Efecto del extracto Etanólico de hojas de Piper angustifolium Matico sobre el crecimiento de Proteus mirabilis en condiciones de laboratorio

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ESCUELA DE POSTGRADO. RA DO. -U. NT. SECCIÓN DE POSTGRADO EN CIENCIAS BIOLÓGICAS MAESTRIA EN CIENCIAS MENCIÓN EN MICROBIOLOGÍA CLÍNICA. TESIS. TE C. A. DE. PO. SG. EFECTO DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE HOJAS DE Piper angustifolium “MATICO” SOBRE EL CRECIMIENTO DE Proteus mirabilis EN CONDICIONES DE LABORATORIO.. IO. PARA OPTAR EL GRADO DE MAESTRO EN CIENCIAS CON. Autor:. BI. BL. MENCION EN MICROBIOLOGÍA CLÍNICA. Blga. Linda Cristina Zavaleta Castro Asesor: Dra. Gina Genara Zavaleta Espejo TRUJILLO – PERÚ 2018 Registro Nº…………….. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. JURADO CALIFICADOR. DE. PO. SG RA DO. Presidente. -U NT. Dr. Heber Robles Castillo. Dr. Gina Zavaleta Espejo Miembro. BI B. LI O. TE CA. Dr. José Antonio Saldaña Jiménez Secretario. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A Dios A Dios, mi señor, el todo poderoso por ser mi fortaleza y guía en todo momento, por haberme puesto a las personas ideales que me han apoyado y permitido realizar. -U NT. esta investigación que ha concluido satisfactoriamente.. SG RA DO. A mis familiares.. A mis padres Segundo Zavaleta y Raquel Castro, por ser el pilar fundamental en todo lo que soy, en toda mi educación,. PO. tanto académica, como de la vida, por su incondicional. apoyo. perfectamente. DE. mantenido a través del tiempo.. TE CA. A mis hermanos Junior y Briam por su apoyo, cariño y por estar en esos momentos más importantes de mi vida.. LI O. A mi amado esposo Anthony, por estar. BI B. conmigo en aquellos momentos en que el. A mi maestra.. estudio y el trabajo ocuparon mi tiempo y. Dra. Gina Zavaleta Espejo por su gran. esfuerzo. Gracias por toda tu paciencia y. apoyo, consejo, motivación y paciencia. ayuda.. para la culminación de mi tesis.. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. Al laboratorio de Biología Celular y Molecular. SAM 101. Departamento de Ciencias. -U NT. Biológicas. Escuela Académico Profesional de Ciencias Biológicas. Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad Nacional de Trujillo, por el apoyo brindado para el desarrollo de la. SG RA DO. presente tesis.. A mis profesores; Dra. Gina Zavaleta Castro, Dr. José Saldaña Jiménez y amigos; Roxana Untol Paredes, Karina Cholan Pacheco por estar siempre presentes en mi vida profesional y. PO. personal y a todas las personas que colaboraron y que hicieron posible el logro de una de. BI B. LI O. TE CA. DE. mis metas, mi más profundo y sincero agradecimiento.. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. -U NT. Señores miembros del jurado:. Dando cumplimiento con lo dispuesto en el Reglamento de la Escuela de Postgrado. SG RA DO. de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo en consideración el presente informe de tesis titulada:. “Efecto del extracto etanólico de hojas de Piper angustifolium “matico” sobre el crecimiento. PO. de Proteus mirabilis en condiciones de laboratorio.”. BI B. LI O. TE CA. para vuestra aprobación.. DE. El mismo que dejo a su criterio para su dictamen esperando reunir los requisitos. Blgo. Linda Cristina Zavaleta Castro. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Resumen El objetivo de la presente investigación fue determinar el efecto de las concentraciones del extracto etanólico de hojas de Piper angustifolium “matico” sobre el crecimiento de Proteus mirabilis en condiciones de laboratorio. Para obtener los extractos etanólicos de hojas de P. angustifolium “matico” se colocaron 38 g de polvo de hojas a destilación en el equipo de soxlet con 200 ml. -U NT. de etanol al 95%, el destilado obtenido se secó con aire térmico y todo lo obtenido se diluyo en 10ml de twenn 80%, obteniéndose una solución madre, luego se hicieron diluciones (10,15, 20, 25 y 30 mg/ml). Se preparó el inoculo. SG RA DO. de P. mirabilis con un nivel de turbidez del tubo N° 0.5 en la escala de Mc Farland y fue sembrado en agar Muller Hinton; para evaluar el efecto del extracto se empleó el método originalmente descrito por Kirby-Bauer con discos de papel Watman N°4 de 7mm de diámetro en los cuales se inyecto 30 ul de cada dilución del extracto, posteriormente fueron secados en a 30°C, a continuación se. PO. colocaron 5 discos por cada placa: 3 discos con una misma dilución, más un. DE. control positivo (disco de ciprofloxacino) y un control negativo (disco impregnado en Twenn) sobre la superficie de las placas sembradas, las mismas. TE CA. que fueron incubadas a 37ºC durante 24 horas, transcurrido este tiempo, fueron medidos los diámetros (mm) de los halos de inhibición.. LI O. Los resultados muestran las diferencias significativas entre las diferentes concentraciones del extracto utilizado contra el microorganismo ensayado. El. BI B. efecto del extracto etanólico de las hojas de P. angustifolium fueron aumentando conforme se aumentó la concentración, obteniendo un halo de inhibición de hasta 10 mm en la concentración de 10 mg/ml y de hasta 18.7 mm en la concentración. de 30 mg/ml, esto se debería a los flavonoides produciría la inhibición del crecimiento de P. mirabilis.. Palabras clave: extracto etanólico, Piper angustifolium, Proteus mirabilis.. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Abstract. The objective of the present investigation was to determine the effect of the ethanolic extract concentrations of Piper angustifolium leaves "matico" on the growth of Proteus mirabilis under laboratory conditions. To obtain the ethanolic extracts of leaves of P. angustifolium "matico", 38 g of leaf powder were distilled in the soxlet equipment with 200. -U NT. ml of 95% ethanol, the obtained distillate was dried with thermal air and all the obtained it was diluted in 10 ml of twenn 80%, obtaining a stock solution, then dilutions were made (10, 15, 20, 25 and 30 mg / ml). The inoculum of P. mirabilis was prepared with a turbidity. SG RA DO. level of tube No. 0.5 on the Mc Farland scale and was seeded on Muller Hinton agar; To evaluate the effect of the extract, the method originally described by Kirby-Bauer with Watman No. 4 paper discs of 7mm diameter was used in which 30 ul of each extract dilution was injected, then dried at 30 ° C, then 5 discs were placed per plate: 3 discs with the same. PO. dilution, plus a positive control (ciprofloxacin disc) and a negative control (disc impregnated. DE. in Twenn) on the surface of the sown plates, the same ones that were incubated 37ºC for 24 hours, after this time, the diameters (mm) of the inhibition zones were measured.. TE CA. The results show the significant differences between the different concentrations of the extract used against the microorganism tested. The effect of the ethanolic extract of the. LI O. leaves of P. angustifolium was increasing as the concentration was increased, obtaining an inhibition halo of up to 10 mm in the concentration of 10 mg / ml and up to 18.7 mm in the. BI B. concentration of 30 mg / ml , this would be due to the flavonoids would produce the inhibition of the growth of P. mirabilis.. Key words: ethanolic extract, Piper angustifolim, Proteus mirabilis.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE. JURADO CALIFICADOR ................................................................................................................... ii DEDICATORIA ................................................................................................................................iii. -U NT. AGRADECIMIENTO ........................................................................................................................iv PRESENTACION.............................................................................................................................. v. SG RA DO. RESUMEN ......................................................................................................................................vi. ABSTRACT ............................................................................................................... vii INDICE.......................................................................................................................................... viii. PO. INTRODUCCION ............................................................................................................................. 1 MATERIAL Y METODOS ................................................................................................................. 5. DE. RESULTADOS ................................................................................................................................. 8. TE CA. DISCUSIÓN................................................................................................................................... 10. CONCLUSIÓN ........................................................................................................... 12. LI O. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................................................................... 13. BI B. ANEXOS ................................................................................................................. 19. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1. Introducción. En el Perú como en otros países en vías de desarrollo, las plantas medicinales representan la principal herramienta terapéutica en medicina tradicional. De acuerdo con la Organización Mundial de Salud (OMS) las especies vegetales son la mejor fuente de fármacos para la humanidad. El uso de. NT. plantas en el tratamiento y en la cura de enfermedades forma parte de la cultura. -U. de muchas civilizaciones. La medicina tradicional, es utilizada ampliamente y. RA DO. desde tiempos ancestrales en nuestro país. Estos conocimientos han llegado hasta nosotros gracias a las costumbres y las tradiciones de nuestros. SG. ancestros, cuyo uso debemos revalorar y orientar teniendo en cuenta la. PO. investigación científica que permite establecer no solo la efectividad y la. DE. bondad terapéutica, sino también la seguridad con que los pacientes pueden. TE C. primaria 1,2,3,4,5.. A. emplearlos sabiendo que su uso está especialmente orientado a la atención. IO. La flora peruana ofrece grandes posibilidades para el descubrimiento. BL. de nuevos compuestos con actividad anti fúngica y antibacteriana. Se calcula. BI. que el Perú posee unas 25 000 especies de plantas conocidas, con 17144 especies de plantas con Flores (Angiospermas y Gimnospermas), de las cuales 5354 (31.3%), son especies nativas 6. Las piperáceas pertenecen a la familia de Angiosperma del Orden Piperales. Consta de 6 géneros y unas 300 especies, que se distribuyen por las regiones tropicales del planeta, existiendo en la amazonia peruana por lo menos 3 géneros y más de 120 especies, que representan materia prima. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. importante para obtener aceites esenciales con diversos usos para las industrias varias. Las plantas, en particular, representan un alto potencial terapéutico si se considera que desde la antigüedad son utilizadas para el tratamiento de diversas enfermedades infecciosas 6, 7. Las plantas del género Piper se emplean como antiinflamatorio, hemostático, antiséptico y anti-infeccioso, descongestivo, contra la leucorrea. NT. y antiparasitario son ampliamente utilizadas en la medicina tradicional. Piper. -U. angustifolium “matico” posee las siguientes propiedades, ácido artanico,. RA DO. resinas, sustancias amargas “maticina”, taninos, alcaloides, saponinas, flavonoides triptenoides. Los tatinos contribuyen a la actividad cicatrizante;. SG. los compuestos fenólicos son usadas en tratamientos de hiperglucemia; las. PO. saponinas contribuyen a disminuir las complicaciones de hipertensión arterial; flavonoides tienen propiedades antioxidantes y protectoras de la. DE. membrana celular, así mismo se comprobó la actividad antifúngica y. TE C. A. antibacteriana. 8, 9, 10, 11, 12, 13. IO. Las infecciones del tracto urinario son muy frecuentes y por lo tanto. BL. sigue siendo estudiada por los profesionales de salud. Las bacterias que. BI. producen la mayor parte de las infecciones urinarias por orden de frecuencia son: Escherichia coli, Staphylococcus sp, Proteus mirabilis, Streptococcus sp, Klebsiella pneumoniae, Pseudomona aeruginosa, Enterobacter sp 14. La. familia. Enterobacteriaceae. está. formada. por. bacilos. gramnegativos, anaerobios facultativos, no formadores de esporas, fermentadores de glucosa, no presentan actividad de citocromooxidasa (son oxidasa negativa), reducen nitratos a nitritos y las especies móviles lo son mediante flagelos. Están muy diseminadas en la naturaleza, las encontramos 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. en el agua, en la tierra, en los animales, etc. En el hombre se localizan en las vías aéreas superiores (en pequeña proporción), en la piel (sobre todo en la región perianal), en el intestino y en la uretra anterior 13, 15. El géneros Proteus, está muy difundido en la naturaleza, se lo encuentra en el suelo, agua, aguas servidas, materiales de animales en descomposición, tracto intestinal del hombre, etc. Se presenta con flagelos. NT. perítricos muy abundantes que hacen que “hormiguee” sobre la superficie de. -U. un medio sólido de cultivo. Dentro del género Proteus las especies más. RA DO. importantes son: Proteus mirabilis (indol negativo) y P. vulgaris (indol positivo). P. mirabilis es lactosa negativos y es productor de ureasa, factor de. SG. patogenicidad en la producción de infecciones urinarias ya que esta enzima. PO. desdobla a la urea (muy abundante en la orina) en amoníaco y dióxido de carbono. El amoníaco es tóxico para las células con lo que se produce la. DE. irritación del epitelio urinario, lo que desencadena una reacción inflamatoria.. TE C. A. La alcalinidad alcanzada por la orina predispone a la litiasis urinaria 15.. IO. Dado que la uretra está cerca del ano, P. mirabilis puede entrar en el. BL. tracto urinario, por limpiarse de atrás hacia adelante luego de las deposiciones. BI. la materia fecal toma contacto con la abertura de la uretra y causar infección. También se produce infección cuando la bacteria contamina catéteres y otro equipamiento médico urinario. Una vez que entran en el tracto urinario, estos organismos se multiplican. Esta acumulación bacteriana produce infección en el tracto urinario y puede llevar a una infección renal grave o a una septicemia 16.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En la actualidad los antibióticos actúan interfiriendo con algún mecanismo específico del metabolismo celular para inhibir el crecimiento del microorganismo o destruirlo. Para mantener la especie, las bacterias han desarrollado capacidad de resistir a dicho mecanismo específico y sobrevivir a la acción de los antibióticos. El antibiótico, por una parte, selecciona cepas. NT. resistentes originadas por mutación genética espontánea o por otras vías. -U. como el material genético transportado por plásmidos o transposonas, son. RA DO. capaces de transferir resistencia única o múltiple, intraespecie o interespecies. De acuerdo a lo planteado, el aumento de la resistencia. SG. antimicrobiana a los antibióticos es un problema de gran transcendencia en. PO. las últimas décadas y frente a la resistencia múltiple que expresan las. DE. bacterias surge la necesidad de búsqueda de nuevos antimicrobianos; 17,18 por ello hace propicio la elaboración del presente proyecto de investigación que. TE C. A. tiene por objetivo determinar el efecto de las concentraciones de 10 mg/mL, 15 mg/mL, 20 mg/mL, 25 mg/mL y 30 mg/mL del extracto etanólico de hojas. BL. IO. de Piper angustifolium “matico” sobre el crecimiento de Proteus mirabilis. BI. en condiciones de laboratorio.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. Material y Métodos 1. Material Biológico. Las hojas de Piper angustifolium “matico”, se recolectaron en la Provincia de Sánchez Carrión, Distrito de Huamachuco, el cual se encuentra entre los 3500 msnm. Técnicas y Métodos.. NT. 2.. -U. Con respecto a las hojas de Piper angustifolium se depositó en bolsas de. RA DO. malla. Finalmente se procedió a identificar la especie plantas de acuerdo a las directrices de la OMS bien las plantas 19, 20.. SG. Luego se lavó las hojas en agua con 1% de lejía, se secó en estufa con. PO. circulación 27 °C durante 24 horas. La materia seca se molió con en un. DE. molino hasta obtener polvo. El producto se almacenó en frascos de vidrio. A. ámbar. Este material se utilizó para procesos de extracción 21.. TE C. 3. Preparación de los extractos.. IO. Se colocó 38g de polvo de hojas de matico a destilación en el equipo de soxlet. BL. con 200 ml de etanol al 95%, el destilado se filtró y se colocó en una placa y. BI. se procedió a secar con ventilador a temperatura menor a 40°C, el secado duró aproximadamente 3 horas, lo obtenido del secado se diluyo en 10 ml de Twenn 80% lo obtenido corresponde a la solución madre (al 100%). Las diferentes diluciones (10, 15, 20, 25 y 30mg/mL) del extracto etanólico de hojas de Piper angustifolium “matico” se prepararon a partir de la solución madre obtenida al 100%.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 4.. Microorganismo. Proteus mirabilis fue donado por el Laboratorio Referencial – La Libertad, 2014.. 5. Reactivación de la cepa de P. mirabilis. Se utilizó agar nutritivo mediante la técnica de siembra en estría 22, se aisló. -U. NT. la cepa de P. mirabilis por 24 horas para la obtención de UFC.. RA DO. 6. Preparación del inoculo 6.1. Método de crecimiento.. SG. Una vez obtenido las colonias de P. mirabilis, se tomó con un asa de 1 a 2. PO. colonias con las mismas características morfológicas y se inoculó en un tubo. DE. con solución salina fisiológica hasta que alcance la turbidez de 0,5. TE C. A. (1x108UFC/mL) Mc Farland 23. 6.2. Método de difusión.. BL. IO. Se empleó el método recomendado por el Sub Comité de Ensayos de. BI. Susceptibilidad del NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards), basado en el procedimiento descrito originalmente por KirbyBauer 24. Para lo cual se cortaron discos de papel watman N° 4 de 7 mm de diámetro en los cuales se inyecto 30 ul de cada dilución del extracto, posteriormente fueron secados en estufa a 30°C. En 5 placas Petri con agar Mueller-Hinton se procedió a realizar la siembra del microorganismo (Proteus mirabilis) según el nivel de turbidez de 0.5 de Mac Farland. A continuación, se colocaron 5 discos por cada placa: 3 discos 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. con una misma dilución, más un control positivo (disco del medicamento ciprofloxacino) y un control negativo (disco seco previamente impregnado en Twenn) sobre la superficie de las placas sembradas, las mismas que fueron incubadas a 37ºC durante 24 horas, transcurrido este tiempo, fueron medidos los diámetros (mm) de los halos de inhibición. 7. Evaluación de los tratamientos. NT. El efecto de las concentraciones del extracto etanólico de hojas de Piper. -U. angustifolium fueron determinados por el diámetro de los halos de inhibición. RA DO. que se obtuvieron por ausencia de crecimiento bacteriano alrededor del disco con tratamiento colocado en la placa sembrada. Para esto se han fijado tres. SG. categorías: sensible (S), intermedia (I) y resistentes (R). Las interpretaciones. PO. por regla general, son las siguientes: un diámetro de inhibición de 20 a 35. DE. mm es indicativo de una cepa altamente sensible al tratamiento, mientras que. A. diámetros de zona de inhibición inferiores a 15 mm son presentadas por las. TE C. cepas resistentes; finalmente diámetros de zona de inhibición del crecimiento. BI. BL. IO. entre 16 mm y 19 mm se considera intermedio.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III. Resultados. NT -U. 40 35. RA DO. *. 30 25 20. *. SG. 15. *. *. *. *. 0 3. 5 2. 0 2. o. tr. n. o. IO. C. C. o. n. tr. o. l. l. n. TE C. p. e. o. g. s. A. a. it. 1. iv. v ti. 1. o. 0. 0. DE. 5. 5. PO. 10. o. D i á m e t r o h a lo s d e i n h i b i c ió n ( m m ). Figura N° 1: Promedio de los diámetros (mm) de los halos de inhibición formados por el efecto de las concentraciones del extracto etanólico de Piper angustifolium sobre el crecimiento de P. mirabilis a las 24 horas de incubación.. BL. C o n c e n t r a c io n e s d e l E x t r a c t o e t a n ó li c o ( m g / m L ). BI. Los promedios de los Diámetros de los halos de inhibición fueron de 29.5mm para el control positivo (ciprofloxacino), de 0.0mm para el control negativo (twenn80%), de 9.7mm para los discos de 10mg/ml, de 12.2mm para los disco 15 mg/ml, de 14.7mm para los discos de 20mg/ml, de 16mm para los discos de 25mg/ml y de 18mm para los discos de 30 mg/ml.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N°1. Análisis de varianza del efecto del extracto etanólico de Piper angustifolium “matico” sobre el crecimiento de Proteus mirabilis en. gL 4 10 14. F valor. Sig. 0.00. 121.054. SG. p<0.05 existe diferencia significativa. Media cuadrática 32.846 0.271. -U. Entre grupos Dentro de grupos Total. Suma de Cuadrados 131.384 2.713 134.097. RA DO. Fuente. NT. condiciones de laboratorio. BI. BL. IO. TE C. A. DE. PO. Los datos obtenidos en el análisis de varianza en la tabla N°1, a partir de los resultados presentes en la Figura N°1, demuestran la existencia de diferencia significativa entre las diferentes concentraciones.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. Discusión En la actualidad, la resistencia de Proteus mirabilis a los antimicrobianos farmacéuticos disponibles tiende a incrementarse, lo que motiva la búsqueda en las plantas de nuevos productos que sean alternativas terapéuticas para controlar las infecciones causadas por este microorganismo y superar los problemas de resistencia bacteriana y los efectos secundarios de algunos. NT. agentes disponibles actualmente. Al respecto, García Lujan recomienda el. -U. uso de extractos vegetales y aceites esenciales como alternativa importante. RA DO. para el tratamiento de estas enfermedades, debido a que las bacterias no han desarrollado mecanismos de resistencia en contra de los principios activos de. PO. SG. las plantas 4, 25, 26, 27.. DE. Con relación a los resultados obtenidos en el figura N° 1 podemos. TE C. A. observar que el diámetro de los halos de inhibición formados por el extracto etanólico de las hojas de Piper angostifolium fueron aumentando conforme. IO. se aumentó la concentración del extracto, obteniendo un halo de inhibición. BL. de hasta 10 mm en la concentración de 10 mg/ml y de hasta 18.7 mm en la. BI. concentración de 30 mg/ml; Estos resultados están en relación a los encontrados por Tirillini et al. 28. quien realizó la evaluación de la actividad. bactericida in vitro de los aceites esenciales de Piper angustifolium sobre bacterias gram negativas como Pseudomonas aeruginosa y Escherichia coli, esta última involucrada generalmente con las infecciones del tracto urinario en mujeres . Así también se demostró que el extracto hidroalcoholico de Piper angostifolium tiene una alta actividad bactericida sobre Helycobactyer. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. pylori al obtener halos de inhibición de 16 a 20 mm de diámetro. 29.. Otros. autores demostraron que el extracto de Piper angostifolium también tiene acción antiparasitaria sobre Leishmania infantum, donde el índice de infección disminuyó, en un rango de 88.1 a 100% desde la concentración de 6.25 ug/ml hasta 50 ug/ml.; esta acción anparasitaria se debe principalmente a la presencia de sustancia como los flavonoides que se encuentran como. NT. principio activo del extracto etanólico de Piper angustifolium 30, 31.. -U. Se comprobó que este metabolito secundario (flavonoides) es capaz de. RA DO. inhibir la actividad antifungica y antibacteriana de Helicobacter pylori; Candida albicans, Staphylococcus aureus; así mismo sobre el efecto. SG. antibacteriano de Escherichia coli 6, 32, 33.. PO. Estudios demostraron que los flavonoides presentan una buena inhibición. DE. sobre las bacterias gram negativas como por ejemplo Helicobacter pylori el. A. cual se debería a la hiperacidificación en la interfase de la membrana. TE C. plasmática de los microorganismos, o la acidificación intracelular, que. IO. resulta en la inhibición de la bomba H+ K+ ATPasa necesaria para la síntesis. BL. del ATP y esto puede estar relacionado con la inactivación de enzimas. BI. celulares que causan cambios en la permeabilidad de la membrana de H. pylori, todo esto afectaría las reacciones en cadena de las bacterias, llevando a su destrucción celular. Por consiguiente es probable que ocurra el mismo efecto antibacteriano sobre la bacteria Gram negativa en estudio Proteus mirabilis 32, 34, 35.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Todos estos estudios corroboran lo encontrado en esta investigación, que la planta investigada (P. angustifoilum “matico”) tiene actividad antimicrobiana contra P. mirabilis, donde según el análisis estadístico presentado en la Tabla N°1 existe diferencia significativa entre las diferentes concentraciones utilizadas contra el microorganismo ensayado; sin embargo. NT. a pesar de que existen diversos trabajos sobre la acción antimicrobiana de. -U. Piper anfostifolium, se debería evaluar el efecto in vivo para así mejorar la. SG. RA DO. eficacia del extracto sin causar ningún daño colateral en las personas.. DE. PO. V. Conclusiones. A. Las diferentes concentraciones del extracto etanólico de hojas de Piper. TE C. angustifolium “matico”, presentan efecto sobre el crecimiento de Proteus. BL. IO. mirabilis en condiciones de laboratorio.. BI. A mayor concentración del extracto etanólico de Piper angustifolium. mayor actividad antimicrobiana de Proteus mirabilis.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VII. Referencias Bibliográficas. 1. Ruiz, Q. y Roque, A. Determinación de la actividad antifúngica contra Candida albicans y Aspergillus niger de 10 plantas medicinales de 3 departamentos del Perú. Tesis Químico Farmacéutico. Universidad Nacional. Mayor. de. San. Marcos.2013.45pp.. Disponible:www.sisbib.unmsm.edu.pe/BVRevistas/ciencia/v12_n1/pdf/. NT. a07v12n1.pdf.. -U. 2. Villavicencio V., O. Criterios de Aplicación Clínica de las Plantas. RA DO. Medicinales. Manual de Fitoterapia. Perú. 2009. 366: 347pp. 3. Organización mundial de salud. Infecciones intestinales. Serie de. SG. informes técnicos N°288. Ginebra. 1964.. PO. 4. Zuta, A. N. Actividad antibacteriana in vitro de extractos de Piper angustifolium (matico) y Matricaria chamomilla (manzanilla) en cepas. DE. de Staphylococcus aureus con resistencia múltiple". Universidad. 31pp.. TE C. A. Nacional del Callao. Facultad de Ciencias de la Salud. Perú.2013. p.. BL. IO. 5. Cárdenas, J. Comprobación del efecto cicatrizante y antiedematizante. BI. de Baccharis crispa (Carqueja), Equisetum arvense (Cola de Caballo) y Piper angustifolium (Matico) en ratones albinos. Universidad Nacional del Callao. Perú. 2010. 6. Rojas, A., García, T., Cortez, G., Gómez, T., Cornejo y col. Caracterización de aceites esenciales de tres plantas de la familia Piperáceas. para. su. aprovechamiento,. Región. Loreto-. Iquitos.. Universidad Nacional de la Amazonía Peruana. Perú. 2009. 4-5p.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 7. Huamaní, A. M. y Ruiz, Q. Determinación de la actividad antifúngica contra Candida albicans y Aspergillus niger de 10 plantas medicinales de 3 departamentos del Perú. Tesis Químico Farmacéutico. Universidad Nacional de San Marcos, Perú. 2005. 43pp. 8. Jiménez, A., Pillco, A., Flores, N., Gonzáles, E. y Bermejo, P. Evaluación genotóxica del aceite esencial y el extracto etanólico de. 2011.. 19. (2).. en:. RA DO. www.revistasbolivianas.org.bo/scielo.php.. Disponible. -U. España.. NT. Piper elongatum Vahl. Universidad Complutense de Madrid. Madrid.. 9. Arroyo, J., Pareja, B. y Raez, J. Efecto cicatrizante del Piper angustifolium R. & P. sobre lesiones de piel inducidas en animales de. SG. Experimentación. Perú. 2009.10 (1).48-51p.. PO. 10. Galvez, L., Kwon, Y., Apostolidis, E. y Shetty, K. Compounds,. DE. antioxidant activity and in vitro inhibitory potential against key enzymes. TE C. A. relevant for hyperglycemia and hypertension of commonly used medicinal plants, herbs and spices in Latin America. Bioresource. IO. Technology. 2010. 101pp.. BL. 11. Arroyo, J., Hañari, R., Tinco, A., Baca, D., Domínguez, L. y Buendía,. BI. J. Efecto antihipertensivo del extracto de Piper aduncum ‘matico’ sobre la hipertensión inducida por L-NAME en ratones. Anales de la Facultad de Medicina. Perú. 2011. ISSN 1025-5583. 73. 4pp.. 12. Escamilla, J. C., Cuevas, M. E., y Guevara, F. J. Flavonoides y sus acciones antioxidantes. Monografia. Facultad de Medicina, UNAM. Perú.. 2009.. 52. (2):73-75p.. Disponible:. www.medigraphic.com/pdfs/facmed/un-2009/un092g.pdf. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 13. Treviño, M. Proteus mirabilis productor de AmpC plasmídica en el Área Sanitaria de Santiago de Compostela: prevalencia y caracterización molecular por rep-PCR y MALDI-TOF MS. Servicio de Microbiología. Complejo Hospitalario Universitario de Santiago de Compostela. Chile. 2012. 25(2):122-128p. 14. Estela, M. Infecciones Urinarias. Hospital Escuela FCV. UBA 2010.. NT. Disponible en: www.cvjujuy.com.ar/infeccionesurinarias.. -U. 15. Merino, L. y Losc, L. Microbiología e Inmunología Familia. RA DO. Enterobacteriaceae. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Medicina.2010.. 16. Zaykoski, L. Cuáles son las causas de la ITU por Proteus mirabilis.. SG. España. 2012. Disponible en: www.ehowenespanol.com.. PO. 17. Oliveira, C., De Paula Ramos, F., De Melo Mota, C.Resistencia. DE. antimicrobiana de Salmonella typhi identificadas en el Estado de Pará,. TE C. A. Brasil, Rev Pan-Amaz Saude.brasil. 2010; 1(2):61-65p. 18. Güerri, S. M. Estudio de la Resistencia a Antibióticos [Beta]-Lactámicos. IO. En Aislamientos Clínicos de “Salmonella Typhimurium”. Estudio Para. BL. Optar Al Grado De Doctor. Universidad Complutense De Madrid-. BI. Facultad De Farmacia - Departamento De Microbiología. España.2002. ISBN: 84-669-2031-5.. 19. Directrices de la OMS sobre buenas prácticas agrícolas y de recolección (BPAR) de plantas medicinales Organización Mundial de la. Salud.. Ginebra.. 2003.. 27. pp.Disponible. en:. http//www.who.int/medicinedocs/s5527s/s5527s.pdf.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 20. Organización Mundial de Salud. Guía de Tratamiento de la Enfermedades Infecciosas. OPS-D.C.:20037-2897.Washinton-E.U.A, 2004. 21. Calle, J. y Ferreira, S. Estudio Fotoquímico del aceite escencial de Piper lenticellosum C. DC. Revista Colombiana de Ciencias quimicofarmaceutico. Universidad Nacional de Colombia. Colombia.2006. 84pp.. Nacional. 3pp.2009.Disponible. -U. Tecnológica. NT. 22. Santambrosio, E. Siembra y recuento de microorganismos. Universidad. RA DO. en:www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/practicoIII.pdf. 23. Sacsaquispe, C. R., Velásquez, P. J., Suarez, M. V. y col. Manual de Procedimientos para la Prueba de Sensibilidad Antimicrobiana por el. SG. Método de Disco Difusión. Instituto Nacional de Salud. 2002.17pp.. Demstadt. 1.. DE. 6100. PO. 24. Manual de Medios de Cultivo MERCK. Frankturter Strasse 250 DAlemania.. 5pp.. Disponible. en:. TE C. A. www.docuteka.net/manual-de-medios-de-cultivo-merck-pdf. 25. Garcia Lujan Concepción. Actividad Antibacteriana de extractos. IO. Vegetales en cepas Hospitalarias de Staphylococcus aureus con. BL. Resistencia Múltiple. Universidad Autónoma Agraria Antonio Narro.. BI. México. 2006. 1-5p.. 26. Liscano, A. y Vergara, Y. Evaluación de la actividad antimicrobiana de los extractos etanolicos y/o aceites escenciales de las especies vegetales Valeriana pilosa, Hesperomeles ferruginea, Myrciantes rhopoloides y Passiflora. manicata. frente. a. microorganismos. patógenos. y. fitopatogenos. Tesis Microbiólogo Industrial. Pontificia Universidad Javeriana. Colombia. 2008. Lxii.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 27. Matute, C. M. Evaluación in Vitro del extracto de Piper angustifolium (matico) y la clorhexidina como antisepticos bucales. Tesis de Cirujano Dentista. Universidad Nacional Federico Villarreal. Perú. 2009. 38pp. Disponible: www.cop.org.pe/bib/tesis/mariaelenamatutecenteno.pdf 28. Tirillini B, Velasquez E, Pellegrino R. “Chemical composition and antimicrobial activity of essential oil of Piper angustifolium.” Planta Italia.. 1996,. 62. (4):. 372-373p.. NT. Med.. -U. disponible:www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8792674. RA DO. 29. Claros M, Bilbao P, Damiani E, Gonzáles E, Estensoro M, Alvarez M. Actividad anti-Helicobacter pylori de Plantago major, Clinopodium bolivianum, Calendula officinalis y Piper angustifolium por el método de. SG. difusión de disco. BIOFARBO .2007. XV.37-42p.. PO. 30. Bosquiroli Lauriane S.S., Demarque Daniel P., Rizk Yasmin S.,. DE. Cunha Marillin C., Marques Maria Carolina S., Matos Maria de. TE C. A. Fátima C. et al. In vitro anti-Leishmania infantum activity of essential oil from Piper angustifolium. Brasil. Rev. bras. Farmacogn. 2015. 25(2).. IO. 124-128p.. BL. 31. Arroyo, J., Bonilla, P., Tomás, G., Huamán, J. Estudio fitoquímico del. BI. extracto etanólico y de las fracciones de las hojas de Piper aduncum “MATICO”. Perú. 2011. Rev. Per. Quím. Ing. Quím. Vol. 14 N. 1. 64 pp.. 32. Huaman, C., Raez, B., Arroyo, J. y col. Efecto gastroprotector y antisecretor de un fitofármaco de hojas de matico (Piper aduncum). Revista Perú Med Exp Salud Publica. Perú. 2013. 30 (4): 7pp. Disponible:. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. www.dev.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1726...lng= pt&nrm. 33. Flores, P. M. y Puente, P. M. Actividad Antibacteriana del Aceite Esencial de Piper aduncum “MATICO” SOBRE Escherichia coli. Universidad Peruana los Andes Facultad de Ciencias de la Salud. Escuela Profesional de Farmacia y Bioquímica. Perú. 2016. 49pp. Disponible:. NT. www. repositorio.upla.edu.pe/handle/UPLA/113. -U. 34. Soto, V. M.Estudio fitoquímico y cuantificación de flavonoides totales. región. RA DO. de las hojas de Piper peltatum L. y Piper aduncum L. procedentes de la Amazonas.. Perú.. 2015.. 112pp.. Disponible:www.revistas.ucv.edu.pe/index.php/UCV-. SG. SCIENTIA/article/ viewFile /858/672. PO. 35. Soto, V. A., Soto, V. K. y Serrano, B. A. Metabolitos secundarios y. DE. efecto antibacteriano in vitro del extracto hidroetanólico de las flores de. TE C. incas”.. A. Cantua buxifolia juss. ex lam. (polemoniaceae) “flor sagrada de los Perú.. 2014.. 21(1):88pp.. BI. BL. 04. IO. Disponible:www.journal.upao.edu.pe/Arnaldoa/article/download/107/1. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXOS. RA DO. -U. NT. Anexo 1: Elaboración del extracto etanólico de hojas de Piper angustifolium “matico”.. b. Extracción a través del. TE C. A. DE. PO. SG. a. Desinfección equipo de las hojas.. d. Secado del extracto a 30°C. BI. BL. IO. c.Filtración del extracto etanólico. e. Preparación de los tratamientos: 10mg, 15mg, 20mg, 25mg, 30mg.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RA DO. -U. NT. Anexo 2: Tubo N° 5 en la escala de Mac Farland.. DE. PO. SG. Anexo 3: Método de difusión con discos de papel watman (embebidos con las concentraciones del extracto etanólico) expuesto a Proteus mirabilis, después de 24 horas.. 30mg/ml. 30mg. 15mg/ml. BI. BL. IO. TE C. A. 10mg/ml. 20mg/ml 25mg/ml. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. -U. NT. Anexo 4: Concentraciones del extracto etanolico, expuesto a Proteus mirabilis después de 24h a 37°C.. b. 15mg. d. 25 mg. BI. BL. IO. TE C. A. c.20 mg. DE. PO. SG. RA DO. a. 0mg. e. 30 mg.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 5: Concentraciones del extracto etanólico de Piper angustifolium, con sus repeticiones frente al crecimiento de Proteus mirabilis.. Control Negativo. Control Positivo. Disco 10mg/ml. Disco 15mg/ml. Disco 20mg/ml. Disco 25mg/ml. Disco 30mg/ml. 10mm. 11mm. 15mm. 17mm. 18mm. 10mm. 11mm. 14mm. 17mm. 18mm. 9mm. 12mm. 15mm. 16mm. 18mm. 10mm. 13mm. 14mm. 10mm. 12mm. 15mm. 10mm. 13mm. 10mm. 13mm. 9mm. 13mm. 9mm. 12mm. 0mm. 0mm. 0mm. 0mm. 0mm 29mm 30mm. 17mm. 17mm. 16mm. 17mm. 15mm. 16mm. 18mm. 15mm. 16mm. 18mm. 15mm. 16mm. 19mm. 14mm. 17mm. 19mm. 0mm. 0mm. 0mm. 0mm. 0mm. 0mm. 0mm. 0mm. 0mm. 0mm. 30mm. 30mm. 29mm. 29mm. 29mm. 30mm. 30mm. 30mm. 28mm. 29mm. 29mm. 30mm. BI. BL. IO. TE C. A. 30mm. NT. PLACA 5. -U. c. PLACA 4. RA DO. b. PLACA 3. SG. a. PLACA 2. PO. Repeticiones. PLACA 1. DE. Concentraciones. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 6: Promedio de los diámetros (mm) de los halos de inhibición formados por el efecto de las concentraciones del extracto etanólico de Piper angustifolium sobre el crecimiento de P. mirabilis a las 24 horas de incubación.. Placa ¨2¨. Placa ¨3¨. Placa ¨4¨. Placa ¨5¨. Disco. Disco. Disco. Disco. Disco. 10mg/ml. 15mg/ml. 20mg/ml. 25mg/ml. 30mg/ml. Repetición ¨a¨. 9.7 mm. 11.3 mm. 14.7 mm. 16.7 mm. 18.0 mm. Repetición ¨b¨. 10 mm. 12.7mm. 14.7 mm. 16.3 mm. 17.3 mm. Repetición ¨c¨. 9.3 mm. 12.7 mm. 14.7 mm. 16.3 mm. 18.7 mm. Control Negativo. 0.0 mm. 0.0 mm. 0.0 mm. 0.0 mm. 0.0 mm. Control Positivo. 29.7 mm. 29.0 mm. 29.7 mm. 29.3 mm. 29.7 mm. DE. PO. SG. RA DO. -U. NT. Placa ¨1¨. BI. BL. IO. TE C. A. Anexo 7: TUKEY indicando las diferencias signifitivas que presentan las concentraciones Piper angustifolium sobre el crecimiento de Proteus mirabilis.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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