestra.. FA. Estándar al 90%: De la Solución de referencia (ver punto 2.3.3) se. DE. sacó 1.8 mL y se llevó a una fiola de 50 mL, se completó el volumen con metanol para obtener una concentración final de 36 µg/mL. Se. TE CA. realizó la lectura de la solución en espectrofotómetro UV visible a. BI BL IO. 278 nm, empleando como blanco metanol y se realizó 3 lecturas de cada muestra. Estándar al 100%: De la Solución de referencia (ver punto 2.3.3) se sacó 2.0 mL y se llevó a una fiola de 50 mL, se completó el volumen con metanol para obtener una concentración final de 40 µg/mL. Se realizó la lectura de la solución en espectrofotómetro UV visible a 278 nm, empleando como blanco metanol y se realizó 3 lecturas de cada muestra.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Estándar al 110%: De la Solución de referencia (ver punto 2.3.3) se sacó 2.2 mL y se llevó a una fiola de 50 mL, se completó el volumen con metanol para obtener una concentración final de 44 µg/mL. Se realizó la lectura de la solución en espectrofotómetro UV visible a 278 nm, empleando como blanco metanol y se realizó 3 lecturas de. M IC. A. cada muestra.. UI. Estándar al 120%: De la Solución de referencia (ver punto 2.3.3) se. Q. sacó 2.4 mL y se llevó a una fiola de 50 mL, se completó el volumen. BI. O. con metanol para obtener una concentración final de 48 µg/mL. Se. A. Y. realizó la lectura de la solución en espectrofotómetro UV visible a. AC I. 278 nm, empleando como blanco metanol y se realizó 3 lecturas de. FA. RM. cada muestra.. DE. 2.4.2. ENSAYO DE EXACTITUD: 5,6,10,11. TE CA. Para la evaluación de este parámetro, se pesó cantidades conocidas. BI BL IO. de la muestra a diferentes niveles de concentración, se analizó las muestras según el método a validar y finalmente se calculó el porcentaje recuperado. Las muestras se trabajaron a cinco niveles de concentraciones diferentes 80, 90, 100, 110 y 120% de la concentración de trabajo (40 µg/mL), y se realizaron tres determinaciones repetidas de cada concentración. Preparación de las muestras:. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Estándar al 80%: Se pesó un equivalente a 1.6 mg de Risperidona (calculado a partir del peso promedio de las tabletas), luego se llevó a una fiola de 50 mL, se añadió 20 mL de metanol para disolver. Se sonicó por 15 miny secompletó el volumen con metanol para obtener una concentración final de 32 µg/mL.Posteriormente se filtró la. A. solución en papel filtro watman n° 40. Se realizó la lectura del. M IC. filtrado en espectrofotómetro UV visible a 278 nm, empleando como. Q. UI. blanco metanol y se realizó 3 lecturas de cada muestra.. BI. O. Estándar al 90%: Se pesó un equivalente a 1.8 mg de Risperidona. A. Y. (calculada a partir del peso promedio de las tabletas), luego se llevó. AC I. a una fiola de 50 mL, se añadió 20 mL de metanolpara disolver. Se. RM. sonicó por 15 min y se completóel volumen con metanol para. FA. obtener una concentración final de 36 µg/mL. Posteriormente se. DE. filtró la solución en papel filtro watman n° 40. Se realizó la lectura. TE CA. del filtrado en espectrofotómetro UV visible a 278 nm, empleando. BI BL IO. como blanco metanol y se realizó 3 lecturas de cada muestra. Estándar al 100%: Se pesó un equivalente a 2.0 mg de Risperidona (calculada a partir del peso promedio de las tabletas), luego se llevó a una fiola de 50 mL, se añadió 20 mL de metanolpara disolver. Se sonicó por 15 min y se completóel volumen con metanol para obtener una concentración final de 40 µg/mL. Posteriormente se filtró la solución en papel filtro watman n° 40. Se realizó la lectura. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. del filtrado en espectrofotómetro UV visible a 278 nm, empleando como blanco metanol y se realizó 3 lecturas de cada muestra. Estándar al 110%:Se pesó un equivalente a 2.2 mg de Risperidona (calculada a partir del peso promedio de las tabletas), luego se llevó a una fiola de 50 mL, se añadió 20 mL de metanolpara disolver. Se. M IC. A. sonicó por 15 min y se completóel volumen con metanol para. UI. obtener una concentración final de 44 µg/mL. Posteriormente se. Q. filtró la solución en papel filtro watman n° 40. Se realizó la lectura. BI. O. del filtrado en espectrofotómetro UV visible a 278 nm, empleando. AC I. A. Y. como blanco metanol y se realizó 3 lecturas de cada muestra. Estándar al 120%:Se pesó un equivalente a 2.4 mg de Risperidona. RM. (calculada a partir del peso promedio de las tabletas), luego se llevó. FA. a una fiola de 50 mL, se añadió 20 mL de metanolpara disolver. Se. DE. sonicó por 15 min y se completóel volumen con metanol para. TE CA. obtener una concentración final de 48 µg/mL. Posteriormente se. BI BL IO. filtró la solución en papel filtro watman n° 40. Se realizó la lectura del filtrado en espectrofotómetro UV visible a 278 nm, empleando como blanco metanol y se realizó 3 lecturas de cada muestra.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.4.3. ENSAYO DE PRECISIÓN6,12 Se evaluará en términos de Repetibilidad y Precisión Intermedia REPETIBILIDAD: A. REPETIBILIDAD DEL SISTEMA: Para este parámetro se trabajó con el estándar a la concentración de referencia (40. M IC. A. µg/mL) y se determinó 10 veces la misma muestra de forma. UI. consecutiva por el mismo analista y el mismo instrumento, en un. BI. O. Q. corto intervalo de tiempo.. A. Y.  Preparación del Estándar:Se pesó2.0 mg de Risperidona. AC I. estándar y se colocó en una fiola de 50 mL, se agregó 25 mL. RM. de metanol para diluir y posteriormente se aforó.Se realizó la. FA. lectura de la solución en espectrofotómetro UV visible a 278. TE CA. DE. nm, empleando como blanco metanol.. B. REPETIBILIDAD DEL MÉTODO:Para este parámetro se. BI BL IO. trabajó a partir de un pool hecho con las muestras a analizar, se prepararon 9 muestras individuales de concentración aproximada al 100% (40 µg/mL). Se evaluó por el mismo analista y el mismo instrumento, en un corto intervalo de tiempo..  Preparación del Estándar: Se pesó aproximadamente 2.0 mg de la muestra a partir del peso promedio de las tabletas, se colocó en fiolas de 50 mL, se agregó 25 mL de metanol para. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. diluir. Se sonicó por 15 min y se completóel volumen con metanol para obtener una concentración final de 40 µg/mL.Luego se filtró la solución en papel filtro watman n° 40. Se realizó la lectura del filtrado en espectrofotómetro UV. A. visible a 278 nm, empleando como blanco metanol. M IC. PRECISIÓNINTERMEDIA: El análisis se realizó por 2 analistas. Q. UI. en días diferentes. Igual que en la repetibilidad se preparó 2 muestras. O. al 100% (40 µg/mL) (ver punto 2.3.4) en cada día. Se realizó la. Y. BI. lectura de la solución en espectrofotómetro UV visible a 278 nm,. AC I. A. empleando como blanco metanol y se realizó 3 lecturas de cada. RM. muestra.. DE. FA. 2.4.4. ENSAYO DE ESPECIFICIDAD. 6,7 Para evaluar la inalterabilidad se sometió a situaciones de estrés. TE CA. tales como: Degradación ácida, degradación alcalina, oxidación y. BI BL IO. termólisis, se contrastó con el estándar al 100 % para expresar el resultado en función del porcentaje de interferencia.. 2.4.4.1. EVALUACIÓN DEL PRINCIPIO ACTIVO. 13 Se sometió al analito a situaciones de estrés como: degradación ácida, degradación alcalina, fotolisis, oxidación y termólisis. Estás. pruebas. se. realizaron. en. las. condiciones. espectrofotométricas de λmáx encontrada.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A. Preparación del Estándar a Condiciones Normales Se preparó 100 mL de solución estándar, para lo cual se pesó 100 mg de Risperidona estándar, luego se llevóa fiola de 100 mL y se adicionó 50 mL de metanol para disolver, luego se aforó. De esta solución se sacó 2 mL y transferir a una fiola. A. de 50 mL y se completó el volumen con metanol.Se realizó la. M IC. lectura de la solución en espectrofotómetro UV visible a 278. Q. UI. nm, empleando como blanco metanol y se realizó 3 lecturas. AC I. B. Degradación Acida. A. Y. BI. O. de la solución.. RM. De la Solución stock (ver punto 2.3.3) se midió 2 mL y se. FA. llevó a fiola de 50 mL, se agregó 5 mL de Ácido Clorhídrico. DE. 0.1 N, se enrasó con metanol y se homogenizo.Se realizó la. TE CA. lectura de la solución en espectrofotómetro UV visible a 278. BI BL IO. nm y se realizó 3 lecturas de la solución.. C. Degradación Alcalina De la Solución stock (ver punto 2.3.3)se midió 2 mL y se llevó a fiola de 50 mL, se agregó 5 mL de Hidróxido de Sodio 0.1 N, se enrasó con metanol y se homogenizo.Se realizó la lectura de la solución en espectrofotómetro UV visible a 278 nm y se realizó 3 lecturas de la solución.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. D. Oxidación De la Solución stock (ver punto 2.3.3) se midió 2 mL y se llevó a fiola de 50 mL, se agregó5 mL de Peróxido de hidrogeno 3% p/v, se enrasó con metanol y se homogenizo.Se realizó la lectura de la solución en espectrofotómetro UV. M IC. A. visible a 278 nm y se realizó 3 lecturas de la solución.. UI. E. Termólisis. Q. Se pesó 2 mg de Risperidona estándar, se llevó a estufa a. BI. O. temperatura de 65 °C por 6 horas. Luego se llevó a fiola de. Y. 50 mL, se enrasó con metanol y se homogenizo.. AC I. A. Posteriormente se realizó la lectura de la solución en. RM. espectrofotómetro UV visible a 278 nm y se realizó 3 lecturas. TE CA. DE. FA. la solución.. BI BL IO. 2.4.4.2. EVALUACIÓN DE LA FORMA FARMACÉUTICA Se sometió a situaciones de estrés como: Degradación ácida, degradación alcalina, oxidación y termólisis. Estás pruebas se realizaron en las condiciones espectrofotométricas de λmáx encontrada. A. Preparación de la Muestra a Condiciones Normales Se pesó un equivalente a 2 mg de Risperidona (calculada a partir del peso promedio de las tabletas), posteriormente se. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. transfirió a una fiola de 50 mL, luego se añadió 20 mL de metanol para disolver, se sonicó por 15 min, luego se aforó.Se filtró la solución en papel filtro watman n° 40. Se realizó la lectura del filtrado en espectrofotómetro UV visible a 278 nm, empleando como blanco metanol y se realizó 3. UI. M IC. A. lecturas de la muestra.. O. Q. B. Degradación Acida. BI. Del filtrado de la Solución de la muestra (ver punto 2.3.4) se. A. Y. midió 2 mL y se llevó a fiola de 50 mL, se agregó 5 mL de. AC I. Ácido Clorhídrico 0.1 N, se enrasó con metanol y se. RM. homogenizo.Se realizó la lectura de la solución en. FA. espectrofotómetro UV visible a 278 nm y se realizó 3 lecturas. BI BL IO. TE CA. DE. de la solución.. C. Degradación Alcalina Del filtrado de la Solución de la muestra (ver punto 2.3.4)se midió 2 mL y se llevó a fiola de 50 mL, se agregó 5 mL de Hidróxido de Sodio. 0.1 N, se enrasó con metanol y se. homogenizo.Se realizó la lectura de la solución en espectrofotómetro UV visible a 278 nm y se realizó 3 lecturas de la solución.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. D. Oxidación Del filtrado de la Solución de la muestra (ver punto 2.3.4) se midió 2 mL y se llevó a fiola de 50 mL, se agregó 5 mL de Peróxido de hidrogeno 3% p/v, se enrasó con metanol y se homogenizo.Se realizó la lectura de la solución en. A. espectrofotómetro UV visible a 278 nm y se realizó 3 lecturas. O. Q. UI. M IC. de la solución.. BI. E. Termólisis. A. Y. Se pesó un equivalente a 2 mg de Risperidona (calculada a. AC I. partir del peso promedio de las tabletas), se llevó a estufa a la. RM. temperatura de 65 °C por 6 horas.Luego se llevó a una fiola. FA. de 50 mL, se añadió 20 mL de metanol para disolver, se. DE. sonicó por 15 min, luego se aforó. Se filtró la solución en. TE CA. papel filtro watman n° 40. Posteriormente se realizó la lectura. BI BL IO. del filtrado en espectrofotómetro UV visible a 278 nm y se realizó 3 lecturas de la muestra.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.5. ANÁLISIS DE LOS DATOS.14 2.6.1.. ANÁLISIS ESTADISTICO Las datos obtenidos sesometieron a análisis estadístico de regresión lineal, t - Student y ANOVA con un nivel de significancia del 5%.( =. A. 0.05) y se mostraron aplicando tablas y gráficas.. M IC. 2.6.1.1. EVALUACIÓN ESTADÍSTICA DE LA LINEALIDAD. Q. UI. 2.6.1.1.1. COEFICIENTE DE CORRELACIÓN (r):. O. ∑ ∑. BI. ∑. Y. ∑. ∑. ∑. A. ∑. AC I. Dónde:. RM. x= concentración. y= Absorbancias.. DE. FA. n= números de análisis realizados.. TE CA. Criterios de aceptación: r mayor a 0.999. BI BL IO. 2.6.1.1.2. COEFICIENTE DE DETERMINACIÓN (r2). r2= (r)2 Criterios de aceptación: r2 mayor a 0.999. 2.6.1.1.3. t EXPERIMENTAL DE r. | |. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Criterios de aceptación: texp(r) mayor a t tabla para n-2 grados de libertad y una probabilidad de 95% (α=0.05) de correlación entre x e y.. 2.6.1.1.4. DESVIACIÓN. ESTÁNDAR. RELATIVA. O. A. COEFICIENTE DE VARIACIÓN DE LOS FACTORES. UI. M IC. DE RESPUESTA (CVFR). AC I. A. Y. BI. O. Q. Factores de respuesta (f). RM. En una calibración lineal los factores de respuesta son. FA. semejantes entre sí, por este motivo se considera el CVFR.. BI BL IO. TE CA. DE. Hallar según formula:. Dónde: Sf= Desviación estándar de los factores de respuesta. F= Promedio de los factores de respuesta.. Criterios de aceptación: menor 2%. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.6.1.1.5. t EXPERIMENTAL DE LA PENDIENTE (b) | |. Criterios de aceptación: texp(b) mayor a t tablas, para n-2 grados de libertad y una probabilidad de 95% (α=0.05) que b es. O. Q. UI. Límites de confianza de la pendiente. M IC. A. diferente de cero.. Y. BI. Estos límites incluyen al punto cero.. AC I. A. Dónde:. b = Coeficiente de regresión.. FA. RM. Sb = Desviación estándar de la pendiente. DE. 2.6.1.1.6. t EXPERIMENTAL DE TÉRMINO INDEPENDIENTE. BI BL IO. TE CA. (a). | |. Criterios de aceptación: texp(a) mayor a t tablas, para n-2 grados de libertad y una probabilidad de 95% (α=0.05) que b es diferente de cero. Límites de confianza de término independiente. Estos límites incluyen al punto cero.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Dónde: a= Termino independiente de la recta Sa = Erros estándar del término independiente. S2a = Varianza del independiente 2.6.1.2. EVALUACIÓN ESTADÍSTICA DE LA PRECISIÓN ESTÁNDAR. RELATIVA. BI. O. Q. UI. M IC. COEFICIENTE DE VARIACIÓN (RSD).. O. A. 2.6.1.2.1. DESVIACIÓN. RM. AC I. 3% (reproducibilidad). A. Y. Criterios de aceptación: Máximo 2% (repetibilidad), Máximo. FA. DE. Dónde:. √. S= Desviación estándar. TE CA. x= Promedio de concentraciones halladas. BI BL IO. 2.6.1.3. EVALUACIÓNESTADÍSTICA DE LA EXACTITUD 2.6.1.3.1. PORCENTAJE DE RECUPERACIÓN (r) ∑. Donde: R1 = % de recuperación individual = % de recuperación = % hallado x 100/ % agregado n = Número de análisis realizados Criterios de aceptación: 98- 102. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.6.1.3.2. tEXPERIMENTAL DEL VALOR MEDIO. |100. |. √. Dónde: R= Porcentaje de recuperación. M IC. A. RSD= Desviación estándar relativa de los valores hallados en. O. Q. UI. los análisis realizados. BI. Criterios de aceptación: texp menor a t. tablas,. para n-1 grados. A. Y. de libertad y una probabilidad del 95% (α= 0.05) que los. AC I. valores y el valor considerado verdadero estadísticamente son. FA. RM. iguales.. (TEST. DE. COCHRAN. DE. DE. 2.6.1.3.3. GEXPERIMENTAL. BI BL IO. TE CA. IGUALDAD DE VARIANZAS) á. Donde: S2maximo = (máxima desviación estándar hallada) S21, S22 y S23 =desviación estándar halladas de cada grupo de concentraciones.. Criterios de aceptación: Gexp< Gtablas. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Gexp<Gtablaspara un 95% de probabilidad (α=0.05), 5 grupos de concentraciones (K=5; 80%, 90%, 100%, 110%, 120%) y 3 repeticiones por grupo (n=3), de que el factor de concentración influirá en la variabilidad de los resultados.. M IC. A. 2.6.1.4. EVALUACIÓN DEL RANGO:. Q. UI. El establecimiento de este parámetro se realizó después de la. BI. O. evaluación de la linealidad, precisión y exactitud, de cumplirse. Y. con las especificaciones para estos parámetros se establece que el. AC I. A. método de análisis funciona correctamente en los extremos. BI BL IO. TE CA. DE. FA. concentración.. RM. superior e inferior de rango. Así como dentro de ese intervalo de. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. RESULTADOS CUADRO. N°01: Especificidad delmétodoanalíticoparalacuantificación de Risperidona2 mg Tabletas – Evaluación del Principio Activo (Estándar) VALOR ACEPTABLE. PORCENTAJE DE INTERFERENCIA. Degradación Ácida. 1.052. ≤ 2%. 1.024 %. Degradación Alcalina. 1.050. ≤ 2%. Oxidación. 1.043. ≤ 2%. Termólisis. 1.053. ≤ 2%. A. ABSORBANCIA. O. Q. UI. M IC. 0.768%. 0.160% 1.088%. FA. RM. AC I. A. *Absorbancia promedio del Estándar: 1.042. Y. BI. ESPECIFICIDAD. DE. CUADRO N°02: Especificidad del método analíticopara la cuantificación de Risperidona 2 mg Tabletas – Evaluación de la forma farmacéutica ABSORBANCIA. VALOR ACEPTABLE. PORCENTAJE DE INTERFERENCIA. 1.107. ≤ 2%. 1.157%. Degradación Alcalina. 1.112. ≤ 2%. 1.583%. Oxidación. 1.099. ≤ 2%. 0.43%. Termólisis. 1.109. ≤ 2%. 1.340%. TE CA. ESPECIFICIDAD. BI BL IO. Degradación Ácida. *Absorbancia promedio de la Muestra: 1.095. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. CUADRO N°03: Linealidad del método analíticopara la cuantificación de Risperidona 2mg Tabletas – Linealidad del Sistema VALOR ACEPTABLE. RESULTADO. 0.9998910. ≥ 0.99. CONFORME. Coeficiente de determinación (r2). 0.998. ≥ 0.99. CONFORME. Test estadístico para el “r” p=0.05; y n-2 grados de libertad. 254.9618. t exp> 2.1604. CONFORME. Coeficiente de variación. 0.33490. ≤2%. 244.4831. t exp> 2.1604. 4.329. M IC. UI. Q. O Y. BI. CONFORME. t exp>2.1604. CONFORME. RM. AC I. Prueba de la linealidad de la pendiente (b), p=0.05; y n-2 grados de libertad Prueba de proporcionalidad del intercepto (a), p=0.05; y n-2 grados de libertad. CONFORME. A. Coeficiente de correlación (r). A. VALOR OBTENIDO. LINEALIDAD DEL SISTEMA. DE. FA. GRÁFICA N°01: Curva de linealidad de Sistema - Concentración de Risperidona estándar (µg/mL) vs. Absorbancia.. TE CA. LINEALIDAD DEL SISTEMA. 1.350. y = 0.026x ‐ 0.019 R² = 0.999. BI BL IO. Absorbancia. 1.250 1.150 1.050. Abs. 0.950. Lineal (Abs). 0.850 0.750 30. 35. 40. 45. 50. Concentración µg/ mL. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. CUADRO N°04: Exactitud del método analíticopara la cuantificación de Risperidona 2mg Tabletas. VALOR ACEPTABLE. RESULTADO. 99.65 %. 98.0% - 102%. CONFORME. Test estadístico t de Student para p=0.05; y n-1 grados de libertad. 0.9028 < 2.1448. t exp<t tabla. G Experimental (Test de Cochran). 0.5330 < 0.6830. M IC. UI Q. t exp<t tabla. CONFORME. CONFORME. AC I. A. Y. BI. O. Recuperación promedio. A. VALOR OBTENIDO. RM. CUADRO N°05: Precisión del método analíticopara la cuantificación de Risperidona. FA. 2mg Tabletas. VALOR. VALOR. PRECISIÓN. OBTENIDO. ACEPTABLE. Repetibilidad del Sistema. 0.121%. ≤ 2%. CONFORME. Repetibilidad del Método. 0.250%. ≤ 2%. CONFORME. 1.50 %. ≤ 2%. CONFORME. BI BL IO. TE CA. DE. PARÁMETROS DE. RESULTADO. REPETIBILIDAD. PRECISIÓN INTERMEDIA. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. CUADRO N°06: Parámetros de Evaluación del Rango del método analíticopara la cuantificación de Risperidona 2 mg Tabletas. PARÁMETROS ESTUDIADOS. CRITERIOS DE ACEPTACIÓN Cumplir con las especificaciones de Linealidad, Precisión y Exactitud.. Analíticamente el método Rango analítico o intervalo funciona correctamente lineal: Establecido en base al desde la concentración de limite de cuantificación 0.032 mg/mL hasta 0.048 mg/mL. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. M IC. A. El método funciona Rango de trabajo: correctamente entre 80% Establecido en base a la 120% que fueron las evaluación de la Linealidad, concentraciones mínima y Precisión y Exactitud. máxima trabajadas. UI. RESULTADO. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V. DISCUSIÓN La cuantificación de risperidona en tabletas, según USP 35 menciona que se realiza por HPLC, pero este es un método muy costoso, es por eso que se pueden utilizar otros métodos como el de espectrofotometría UV/VIS, que son métodos menos costosos y menos complicados. La técnica analítica para la cuantificación. A. de risperidona en tabletas de 2 mg, por espectrofotometría UV/VIS, actualmente. M IC. no figura en ninguna obra oficial, por lo tanto al no estar registrado o. Q. UI. complementado en alguna farmacopea, debe ser validado previamente a su uso. O. en rutina, con el fin de proporcionar un alto grado de confianza, seguridad y. Y. BI. calidad de los resultados, lo cual se traduce en disminución de errores y. RM. AC I. A. repeticiones del análisis.. FA. Para la determinación del λmáxse realizó un barrido entre los rangos de 200 a 600. DE. nm (Gráfica N°02) (Ver Anexo N°02). El cual mostró la longitud de máxima absorbancia a 278 nm. Como sabemos para fines analíticos es conveniente. TE CA. conocer la denominada longitud de onda de máxima absorbancia, ósea la. BI BL IO. correspondiente a la frecuencia fotónica que mayor efecto produce en el estado energético del material absorbente; porque así se tendrá la mayor respuesta cuando el analito se encuentre a muy bajas concentraciones en solución.En el análisis espectrofotométrico, normalmente se escoge la longitud de onda de máxima absorbancia por dos razones: La primera razón es porque la curva es relativamente aplanada en las proximidades del máximo, de manera que apenas varia la absorbancia si se desajusta un poco el monocromador y si varia la anchura de banda escogida. La ley de Beer se cumple mejor cuando la. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. absorbancia es casi constante a lo largo de la banda de longitudes de onda escogida. La segunda razón es porque la sensibilidad del análisis es máxima en el máximo de absorbancia (es decir, se consigue la máxima respuesta para una concentración dada de analito). 15. A. La validación de un método analítico debe iniciarse con el análisis de. M IC. selectividad o especificidad, ya que este parámetro nos demuestra que el método. Q. UI. es capaz de discriminar entre el analito, sustancia de composición similar y otras. O. sustancias que puedan estar presentes en la muestra, como excipientes o. Y. BI. productos de degradación.En el Cuadro N°01 se evidencia los resultados de. AC I. A. selectividad para el principio activo para lo cual se trabajó con el estándar. RM. obteniendo resultados menores al 2% en el caso de degradación ácida,. FA. degradación alcalina, oxidación y termólisis. En el Cuadro N°02 se observa los. DE. resultados de selectividad realizados a la forma farmacéutica; siendo los resultados menores al 2% para el casode degradación ácida, degradación. TE CA. alcalina, oxidación y termólisis.Los valores de λmáxy ε (absorción molar) de las. BI BL IO. moléculas conjugadas depende de la naturaleza exacta del sistema conjugado y de sus sutituyentes. Woodward y Fieser desarrollaron un conjunto de correlaciones entre las estructuras moleculares y la absorción máxima, denominadas reglas de Woodward – Fieser. Sin embargo, en muchas ocasiones, se pueden utilizar simples generalizaciones para estimar de forma aproximada los valores de λmáx de los sistemas comunes. 11,16,20,21. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En el Cuadro N°03 se establece los resultados correspondientes a la linealidad del sistema. En la evaluación de la linealidad del sistema se trabajó para el rango establecido de 80% a 120% (Gráfica N°01). Al realizar el análisis estadístico de los datos recopilados (Ver Anexo N°04), se obtuvo un coeficiente de correlación (r) de 0.99989; el cual es mayor al valor mínimo aceptable de 0.99; lo que indica. A. una significativa correlación lineal entre la concentración y la lectura de la. M IC. absorbancia que reporta el analito en el análisis. Pero como la información. Q. UI. obtenida mediante el cálculo del coeficiente de correlación es limitado y no. O. justifica por si sola la linealidad, es por eso que hallamos el coeficiente de. Y. BI. determinación (r2), que aporta una mayor significancia estadística ya que. AC I. A. expresa la proporción de la variación total del método, por lo que obtuvimos un. RM. r2 de 0.9998; lo cual indica una probabilidad del 99.98% de que el porcentaje de. DE. FA. variación de respuesta es producida por la concentración.. Así mismo se determinó el coeficiente de variación de los factores de respuesta. TE CA. que fue de 0.334%, este valor es menor que 2%, por lo tanto es conforme a la. BI BL IO. especificación; para confirmar que dicha regresión es lineal aplicamos el test de regresión. (test. de. student). para. evaluar. que. existe. una. pendiente. significativamente distinta de cero con una probabilidad de 95% y n-2 grados de libertad, obteniéndose un t. regresión. de 254.9618, cumpliéndose que el t. regresión. es. mayor al t tabla (2.1604) (Ver Anexo N°02).. Además se halló un t experimental del término independiente, realizando el test de verificación del intercepto, aplicando un prueba t-student para evaluar las. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. condiciones de proporcionalidad con una probabilidad de 95% y n-2 grados de libertad, obteniendo un t. exp=. 4.3292, que es mayor a t. tablas=. 2.1604, indicando. así que la recta no pasa por el origen de las coordenadas, comprobando de esta manera que el termino independiente (valor de “a”) es estadísticamente diferente de cero, con todo esto queda demostrado la proporcionalidad y. M IC. A. linealidad del sistema.14,17. Q. UI. La guía de Conferencia Internacional de Armonización (ICH) hace mención que. O. una relación lineal debe ser evaluada en toda la gama del procedimiento. Y. BI. analítico, para ellos se puede demostrar directamente sobre la sustancia activa. AC I. A. por dilución de una solución madre estándar o pesadas separadas de mezclas. RM. sintéticas de los componentes del producto, utilizando el procedimiento. FA. propuesto. Este aspecto puede ser estudiado durante la investigación, así mismo. DE. la linealidad debe evaluarse mediante inspección visual de una trama de señales en función de la concentración de analito o contenido, durante el método es que. TE CA. trabajamos con concentraciones entre 80% a 120%, esto es lo más recomendable. BI BL IO. y trabajar cada concentración por triplicado, que en total son 15 determinaciones.14. Cabe mencionar que es recomendable usar pesadas independientes cuando la cantidad a pesar es confiable con respecto al equipo que se utilice, cuando las cantidades a pesar son muy pequeñas es necesario usar diluciones partiendo de una solución patrón y obtener soluciones a las concentraciones que se deseen.17. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.