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Efecto in vitro del extracto etanólico de tropaeolum majus mastuerzo sobre staphylococcus aureus meticilino resistente ATCC 25923

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Academic year: 2020

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. ici. na. ESCUELA DE MEDICINA. ed. EFECTO “IN VITRO” DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE Tropaeolum majus “MASTUERZO” SOBRE Staphylococcus. de. M. aureus METICILINO RESISTENTE ATCC 25923.. TESIS. ca. PARA OPTAR EL GRADO DE:. lio te. BACHILLER EN MEDICINA. AUTORA:. Bi b. ASPAUZA LESCANO, Tahireh.. ASESORA:. Dra. MEJÍA DELGADO, Elva Manuela.. TRUJILLO-PERÚ 2015. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) ed. ici. Dedicatoria. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. de. M. A Dios. Bi b. lio te. ca. A mi hermosa familia.. A mis amigos.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Agradecimientos. A Dios: por ser el faro que guía mi vida, porque ha sido siempre fiel y me guarda de todo mal.. ed. ici. na. A mis padres, Soledad Lescano y Agustín Aspauza: por su amor y su apoyo en todo momento, porque sin ellos no sería la persona que soy.. ca. de. M. A mi abuelita, Julia: por su amor, por ser mi sostén en todos estos años, sus consejos y sus oraciones diarias por mí.. Bi b. lio te. A mi hermanito, Alexis: por ser una de las fuentes de mi inspiración, porque aun con su corta edad me ha enseñado más de la vida de lo que yo le pude enseñar a él.. A la Doctora Elvita: porque más que una profesora es como una segunda mamá, por su paciencia y dedicación como guía de este trabajo.. A la Doctora Marilú Soto, por su colaboración en la realización de este trabajo.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE Pág. DEDICATORIA……………………………………………..……....................i AGRADECIMIENTOS………………………………………………………..ii. na. RESUMEN………………………………….……………………………….....iv. ici. ABSTRACT………………………………………………………….…............v. ed. I.- INTRODUCCIÓN…...………………………….…………………………6. M. II.- MATERIAL Y MÉTODO……………………………………….………..11. de. III.- RESULTADOS………………………...……………………….………...19 IV.- DISCUSIÓN…………………….………..………………………...…….31. ca. V.- CONCLUSIONES.……………………………………………….…..…..36. lio te. VI.- RECOMENDACIONES……….………………………………………....37 VII.-REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……………………………………38. Bi b. ANEXOS…………………………………………………………...…........44. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. EFECTO “IN VITRO” DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE Tropaeolum majus “MASTUERZO” SOBRE Staphylococcus aureus METICILINO RESISTENTE ATCC 25923.. RESUMEN El objetivo del presente estudio experimental fue conocer el efecto in vitro del. na. extracto etanólico de hojas y flores de Tropaeolum majus “mastuerzo” sobre. ici. Staphylococcus aureus meticilino resistente (SARM) ATCC 25923. Se realizó la prueba de susceptibilidad, utilizando el método de difusión en discos. Las cepas. ed. fueron sembradas en placas con agar Mueller Hinton, se colocaron discos. M. embebidos en las diferentes concentraciones del extracto. Las placas se incubaron a 37°C midiéndose los halos después de 18 horas; todos los discos presentaron. de. halos de inhibición, cuyo tamaño aumentaba en relación directamente proporcional a las concentraciones utilizadas. Se empleó también el método de. ca. macrodilución en tubos con concentraciones de 10.535, 52.675, 105.35, 158.025 y. lio te. 210.7 ug/mL del extracto, a los cuales se le agregó el inóculo de SARM. Se incubaron a 37°C por 18 horas, se sembraron 0,1 mL en placas con agar Mueller Hinton para determinar las Unidades Formadoras de Colonias (UFC), que fueron. Bi b. contabilizadas 18 horas después. Se observó efecto inhibitorio del crecimiento de SARM. La concentración mínima inhibitoria hallada fue 210.7 ug/mL. Se concluye que el extracto etanólico de hojas y flores de Tropaeolum majus posee. actividad inhibitoria in vitro sobre el crecimiento de cepas de SARM ATCC 25923. PALABRAS CLAVE: Staphylococcus aureus meticilino resistente, Tropaeolum majus, extracto etanólico, in vitro.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. "IN VITRO" EFFECT OF Tropaeolum majus "Nasturtium" ETHANOLIC EXTRACT ON METHICILLIN-RESISTANT Staphylococcus aureus ATCC 25923.. ABSTRACT. na. The aim of this experimental study was to determine the in vitro effect of. ici. ethanolic extract of leaves and flowers Tropaeolum majus "Nasturtium" on Staphylococcus aureus methicillin resistant (MRSA) ATCC 25923. Susceptibility. ed. testing was performed using the disk diffusion method. MRSA strains were. M. spreaded on Mueller Hinton agar; discs with different concentrations of the extract were set on the agar. The plates were incubated at 37 ° C; halos were measured. de. after 18 hours; all disks had inhibition zone whose size increased in direct proportion to the relative concentrations used. Macrodilution method was also. ca. used with concentrations of 10.535, 52.675, 105.35, 158.025 and 210.7 ug / ml of. lio te. the extract, to which was added MRSA inoculum. These were incubated at 37 ° C for 18 hours, then set on Mueller Hinton agar plates to determine colony forming units (CFU), which were counted 18 hours later. Growth inhibitory effect was. Bi b. observed MRSA. The minimum inhibitory concentration found was 210.7 ug / ml. It is concluded that the ethanolic extract of leaves and flowers Tropaeolum majus. has inhibitory activity in vitro on the growth of MRSA strains ATCC 25923. KEY WORDS: Methicillin-resistant Staphylococcus aureus, Tropaeolum majus, ethanolic extract, in vitro.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. Staphylococcus aureus, un microorganismo Gram positivo, en determinadas condiciones puede causar diversas infecciones en el ser humano, que van desde una simple infección cutánea hasta osteomielitis, endocarditis, neumonía y sepsis1, 2. .. na. La prevalencia internacional de infecciones intrahospitalarias, por S. aureus. ici. fluctúa entre 15,5 y 82,8%, encontrándose en el Perú entre 9,7-24,2%1. Así mismo, las infecciones intrahospitalarias por S. aureus meticilino resistente han. ed. sobrepasado el 50% de prevalencia en la mayoría de los países de Latinoamérica. M. y, el número de infecciones adquiridas en la comunidad está en aumento1. La capacidad para resistir el efecto de una amplia gama de antibióticos hace de. global3.. de. Staphylococcus aureus meticilino resistente (SARM) un líder patógeno humano. ca. El uso terapéutico de la penicilina a principios de 1940 redujo la tasa de. lio te. mortalidad debida a las infecciones causadas por cepas sensibles4. Hacia 1961 se reportó en Europa la aparición de SARM, extendiéndose posteriormente a diversas partes del mundo5. Décadas después, el aumento continuo del número de. Bi b. cepas multirresistentes de estafilococos, particularmente resistentes a la meticilina, dio lugar de nuevo a una alta tasa de mortalidad debida a las infecciones causadas por estos microorganismos4.. En los hospitales, las superficies con las que los pacientes tienen contacto cercano o que son muy accesibles para los pacientes son más propensas a contaminarse6. El SARM es capaz de sobrevivir durante días o semanas en las superficies de los ambientes en los centros sanitarios7. La contaminación de ambientes con SARM. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. se ha informado ampliamente en diferentes áreas de los hospitales, incluso en unidades de cuidados intensivos, unidades de quemados, salas de aislamiento, y salas de hospitalización. En salas de emergencias, el SARM se ha aislado del 1% 27% en superficies de las habitaciones de pacientes SARM-positivos. Sin embargo, el aislamiento de esta bacteria en estos ambientes se ve influenciada por. na. varios factores tales como la condición del paciente, el hacinamiento, e incluso el. ici. método de muestreo6.. La infección por esta bacteria representa el 44% de todas las infecciones. ed. hospitalarias en los Estados Unidos, y 92% de las personas hospitalizadas por. M. SARM han adquirido la bacteria en la comunidad (SARMAC)8. En Sudamérica, el primer brote epidémico de SARM fue descrito en dos prisiones en Uruguay en. de. el 20039 y posteriormente se han descrito casos en Argentina, Paraguay, Chile, Ecuador, Colombia, Venezuela y Brasil.. ca. En Perú, el primer caso sospechoso de SARMAC fue hallado en el Hospital. lio te. Nacional Cayetano Heredia en el 2008, en un paciente procedente de Argentina10. Los estudios realizados muestran una elevada prevalencia de SARM, sobre todo a nivel hospitalario5,. 11. . En un estudio multicéntrico en 6 hospitales de Lima. Bi b. Metropolitana en 1996 se encontró 63,3% de cepas SARM6. En el año 2010 se aislaron 276 cepas de Staphylococcus aureus de los hospitales Nacional Cayetano. Heredia, el Instituto Nacional de Enfermedades Neoplásicas y el Instituto Nacional de Salud del Niño, de las cuales 160 fueron resistentes a meticilina (58%), y 9 de ellas fueron identificadas como SARMAC (5,6%)5. El mecanismo de resistencia a meticilina desarrollado por S. aureus se basa en la producción de una proteína de unión a la penicilina (PUP o PBP) adicional, la. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PUP2a, la cual es completamente funcional y no tiene afinidad por los antibióticos β-lactámicos, originando resistencia a penicilinas semisintéticas (meticilina y oxacilina), cefalosporinas de primera a cuarta generación y a los carbapenems; extendiéndose a otras familias antibióticas como las quinolonas y lincosamidas. La PUP2a es codificada por el gen mecA, que está localizado en un elemento. .. ici. 12. na. genético móvil denominado casete cromosómico estafilocócico mec (SCCmec)5,. Estudios han demostrado que los extractos y aceites esenciales obtenidos de presentan. propiedades 14. antifúngicas,. antivirales,. Una de los especímenes estudiados es. M. insecticidas y antioxidantes13,. antibacterianas,. ed. plantas. Tropaeolum majus, conocido popularmente en Perú como mastuerzo, y que es. de. ampliamente usado con fines terapéuticos en países vecinos como Brasil. Se ha encontrado en T. majus la presencia de isotiocianato de bencilo, metabolito. ca. asociado con actividad antiviral, antimicrobiana y actividad antitumoral. Otro. lio te. metabolito asignado a esta planta es el ácido erúcico15, que presenta acción antimicrobiana; contiene además glucosinolatos, glicósidos de azufre, tromalite, bensilglucosinolato, glucosinol y glicotropeolina. La glicotropeolina libera un. Bi b. compuesto sulfuroso que añadido en el agua, tiene las propiedades de un desinfectante, pero también tiene efectos anti-tumorales13. Un estudio rumano sobre el efecto del aceite esencial de T. majus sobre Escherichia. coli,. Salmonella. sp.,. Pseudomonas. aeruginosa,. Listeria. monocytogenes, Staphylococcus aureus, Bacillus sp. Y Candida albicans demostró una acción antimicrobiana similar o mejor a la de los antibióticos comerciales, siendo E. coli la especie menos sensible13.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Acosta16investigó la actividad antimicrobiana de los extractos etanólico y acuoso de T. majus y Caléndula officinalis, encontrando que los extractos etanólicos de dichas plantas, obtenidos tanto a 25°C como a 50°C, así como el extracto acuoso de T. majus obtenido a 50°C tuvieron actividad bactericida contra E. coli, S. aureus y fungicida contra S. cerevisiae.. na. Un estudio peruano de 2010, encontró un efecto inhibidor in vitro del extracto. ici. etanólico de T. majus “mastuerzo” sobre los hongos dermatofitos Microsporum canis y Trichophyton mentagrophytes aislados de pacientes, sugiriendo su uso. ed. como terapia alternativa17.. M. Como se dijo en párrafos anteriores, la prevalencia de SARM en nuestro país y en otras regiones del mundo es considerable. El consumo de una gran cantidad diaria. de. de antibióticos en algunos países ha dado lugar a la resistencia de las poblaciones de bacterias, causando así un grave problema de salud pública. En vista de esta. ca. situación, la búsqueda de nuevas sustancias antimicrobianas procedentes de. lio te. fuentes naturales, incluyendo las plantas, se ha vuelto cada vez más importante. Además, durante décadas, el uso de plantas medicinales en muchos países, ha sido parte de la cultura popular como un tratamiento de diferentes problemas. Bi b. relacionados con la salud. La finalidad de este trabajo fue conocer el efecto “in vitro” del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” sobre Staphylococcus aureus meticilino resistente, por lo cual, se planteó el siguiente problema: ¿Cuál es el efecto “in vitro” del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” sobre Staphylococcus aureus meticilino resistente ATCC 25923?. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. HIPÓTESIS: El extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” tiene efecto antibacteriano “in vitro” sobre Staphylococcus aureus meticilino resistente ATCC 25923.. OBJETIVOS:. na. Objetivo General. ici.  Conocer el efecto antibacteriano “in vitro” del extracto etanólico de aureus. ed. Tropaeolum majus “mastuerzo” sobre Staphylococcus. Objetivos Específicos. M. meticilino resistente ATCC 25923.. de.  Determinar el efecto antibacteriano “in vitro” del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” sobre SARM mediante la técnica. ca. de Kirby y Bauer utilizando las concentraciones 10.535, 52.675,. lio te. 105.35, 158.025 y 210.7 ug/ml.  Determinar la concentración mínima inhibitoria del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” sobre SARM utilizando. Bi b. las concentraciones 10.535, 52.675, 105.35, 158.025 y 210.7 ug/ml.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. MATERIAL Y MÉTODO. 2.1. Material 2.1.1.. Material Botánico. Se utilizaron las flores y hojas de Tropaeolum majus “mastuerzo”. na. para la elaboración del extracto etanólico, las mismas que fueron. ici. obtenidas de jardines particulares, provenientes del distrito de. 2.1.2.. Microorganismos. ed. Trujillo.. M. Se emplearon cepas bacterianas de Staphylococcus aureus meticilino resistente ATCC 25923 que se mantienen en el Cepario de. de. Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. Población Objetivo. ca. 2.1.3.. lio te. Cepas de la bacteria Staphylococcus aureus meticilino resistente ATCC25923.. Método:. Bi b. 2.2. 2.2.1. Diseño: Se trabajó con un grupo experimental, constituido. por colonias de la cepa de Staphylococcus aureus meticilino. resistente ATCC 25923, sometido a la acción del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” en sus diferentes concentraciones de 210,7 µg/ml, 158,02 µg/ml, 105,35 µg/ml, 52,675 µg/ml y 10,535 µg/ml (100, 75, 50, 25 y 5%); además de un grupo control. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. constituido por el cultivo de la bacteria sin tratamiento, el cultivo de la bacteria con Vancomicina y el cultivo de la bacteria con etanol al 70%. Para cada grupo se buscó la concentración inhibitoria mínima, mediante la técnica de macrodilución en caldo, y la medida de halo de inhibición, mediante la prueba de difusión en disco de Kirby-. na. Bauer. Se repitió 13 veces cada experimento para cada una de las. Bi b. lio te. ca. de. M. ed. ici. concentraciones.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.1.1 Definiciones operacionales: Extracto etanólico de Tropaeolum majus: Extracto con olor característico, obtenido a partir de hojas y flores desecadas de Tropaeolum majus, por maceración en contacto con etanol, seguida. na. de la eliminación de dicho solvente por rotoevaporación.. ici. Efecto “in vitro” del extracto etanólico de Tropaeolum majus: actividad antimicrobiana sobre bacterias enfrentadas con el extracto. ed. etanólicode Tropaeolum majus in vitro, evidenciado a través del. M. diámetro del halo de inhibición según la escala de Duraffourd y de la concentración mínima inhibitoria, que es la menor concentración. de. del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” capaz de inhibir completamente el desarrollo de unidades formadoras de. lio te. ca. colonias UFC.. 2.2.1.2 Procedimientos 2.2.1.2.1. Obtención del extracto etanólico de Tropaeolum. Bi b. majus “mastuerzo”. RECOLECCIÓN E IDENTIFICACIÓN TAXONÓMICA: Las hojas y flores. de mastuerzo, fueron recolectadas, por la. mañana, del distrito de Trujillo (33m.s.n.m.), provincia de Trujillo y de la región La Libertad, en el mes de julio. Un ejemplar completo de la planta se llevó posteriormente al Herbarium Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo para su. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. identificación y posterior verificación taxonómica, obteniendo el código de identificación del espécimen N° 58287(anexo N°1). PREPARACIÓN DEL MATERIAL BOTÁNICO: Selección y lavado del material botánico: El material recolectado fue transportado al laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de. na. Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, en. ici. donde se seleccionaron las hojas y flores que estaban en buenas condiciones y se eliminaron las sustancias extrañas presentes en la. ed. muestra. Luego se procedió a lavar el material vegetal con agua. M. destilada, seguido de una desinfección, utilizando hipoclorito de sodio al 0.5 %. Posteriormente se realizó un enjuague de la planta. de. con suficiente agua destilada estéril, esto es para retirar los residuos de hipoclorito.. ca. Secado: Las hojas de mastuerzo fueron colocadas sobre papel. lio te. Kraft y sometidas a secado primero a temperatura ambiente por 24 horas, y luego en la estufa a una temperatura de 40°C.Se realizaron la determinación de peso cada 24 horas hasta valores constantes. éstas se. Bi b. Pulverización: Una vez secadas las hojas y flores pulverizaron con ayuda de un mortero.. Tamizaje: El material obtenido de la pulverización, se pasó a través de los tamices. Se trabajó con partículas de polvo semifino. Almacenamiento: El polvo obtenido de las hojas y flores de mastuerzo, se guardó en frascos de vidrio de color ámbar de boca ancha18, 19.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PREPARACIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO Método maceración En un envase estéril de vidrio ámbar de boca ancha de 1 litro de capacidad, se colocaron. 50 g de polvo de hojas y flores. previamente pulverizadas y tamizadas. Luego, se añadió etanol al. na. 70 % (70°) cantidad suficiente hasta cubrir la muestra por sobre 2. ici. cm de altura. Se mezcló bien, teniendo en cuenta que la mezcla debe ocupar como máximo las ¾ partes del recipiente. Se tapó el. M. minutos, dos veces al día.. ed. recipiente y se maceró en ausencia de luz por 7 días, agitándose 10. Transcurrido el tiempo de maceración, se filtró el líquido al vacío,. de. con papel de filtro Whatman N° 1. Al líquido filtrado se le denominó extracto etanólico. A continuación, el extracto etanólico en un rotavapor (Heidolph WB 2000) a presión. ca. se concentró. lio te. reducida y temperatura controlada, no mayor a 40°C. Finalmente, el extracto se colocó en cápsulas de porcelana y se llevó a secar a la estufa a 40 ºC. Al producto resultante se le denominó extracto. Bi b. seco. A partir de este extracto seco se preparó una solución madre del extracto etanólico a la concentración de 1mg/ml. De esta solución madre se prepararon las demás concentraciones de 210,7 µg/ml, 158,02 µg/ml, 105,35 µg/ml, 52,675 µg/ml y 10,535 µg/ml. Luego. cada concentración del extracto fue esterilizado por. filtración con membrana, usando filtros Millipore de 0.4 µm y 0.22 µm. Finalmente, las concentraciones preparadas, del extracto. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. etanólico, se colocaron en viales ámbar de 10 ml y fueron almacenadas a 4°C hasta su posterior utilización19, 20. (Anexo N°2). 2.2.1.2.2. Evaluación del efecto antimicrobiano del extracto. etanólico de Tropaeolum majus:. na. Técnica de disco difusión de KIRBY-BAUER. ici. Se sembró la cepa preparada de SARM en placas Petri conteniendo agar Mueller Hinton. Luego, con una aguja estéril se colocaron. ed. discos de papel de filtro estériles (6 mm de diámetro), cada uno. M. previamente embebido con 50ul21 de cada concentración del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” por el. de. periodo de 1 hora. Se utilizaron dos controles: un grupo empleando discos embebidos en etanol al 70% y el otro utilizando discos de. ca. vancomicina22 estandarizados para antibiogramas. Las placas. lio te. recién sembradas con los discos fueron incubadas a 37ºC por 18 horas23,. 24, 25. . Luego de este tiempo, se tomó el registro en. milímetros de los halos de inhibición de los discos para cada una de. Bi b. las concentraciones del extracto, incluyendo el área del disco del papel de filtro; se procedió de igual manera para los grupos control. Para la determinación de la inhibición por los extractos de mastuerzo se empleó la escala de Duraffourd14 que considera la actividad antimicrobiana en función al diámetro de los halos de inhibición del crecimiento del microorganismo: . Nula (-): Diámetro inferior o igual a 8mm.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Sensibilidad límite (sensible = +): Diámetro de 9 a 14mm.. . Media (muy sensible = ++): Diámetro de 15 a 19mm.. . Sumamente sensible (S.S. = +++): Diámetro igual o. superior a 20mm. Concentración. Mínima. Inhibitoria. Técnica. de. na. macrodilución en caldo23, 24. (CMI):. ici. Se utilizaron tubos de ensayo estériles divididos engrupo. ed. experimental: concentraciones de 10.535, 52.675, 105.35, 158.025 y 210.7 ug/ml del extracto etanólico de Tropaeolum majus. M. “mastuerzo” más la cepa bacteriana y los grupo control en esta. de. prueba fueron: el cultivo de la cepa sin tratar, cepa con Vancomicina y cepa con etanol 70%.Se preparó un inóculo. ca. bacteriano con una concentración de 108 UFC/mL. Se colocó 0.2 ml21 del inóculo estandarizado a cada tubo del extracto etanólico de. lio te. Tropaeolum majus “mastuerzo” en sus diferentes concentraciones, conteniendo 0.8 mL21 del mismo y a los tubos control el primero. Bi b. que contenía sólo 0.8mL de caldo Mueller Hinton, el segundo grupo Vancomicina y el tercero 0.8 mL de etanol de70%. Todos los tubos se sellaron con algodón y se colocaron a 37°C por 18 horas. Después del tiempo transcurrido se tomó 0.1 mL de cada tubo para sembrarlo en placas conteniendo agar Mueller Hinton, dispersando la muestra con el asa de Drigalsky. Fueron sembradas 13 placas por cada grupo del experimento (las concentraciones del extracto, la. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Vancomicina, el grupo sin tratamiento y el etanol). Se incubaron nuevamente las placas a 37°C por 18 horas, luego de las cuales se contaron las unidades formadoras de colonias. Se considera número significativo de colonias un recuento ≥ 30UFC26, 27. Aspectos Éticos. na. 2.3. El proyecto de investigación fue presentado al Comité de Ética de la. ici. Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo. Así mismo,. ed. para la realización de la investigación se tuvo en cuenta los principios de bioseguridad, poniendo atención a factores que pudieran dañar el medio. M. ambiente; así como las normas establecidas en el Código de Ética y Deontología del Colegio Médico del Perú en la sección 2 art 42°,. de. concerniente al trabajo de Investigación28.. Análisis e Interpretación de Información. ca. 2.4. lio te. Se utilizó como método estadístico el análisis de varianza para un diseño completamente al azar y la prueba de Duncan; ambas considerando un nivel de significancia de 0.05. Para la realización de las pruebas se utilizó. Bi b. el programa Statistica v 10.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. En el presente estudio experimental cuyo objetivo principal fue conocer el efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de Tropaeolum majus sobre Staphylococcus aureus meticilino resistente (SARM) ATCC 25923, se obtuvieron. na. los siguientes resultados: Luego de realizar la prueba de susceptibilidad antibiótica y de haber medido los. ici. halos de inhibición, de acuerdo a la escala de Duraffourd se encontró:. ed. Hay un efecto inhibitorio del extracto frente a la bacteria que se empieza a. M. evidenciar desde la concentración más pequeña, dado que algunos de los diámetros son ≥9mm, sin embargo con dicha concentración en la mayoría de las. de. repeticiones la cepa no fue sensible; ésta tuvo la mayor sensibilidad con la concentración de 210.7ug/mL, comparable con la Vancomicina. El etanol de 70%,. ca. el mismo que fue empleado para la elaboración del extracto, no demostró. lio te. actividad bactericida contra la bacteria (anexos N°3 y 4). Los promedios de los diámetros de los halos de inhibición del crecimiento de SARM ATCC 25923 con las distintas concentraciones, así como con la. Bi b. Vancomicina y etanol 70% lo vemos en la tabla N°1.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N°1: Diámetros promedio del halo de inhibición del crecimiento de SARM ATCC 25923según concentraciones del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” (10.535, 52.675, 105.35, 158.025 y 210.7. na. ug/mL) y Vancomicina y etanol 70%.. ni. Media. Desv. Est.. C (ug/mL): 10.535. 13. 8.38. 1.12. C (ug/mL): 52.675. 13. 8.77. 1.69. C(ug/mL): 105.35. 13. C(ug/mL): 158.025. 13. ed 12.15. 1.63. 11.15. 0.90. 13. 17.85. 2.23. 13. 15.15. 0.80. 6.85. 0.69. M. C (ug/mL): 210.7. de. Vancomicina Etanol. ici. Grupos de Investigación. 13. Bi b. lio te. ca. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2015.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En la tabla N°2se muestra el análisis de varianza donde se indica una diferencia estadísticamente significativa del diámetro del halo de inhibición del crecimiento de la cepa bacteriana de acuerdo a la concentración del extracto etanólico de. na. mastuerzo y en comparación con Vancomicina y etanol.. Tabla N° 2: Análisis de varianza para evaluar el efecto antibacteriano “in. 25923. mediante. la. técnica. de. Kirby-Bauer. utilizando. las. ed. ATCC. ici. vitro” del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” sobre SARM. concentraciones 10.535, 52.675, 105.35, 158.025 y 210.7ug/mL, Vancomicina y. de. M. etanol.. SC. Total. CM. Fo. P. 1208.84. 6. 201.473. 103.29. 0.00000. 163.85. 84. 1.951. 1372.68. 90. lio te. Tratamientos Error. gl. ca. FV. Bi b. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2015.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La tabla N°3 muestra los resultados de la prueba de Duncan, una prueba más exacta que agrupa en secciones de acuerdo a si son diferentes o semejantes en el efecto que estamos analizando, en este caso la inhibición del crecimiento de SARM evidenciado por el diámetro del halo. Se observan 5 grupos, G1-G5, que indica que los grupos son estadísticamente diferentes entre sí (con un error de. na. 0.05). Como vemos el grupo de etanol es diferente a los del extracto y a la. ici. Vancomicina porque de acuerdo a los diámetros promedio habría efecto con el extracto y con el antibiótico, pero no con el etanol 70%. Las concentraciones del. ed. extracto que están en un mismo grupo (10.535 - 52.675ug/mL y 105.35 -158.025. M. ug/mL) significa que su efecto no difiere significativamente entre ellas. Esta prueba fue a la vez corroborada por la prueba de Kruskal-Wallis, arrojando una. Bi b. lio te. ca. de. diferencia significativa (P=0.00) entre los grupos (anexo N° 5).. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N°3: Prueba de Duncan que compara promedios de diámetros del halo inhibitorio del crecimiento de SARM ATCC 25923del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” utilizando las concentraciones 10.535, 52.675,. ni. Grupos para alfa = 0.05 G1. 13. C(ug/mL): 52.675. 13. C (ug/mL): 158.025. 13. C (ug/mL): 105.35. 13. Vancomicina. 13. C (ug/mL): 210.7. 13. G3. G4. G5. ed. C (ug/mL): 10.535. 6.85 8.38 8.77. M. 13. de. Etanol. G2. ici. Grupos de Investigación. na. 105.35, 158.025 y 210.7 ug/mL; Vancomicina y etanol.. 11.15 12.15 15.15 17.85. Bi b. lio te. ca. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2015.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En el gráfico N°1se observa una tendencia a aumentar el halo de inhibición mientras mayor es la concentración del extracto de T. majus, un efecto comparable a la Vancomicina y, en comparación con el etanol, este último no ha ejercido efecto inhibitorio en la cepa bacteriana. Gráfico N°1: Efecto inhibitorio del extracto etanólico de Tropaeolum majus. na. “mastuerzo” en concentraciones de 10.535, 52.675, 105.35, 158.025 y 210.7. Bi b. lio te. ca. de. M. ed. ici. ug/mL sobre SARM ATCC 25923 mediante la técnica de Kirby-Bauer.. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2015.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Para la determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI), se registró el número de UFC contabilizadas luego de enfrentar la cepa bacteriana a las distintas concentraciones del extracto de T. majus, así como los controles (Anexo N° 6). En la tabla N°4 se presentan los promedios de UFC según grupos de. na. experimentación, vemos que la concentración de 210.7 ug/ml inhibió. ici. completamente el crecimiento bacteriano, por lo que según nuestra definición. Bi b. lio te. ca. de. M. Vancomicina, usada como control.. ed. operacional, ésta sería la CMI. Vemos que este resultado es comparable al de la. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N°4: Promedio de UFC según grupos de investigación del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” (concentraciones de 10.535, 52.675, 105.35, 158.025 y 210.7 ug/mL) y Vancomicina, etanol 70% y grupo. na. sin tratamiento. ni. Media. Desv. Est.. CMI (ug/mL): 10.535. 13. 13.69. 15.87. CMI (ug/mL): 52.675. 13. 4.15. 4.04. CMI (ug/mL): 105.35. 13. CMI (ug/mL): 158.025. 13. Etanol. ed 1.23. 1.64. 13. 0.00. 0.00. 13. 0.00. 0.00. 13. 60.54. 17.48. 13. 74.46.E+06. 42.12.E+06. M. 2.59. ca. Sin Tratamiento. 1.77. de. CMI (ug/mL): 210.7 Vancomicina. ici. Grupos de Investigación. Bi b. lio te. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2015.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En la tabla N°5 se muestra el análisis de varianza donde se indica una diferencia estadísticamente significativa del número de UFC de la cepa bacteriana entre los grupos del tratamiento vs los grupos de etanol y Vancomicina.. Tabla N°5: Análisis de varianza para evaluar el efecto antibacteriano “in. na. vitro” del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” sobre SARM. ici. ATCC 25923 utilizando las concentraciones 10.535, 52.675, 105.35, 158.025 y. SC. gl. de. FV. M. ed. 210.7 ug/mL; Vancomicina y etanol.. CM. Fo. P. 76.170. 0.0000. 38064.99. 6. 6344.16. Error. 6996.31. 84. 83.29. ca. Tratamientos. Total. 45061.30. 90. Bi b. lio te. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2015.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La tabla N°6 muestra los resultados de la prueba de Duncan, que es una prueba más exacta para este análisis. Esta vez se han agrupado los datos en 3 secciones, G1-G3, para indicar que los grupos son estadísticamente diferentes entre sí (con un error de 0.05). Como se puede observar el grupo de etanol es diferente a los del extracto y a la Vancomicina. Así mismo, notamos que prácticamente todas las. na. concentraciones del extracto y la Vancomicina están en un mismo grupo, excepto. ici. la concentración de 10.535 ug/mL, lo cual significa que su efecto no difiere significativamente entre ellas y vemos que inhiben el crecimiento bacteriano, al. ed. tener en promedio entre 1 y 4 UFC. Además, como la concentración de 210.7. M. ug/mL no tuvo ninguna UFC luego de enfrentarla a la cepa, ésta viene a ser la CMI. Esta prueba fue a la vez corroborada por la prueba de Kruskal-Wallis,. Bi b. lio te. ca. de. arrojando una diferencia significativa (P=0.00) entre los grupos (anexo N°5).. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N°6: Prueba de Duncan para determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI) del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” sobre SARM ATCC 25923 utilizando las concentraciones 10.535, 52.675,. Grupos para alfa = 0.05. Grupos de Investigación. G1 13. 0.00. Vancomicina. 13. 0.00. C (ug/mL): 158.025. 13. C (ug/mL): 105.35. 13. C (ug/mL): 52.675. 13. C (ug/mL): 10.535. 13. 1.23. M. 1.77 4.15. de. Etanol. G3. ed. C (ug/mL): 210.7. G2. ici. ni. na. 105.35, 158.025 y 210.7 ug/mL; Vancomicina y etanol.. 13. 13.69 60.54. Bi b. lio te. ca. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2015.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En el gráfico N°2 se observa una tendencia a disminuir el número de UFC, es decir mayor efecto antibacteriano, mientras mayor es la concentración del extracto de T. majus, un efecto comparable a la Vancomicina, en especial con la concentración de 210.7 ug/mL, que como ya se dijo es la CMI. Gráfico N°2: Efecto inhibitorio del extracto etanólico de Tropaeolum majus. na. “mastuerzo” en concentraciones de 10.535, 52.675, 105.35, 158.025 y 210.7. ici. ug/mL sobre SARM ATCC 25923: recuento de unidades formadoras de. Bi b. lio te. ca. de. M. ed. colonias (UFC).. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2015.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSIÓN. Desde los albores de la humanidad se han venido empleando las plantas y sus frutos con fines terapéuticos, y en la actualidad la lupa científica está enfocando cada vez más sobre la búsqueda de principios químicos de estas plantas usadas tradicionalmente, lo empírico debe fundamentarse en bases científicas. Dentro de. na. este marco podemos referirnos a numerosos estudios sobre propiedades químicas. ici. de plantas usadas en medicina tradicional, en los cuales se destaca su gran utilidad en diversas actividades biológicas, tales como antioxidantes, antiinflamatoria,. ed. antitumoral, analgésica, antiespasmódica y antibacteriana29-33. Esta última. M. actividad cobra relevancia debido a la creciente resistencia a los antibióticos clásicos que se viene observando últimamente.. de. Nuestro país es una nación con gran riqueza en especies vegetales, dentro de las cuales algunas han sido estudiadas, sin embargo otras aún permanecen. ca. desconocidas en el ámbito terapéutico, como el caso de Tropaeolum majus, de la. lio te. cual la mayor parte de estudios publicados son extranjeros. La presente investigación demostró el efecto antibacteriano del extracto etanólico. Bi b. de Tropaeolum majus “mastuerzo” sobre Staphylococcus aureus meticilino resistente ATCC 25923, utilizando el método de difusión en disco de Kirby y Bauer y hallando la concentración mínima inhibitoria. Se determinó que el extracto tuvo efecto inhibitorio in vitro frente a S. aureus al comparar los halos de inhibición con la escala de Duraffourd, para las 5 concentraciones empleadas, con una tendencia a aumentar el efecto con el aumento de la concentración del extracto (gráfico N°1, anexo N°4). Si bien hubo un diámetro promedio mayor con la concentración de 105.35 ug/mL en comparación con la de 158.02 ug/mL, la 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. diferencia fue bastante pequeña y hubo más variación de diámetros con el grupo de 105.35 ug/mL que con el de 158.02 ug/mL. Al buscar la CMI, se ve de igual forma que el efecto tiende a aumentar (menor número de UFC) con una mayor concentración (gráfico N°2, anexo N°4).. na. Al compararse con el etanol 70%, con el que fue hecho el extracto, vemos que se encuentran UFC ≥ 30, lo cual indica que hay un crecimiento bacteriano. ici. significativo24, 25, por lo que no hay efecto antibacteriano con éste; sin embargo. ed. con las distintas concentraciones del extracto se evidencia el efecto inhibidor del crecimiento de la cepa. Dicho efecto inhibitorio se comparó asimismo con el de la. M. Vancomicina, encontrándose que la concentración de 210.7 ug/mL es similar,. de. visto tanto en el diámetro de los halos inhibitorios como en el conteo de UFC (tabla N° 4; gráfico N°2; anexosN°3 y 4). En la prueba de Duncan se estratifican. ca. los datos de acuerdo a su semejanza estadística (tabla N°3 y 6), por lo que se puede afirmar que el extracto etanólico de mastuerzo sí ejerce un efecto. lio te. antibacteriano en todas las concentraciones utilizadas, siendo la concentración mayor semejante al efecto de la Vancomicina, antimicrobiano usado como control en el presente estudio, y distinguible del otro control con etanol 70%, el cual no. Bi b. ejerció efecto inhibitorio, señalando así que el efecto de esta concentración de extracto tiene el mismo efecto que usar el antibiótico Vancomicina. Estos resultados han sido a su vez corroborados por una prueba más, la de KruskalWallis (anexo N°5), la misma que arroja un p=0.00, lo cual indica una significancia estadística de los resultados. La actividad antimicrobiana encontrada en la presente investigación concuerda con otros investigadores. Zanetti y col34estudiaron el efecto antimicrobiano de los 32. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. extractos etanólico y acuoso de las hojas y tallos de T. majus. Estos investigadores después de haber obtenido el extracto etanólico, sometieron al mismo a la acción de distintos solventes en orden creciente de polaridad, obteniéndose las fracciones hexánica, clorofórmica, acetato de etilo y butanólica. Para evaluar la actividad antimicrobiana emplearon el método de bioautograma, hallando que las fracciones. na. hexánica y clorofórmica tenían actividad antimicrobiana contra Staphylococcus. ici. epidermidis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae y Salmonella setubal. Las fracciones de acetato de etilo y butanol no tuvieron. ed. actividad antibacteriana para los mismos microorganismos.. La acción. M. antimicrobiana hallada coincide con nuestro estudio, aunque los investigadores no especifican la concentración del extracto usado. Otro estudio con mastuerzo es el. de. de Acosta16, donde demuestra que el extracto etanólico de T. majus, obtenido tanto a 25°C como a 50°C, así como el extracto acuoso de T. majus obtenido a. ca. 50°C tuvieron actividad bactericida contra E. coli, S. aureus y fungicida contra. lio te. Sacharomyces cerevisiae. Así mismo, Butnariu M y Bostan C13, evaluaron la acción del aceite esencial de las hojas y flores de T. majus sobre Escherichia coli, Salmonella. sp.,. Pseudomonas. aeruginosa,. Listeria. monocytogenes,. Bi b. Staphylococcus aureus, Bacillus sp. Y Candida albicans, demostrando una acción antimicrobiana similar o mejor a la de los antibióticos comerciales. La ventaja de haber usado un método para extracción de aceite esencial es que se aíslan otro tipo de componentes de la planta que con el extracto etanólico. Uno de los compuestos extraídos en el aceite esencial, mencionados por los autores, que darían la actividad antibacteriana es la glicotropeolina, presente en todas las partes de la planta.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En estos estudios, los autores citados utilizaron varias partes de la planta: flores, hojas, tallos, sea mezclando flores con hojas u hojas con tallos; en la presente investigación también se mezclaron flores y hojas. Es probable que la actividad antibacteriana encontrada tanto por los autores mencionados como en el presente estudio se deban a los compuestos fenólicos, y aceites fijos presentes en la planta.. na. Como registra la literatura, estudios fitoquímicos han demostrado la presencia de. ici. ácidos grasos (ácido erúcico, ácido oleico y linoleico), isotiocianato de bencilo, glucosinolatos y flavonoides (isoquercitrin, quercetina y kaempferol) en las hojas. ed. de T. majus35. Así mismo posee en todas sus partes un glucósido sulfurado, la. M. glicotropeolina, que por acción de la mirosina, una enzima contenida en la misma planta que se libera al partirla o triturarla, produce entre otras sustancias un aceite. de. esencial azufrado con potente acción antibiótica36. Por el método de extracción usado en nuestra investigación, debemos haber liberado tal enzima que actuó con. ca. la glicotropeolina contribuyendo a la acción antimicrobiana.. lio te. Si bien los métodos pueden diferir en los compuestos químicos de la planta que se extraen, ya que las sustancias más polares como el agua (en el caso de extracto acuoso) extraerá componentes más polares, los de polaridad intermedia como. Bi b. etanol 70% extraerá compuestos similares en polaridad, el efecto antimicrobiano encontrado fue similar al de otros estudios. Para poder elucidar el porqué de esta actividad se sometió al extracto etanólico utilizado a un análisis fitoquímico para. conocer sus componentes (anexo N°6). Como resultado de ello se tuvo que el extracto utilizado en la presente investigación contiene compuestos fenólicos (flavonoides, taninos), antocianidinas (parte de antocianinas, un tipo de flavonoides y responsable del color rojizo de las flores37), quinonas, azúcares. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. reductores.. Las quinonas pueden tener propiedades catárticas, citostáticas o. bacteriostáticas38. La presencia de azúcares reductores probablemente se deba a la degradación de compuestos más complejos, como los glucósidos, entre ellos el principal a destacar en T. majus es la glicotropeolina, con efecto antibacteriano. La actividad antibacteriana de nuestro extracto se debe probablemente entonces a. na. los flavonoides. La acción antibacteriana de éstos se debe a la inhibición de la. ici. síntesis de los ácidos nucleicos, se dice que el anillo B de los flavonoides jugaría un papel en la intercalación o enlace de hidrógeno con el apilamiento de las bases. ed. de los ácidos nucleicos, lo cual inhibiría la síntesis de ADN y ARN. La actividad. M. de la quercetina (un tipo de flavonoide) ha sido al menos parcialmente atribuido a la inhibición de la ADN girasa. También se ha propuesto que sophoraflavone G y la función de la membrana. de. (-) - galato de epigalocatequina inhiben. energético39.. ca. citoplasmática, y que los licochalcones A y C inhiben el metabolismo. lio te. Un asunto que siempre preocupa al encontrar una nueva molécula terapéutica son sus efectos tóxicos; al respecto, Gomes y col, así como Zanetti y col investigaron sobre la toxicidad del extracto etanólico obtenido de hojas y tallos de Tropaeolum. Bi b. majus tras su administración por vía oral a ratas y ratones, no encontrando efectos tóxicos incluso con una dosis máxima de 5g/kg34, 35. Por todo lo visto anteriormente y según los resultados obtenidos se confirma la hipótesis por lo que se puede afirmar que Tropaeolum majus abre nuevas ventanas en la investigación clínica y farmacológica, constituyendo una alternativa natural, eficiente, segura y de bajo costo para el tratamiento de diversas infecciones causadas por S. aureus meticilino resistente en nuestra región.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. CONCLUSIONES:.  El extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” ejerce un efecto antibacteriano sobre SARM ATCC 25923, evidenciado a través de los. na. halos de inhibición con la técnica de Kirby y Bauer y de la inhibición de. ici. Unidades Formadoras de Colonias.. ed.  El efecto antibacteriano es directamente proporcional a la concentración. M. del extracto etanólico de Tropaeolum majus.. Bi b. lio te. ca. de.  La Concentración Mínima Inhibitoria en el estudio fue 210.7 ug/ml.. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI.. RECOMENDACIONES:.  Incrementar investigaciones experimentales para demostrar el efecto antimicrobiano del uso del extracto etanólico de Tropaeolum majus. na. “mastuerzo” a mayores concentraciones, utilizando modelos animales y en. ici. humanos..  Realizar estudios que evalúen las características farmacocinéticas de majus. como. por. diferentes. vías. de. Bi b. lio te. ca. de. M. administración.. medicamento. ed. Tropaeolum. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Córdova R, Cavero P, Huaranga J, Pachas C. Portadores asintomáticos de Staphylococcus aureus en trabajadores del Hospital Regional de Ica, Perú. na. 2011. Rev. Méd. Panacea 2011; 1(3): 59-66. 2. Alam M, Read T, Petit R, Boyle-Vavra S, Miller L, Eells S, et al.. ici. Transmission and Microevolution of USA300 MRSA in U.S. Households:. ed. Evidence from Whole-Genome Sequencing. M Bio. 2015;6(2). pii: e00054-15.. M. 3. Acebrón I, Chang M, Mobashery S, Hermoso J. The Allosteric Site for the Nascent Cell Wall in Penicillin-Binding Protein 2a: an Achilles'Heel of. 22(14): 1678-1686.. de. Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. Curr Med Chem 2015;. ca. 4. Božić D, Milenković M, Ivković B, Ćirković I. Antibacterial activity of. lio te. three newly-synthesized chalcones& synergism with antibiotics against clinical isolates of methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Indian J Med Res. 2014;140(1):130-7.. Bi b. 5. Tamariz J, Agapito J, Horna G, Tapia E, Vicente W, Silva M, Zerpa R, Guerra H. Staphylococcus aureus resistente a meticilina adquirido en la. comunidad aislados en tres hospitales de Lima-Perú. RevMedHered 2010;21:4-10.. 6. Yuen J, Chung T, Loke A. Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) Contamination in Bedside Surfaces of a Hospital Ward and the. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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(45) M. ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Bi b. lio te. ca. de. ANEXOS. 44 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO N°1: REGISTRO DE IDENTIFICACIÓN DEL ESPÉCIMEN Tropaeolum majus EN EL HERBARIUMTRUXILLENSE DE LA. Bi b. lio te. ca. de. M. ed. ici. na. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. 45 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO N°2: PREPARACIÓN DEL MATERIAL BOTÁNICO Y DEL. ed. ici. na. EXTRACTO ETANÓLICO DE Tropaeolum majus “MASTUERZO”. Fotografía N°2.Secado de las hojas y flores en la estufa a 40°C.. Bi b. lio te. ca. de. M. Fotografía N°1. Hojas y flores de Mastuerzo. Fotografía N°3. Pulverización en un mortero de hojas y flores de mastuerzo. Fotografía N°4. Tamizaje de hojas y flores de mastuerzo. Fotografía N°5. Polvo de hojas y flores de mastuerzo luego de tamizaje.. 46 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(48) na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ici. Fotografía N°6. Macerado de hojas y flores de mastuerzo.. Bi b. lio te. ca. de. M. ed. Fotografía N°7 y 8. Filtración al vacío del extracto etanólico de las hojas y flores de mastuerzo.. Fotografía N°9. Extracto etanólico seco de las hojas y flores de mastuerzo.. Fotografía N° 10 y 11. Preparación de los extractos etanólicos de las hojas de mastuerzo: 1).210,7µg/mL, 2). 158,02 µg/mL, 3). 105,35 µg/mL, 4). 52,675 µg/mL, 5). 10,535 µg/mL. ),2.(15%),3.(30%).. 47 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(49) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO N°3: RESULTADOS DE MEDICIÓN DE HALOS INHIBITORIOS Y CONTEO DE UFC. Tabla N°1: Medidas de los diámetros de inhibición del crecimiento de SARM ATCC 25923con las diferentes concentraciones de extracto etanólico de. 52.675. 105.35. 158.025. 1. 7. 12. 13. 10. 2. 10. 11. 13. 3. 8. 9. 4. 8. 7. 5. 9. 9. 6. 8. 7. 7. 10. 9. 8. 9. 7. 9. 210.7. vancomicina. etanol. 16. 16. 7. 16. 15. 6. ici. 10.535. ed. 11. 15. 13. 12. 14. 15. 7. 12. 11. 17. 14. 6. 11. 10. 17. 15. 8. 9. 11. 15. 15. 7. 11. 17. 7. 12. 11. 20. 14. 7. M. 13. de. diámetros (mm). N° de repeticiones. ca. concentración (ug/mL). na. Tropaeolum majus, Vancomicina y etanol 70%:. 12. 11. 7. 10. 13. 12. 20. 15. 7. 12. 7. 10. 14. 11. 20. 16. 7. 13. 10. 9. 14. 12. 20. 15. 8. 7. 10. 20. 17. 6. 8. 7. 9. 13. 20. 15. 6. Bi b. lio te. 10. 8. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2015.. 48 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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